短发卡状RNA特异性抑制表皮生长因子受体对大肠癌细胞凋亡的影响

目的体外构建编码人类表皮生长因子受体(EGFR)的短发卡状RNA(shRNA)的质粒表达载体,观察其对结肠癌LoVo细胞EGFR的特异性抑制作用以及对细胞凋亡的影响。方法体外合成EGFR的DNA模板引物和Pgenesil-1质粒构建编码shRNA的表达载体。应用脂质体Lipofectamine2000转染人结肠癌LoVo细胞,转染成功后以G418筛选4周,实时荧光定量RT-PCR(realtime RT-PCR)和Western-blot检测EGFR的表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果成功的构建了针对EGFR的质粒表达载体。质粒载体成功转染后,EGFR mRNA表达下降了(81.3±2.8)%,蛋白表达下降了(73.4±2.3)%,细胞凋亡增加了(10.1±0.4)%,和对照质粒载体比较差异有统计学意义。结论我们构建的针对EGFR的质粒表达载体可以显著抑制其在人结肠癌LoVo细胞的表达,诱导细胞凋亡,为结肠癌的基因治疗提供了新的思路。