Sim2基因对PC12细胞分化的影响

以pcDNA3-mSim2真核表达载体稳定转染PC12细胞,探讨位于Down综合征关键位点的Sim2基因对PC12细胞分化的影响及其机制。以倒置相差显微镜观察PC12细胞神经突起的变化;以RT-PCR方法检测神经元分化相关基因GAP43和SynapsinⅠmRNA表达水平的变化;流式细胞仪检测GAP43蛋白的表达。RT-PCR结果显示,pcDNA3-mSim2转染后,mSim2 mRNA表达明显上调;与对照组相比,转染mSim2的PC12细胞突起数量显著减少,长度明显变短;GAP43和SynapsinⅠmRNA表达水平明显降低(P<0.05);流式细胞仪检测发现,转染mSim2的PC12细胞GAP43蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。提示Sim2基因可通过影响神经元的分化参与Down综合征的发生。

Sim2基因对PC12细胞周期的影响

观察Sim2基因对PC12细胞周期及细胞周期调控蛋白表达水平影响,初步阐明Sim2基因在Down综合征发病机制中的作用.以脂质体法将pcDNA3-mSim2真核表达载体瞬时转染PC12细胞;以RT-PCR方法检测mSim2基因在PC12细胞的表达;流式细胞仪观察细胞周期分布的变化;RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测细胞周期调节蛋白E(cyclin E)和p27mRNA和蛋白水平的表达变化.RT-PCR结果显示,瞬时转染pcDNA3-mSim2的PC12细胞中有明显的mSim2mRNA表达;流式细胞仪检测发现,与对照组和空载体组相比,转染mSim2后,处于G0/G1期的PC12细胞百分比明显升高(P<0·01),而G2/M期的细胞百分比明显降低(P<0·01);在mRNA和蛋白水平上,转染mSim2的细胞细胞周期蛋白E表达较对照组明显降低;而p27的表达明显升高(P<0·01).以上结果表明,mSim2基因可能通过影响神经元前体细胞的增殖在Down综合征发病机制中发挥了重要作用.

高压氧对帕金森病大鼠多巴胺神经元保护作用的研究

目的探讨高压氧对帕金森病大鼠多巴胺神经元的保护作用。方法将68只雌性SpragueDawley大鼠随机分成5组:注射生理盐水高压氧处理组(A组,n=7)、全程高压氧处理模型组(B组,n=18)、未经高压氧处理模型组(C组,n=7)、造模后高压氧处理组(D组,n=18)、造模前高压氧处理组(E组,n=18)。在实验第1天至第7天给予A组、B组和E组大鼠高压氧治疗;而在实验第8天时,分别向B组、C组、D组及E组大鼠单侧脑黑质内定位注射6羟基多巴胺以制作偏侧帕金森病大鼠模型,给予A组等量生理盐水定位注射。从实验第8天至结束,分别给予A组、B组及D组大鼠高压氧处理;并于造模后第9天,16天及21天每组各处死6只大鼠,取其纹状体用分光光度计测定超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)含量,选用免疫组织化学方法测定黑质区域内酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞数量及胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果与C组比较,B、D、E组大鼠病变侧纹状体内SOD及GSHPx活性显著增高,MDA含量及GFAP表达明显降低,6羟基多巴胺毁损黑质区残存的TH阳性细胞数目明显增加。结论高压氧治疗可以显著提高机体抗自由基损伤功能、减弱胶质细胞效应发挥,从而有效保护脑黑质区多巴胺(DA)能神经元功能。