苦参碱对HT29细胞凋亡影响的实验研究

目的研究去苦参碱对HT29细胞的促凋亡活性及其与胞内[Ca2+]i浓度的关系。方法流式细胞术(FCM)及DNAladder法检测细胞凋亡;应用钙荧光指示剂Fluo-3/AM测定细胞内游离Ca2+浓度。结果 HT29细胞经苦参碱作用24h后,靶细胞的磷脂酰丝氨酸外化率显著高于对照组,其基因组DNA在琼脂糖凝胶电泳中呈典型的梯状带型;HT29细胞内游离Ca2+浓度进行性升高。结论苦参碱触发的HT29细胞凋亡与胞内游离Ca2+浓度升高密切相关。

儿童及青少年上颌窦后鼻孔息肉鼻内镜手术的临床分析

目的探讨儿童及青少年上颌窦后鼻孔息肉鼻内镜手术的方法和临床疗效。方法对25例儿童及青少年上颌窦后鼻孔息肉患者的临床资料进行回顾性分析。结果25例患者随访1年以上，治愈18例，好转 5例，无效2例，有效率92％，且无手术严重并发症发生。结论鼻内镜手术治疗儿童及青少年上颌窦后鼻孔息肉安全有效。

苹果酸酶2乙酰化调控脑胶质瘤细胞增殖的机制

目的研究苹果酸酶2(ME2)的乙酰化修饰在恶性脑胶质瘤细胞系U87MG增殖中的功能及其分子机制。方法基于序列保守性并结合质谱数据库,预测ME2的乙酰化修饰位点,再构建点突变体,转染细胞,通过免疫沉淀(IP)和Western blot确定修饰位点;通过293T细胞纯化ME2野生型和突变体,检测乙酰化修饰对ME2酶活的影响;通过共转染、富集纯化并结合酶活实验,检测去乙酰化酶Sirtuin3(SIRT3)对ME2酶活、细胞内活性氧(ROS)及NADH水平的影响;在U87MG细胞中用shRNA敲低内源ME2后,回转野生型和模拟乙酰化突变型,检测ME2的乙酰化对细胞增殖的影响,并通过裸鼠成瘤在动物水平验证;通过Western blot在恶性脑胶质瘤临床样本中检测癌与癌旁组织中ME2的乙酰化水平差异。结果K156是ME2主要的乙酰化修饰位点,该位点的乙酰化会抑制ME2活性并抑制U87MG细胞增殖。SIRT3去乙酰化ME2,提高ME2活性,促进NADH的生成,降低细胞内ROS水平。结论SIRT3调控的ME2乙酰化修饰通过提高自身酶的活性,上调细胞NADH水平,降低ROS水平,从而促进U87MG细胞增殖。

灵芝酸G诱导效应性CD8^+T细胞抗A20细胞活性的研究

目的探讨耐药性金色葡萄球菌肠毒素A(Staphylococcus enterotoxin A,SEA)存在下灵芝酸G(licochalcone-G,LG)诱导小鼠CD8+细胞杀小鼠淋巴瘤细胞(A20)的活性。方法按诱导物不同分SEA组和SEA+LG组;分离小鼠脾脏CD8+细胞经过3天诱导,采用流式细胞技术分别检测CD8+细胞表面分子CD69和Fas的表达;A20细胞中Caspase-3酶的活性经过荧光抗体染色,流式细胞技术分析;ELISA方法测定细胞因子TNF-α和IFN-γ分泌水平。结果 SEA组和SEA+LG组小鼠CD8+细胞表面活化分子CD69的表达分别为76±2.15和85±3.86;CD8+细胞表面分子Fas表达分别为73±1.36和92±1.28;SEA+LG组诱导48 h CD8+细胞分泌TNF-α和IFN-γ分泌水平分别为360±5.84和620±7.62;与SEA组诱导CD8+细胞分泌TNF-α和IFN-γ分泌水平280±3.26和410±4.23有显著性差异(P<0.01);体外2h诱导的CD8+细胞2比1杀细胞结果显示,SEA组和SEA+LG诱导的A20细胞Caspase-3酶的活性分别为54.3±0.68和72.6±1.36;两者之间有显著性差异(P<0.01)。结论 SEA能促LG诱导的CD8+T细胞转化为细胞毒性T淋巴细胞(CTL),分泌TNF-α和IFN-γ细胞因子,并通过Caspase-3的信号途径诱导A20细胞凋亡。

苦参碱对人结肠癌HT29细胞生长抑制作用的实验研究

目的研究苦参碱（matrine，MA）对人结肠癌HT29细胞系抑制和诱导凋亡的作用。方法分别采用MTT法检测细胞的生长抑制率，流式细胞仪、透射电镜观察MA处理HT29细胞后细胞周期阻滞和细胞凋亡的发生。结果2～32mg／mLMA均能抑制HT29细胞增殖（P〈0．05），其抑制率与作用时间及浓度相关。4、8、16mg／mLMA处理HT29细胞后，G。／G，细胞明显高于阴性对照组（P〈0．05），提示细胞周期停滞于G0／G1期。透射电镜可见，HT29细胞出现凋亡形态学改变。结论MA对HT29细胞有抑制作用，机制可能与阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡有关。

苦参碱对体外诱导人结肠HT29细胞凋亡作用的实验研究

[目的]研究苦参碱（matrine，MA）对体外诱导人结肠癌HT29细胞的凋亡作用及其机制。[方法]不同浓度MA（0-32mg／m1）作用HT29细胞24h后，流式细胞仪检测细胞凋亡，线粒体跨膜电位检测试剂盒（3C-1）检测线粒体膜电位（Apm）变化，分光光度法检测caspase-3，9酶活性，Westernblot法检测线粒体凋亡途径相关蛋白Bax、Bcl-2表达。[结果]MA显著诱导HT29细胞凋亡；16mg／mlMA作用HT29细胞24h后，caspase-9，-3酶活性明显升高；Westernblot结果显示：MA处理组促凋亡蛋白Pax表达明显升高，抗凋亡蛋白Bcl2表达明显降低。[结论]MA具有促进结肠癌细胞凋亡的作用，且具有剂量依赖性，其机制与线粒体凋亡途径有关。