湖北白猪及其杂交后代H-FABP基因型与相关性状关系研究

【目的】对湖北白猪及其杂交后代H-FABP基因多态性以及与生产性状的相关进行分析,为在湖北白猪优质系培育过程中进行分子标记辅助育种提供理论基础。【方法】采用PCR-RFLP(HinfⅠ、HaeⅢ、MspⅠ)方法分析湖北白猪及其杂交后代共计282头猪的H-FABP基因5′-上游区域和第二内含子遗传多态性,利用最小二乘模型分析杂交后代H-FABP基因型对相关生产性能的影响。【结果】湖北白猪在HinfⅠ-RFLP位点表现为单态,在HaeⅢ-RFLP和MspⅠ-RFLP位点上呈现多态,杂交一代、杂交二代在三个酶切位点均呈现出多态;湖北白猪在HinfⅠ-RFLP、HaeⅢ-RFLP位点均表现为低度多态,在MspⅠ-RFLP位点表现为中度多态,其杂交一代、杂交二代均表现为中度多态;不同基因型对IMF(Intramuscularfat,肌内脂肪)含量的影响,HH>Hh>hh,dd>Dd>DD,aa>Aa>AA,dd基因型IMF含量显著高于DD、Dd基因型(P<0.05),aa、Aa基因型IMF含量极显著高于AA型(P<0.01)。HH基因型20日龄重显著高于hh基因型(P<0.05)。其它生产性能在不同基因型间差异不显著(P>0.05)。【结论】在选育群体中可以通过选择H-FABP的优势基因型(aa-dd-HH)提高IMF含量而不影响其它生产性状。

湖北白猪IGF-I基因的克隆及序列分析

[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子(IGF-I)基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2(5'-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3')引物合成IGF-I基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1(5'-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3')和P2为上下游引物扩增到大小约为607 bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-I基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1～145位是5'端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子5,39～607位是3'端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-I基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-I基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-I基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。

小鼠胚胎母源基因转向合子基因组的转换起始点

为研究母、父源基因以及合子基因在动物胚胎早期发育中发挥功能的重要时间节点,本实验利用转增强型荧光蛋白(EGFP)基因小鼠(♀/♂),分别与野生型小鼠进行交配,收集受精后的胚胎于倒置荧光显微镜下观察,寻找EGFP基因在不同胚胎发育阶段时间节点表达的特征,作为直观判断母源基因向合子基因的转换时间起始点的生物标志。结果发现:从EGFP转基因母鼠获得的5枚卵母细胞/原核胚中表达了EGFP基因,在荧光显微镜下表现出绿色荧光;而从野生型母鼠获得的20枚胚胎到2-细胞(2-cell)期后开始表现出绿色荧光,随着胚胎的发育,出现荧光的胚胎数量逐渐增多,达到5枚。综上,EGFP基因可以作为小鼠胚胎发育过程中合子基因的标志物,小鼠胚胎发育过程中母源基因向合子基因转换的时机在胚胎发育的2-cell期。

体外生产猪原核期胚胎的初探

初步研究了在体外生产猪的原核期胚胎。结果表明:将在体外成熟培养44 h的卵母细胞移植入发情当日的母猪体内,同时进行人工授精,受精后16 h冲出胚胎,获得同期原核期胚胎的效率最高,可以降低多精入卵的发生率。

转基因动物技术及其在动物育种中的应用

本文简单介绍了转基因猪育种技术的研究意义、基本概念、研究方法以及在转基因猪育种中的应用,并对转基因猪育种的前景进行了展望。

湖北白猪IGF-1基因的克隆及序列分析(英文)

[目的]以湖北白猪肝脏作为试验材料,克隆出湖北白猪胰岛素生长因子(IGF-1)基因,并对其序列进行分析。[方法]采用Trizol法从湖北白猪的肝脏中提取总RNA,将其作为RT反应的模板,用P2(5'-CAGGTAACTCGTGCAGAGCAAAGGA-3')引物合成IGF-1基因cDNA第一链,以其产物为模板,再以P1(5'-CCCATCTCCCTGGATTTCTTTTTG-3')和P2为上下游引物扩增到大小约为607bp的产物,并将其克隆至pCRII载体上,经蓝白斑筛选、酶切、测序。[结果]经筛选、酶切、序列分析,表明该片段为IGF-1基因的cDNA克隆,它由607个核苷酸组成,其中1～145位是5'端非翻译区,从第146位ATG起始密码子开始至第538位TAG终止密码子,539～607位是3'端非翻译区,包含一完整的ORF,该ORF共有393核苷酸,编码一个推断由130个氨基酸组成的多肽。与GenBank中的序列比较,该序列与Muller等报道的猪IGF-1基因编码序列完全同源。[结论]成功克隆了湖北白猪IGF-1基因,并对其进行序列分析,证实了IGF-1基因的高度保守性,为采用转基因技术对湖北白猪进行育种奠定了基础和提供了技术依据。

小鼠胚胎冷冻保存条件研究

为探索在实验室条件下最佳的小鼠胚胎冷冻保存条件。对不同发育阶段小鼠胚胎按照同一个冷冻程序进行冷冻;两个不同的冷冻程序对同一个发育阶段的小鼠胚胎进行冷冻。结果表明,-7℃平衡10 min,然后以0.3℃/min的速率迅速降至-35℃,-35℃平衡5 min后投入液氮中,此冷冻程序比较适合小鼠胚胎冷冻;冷冻保存对16细胞以上的小鼠胚胎影响较小。

五个山羊品种GDF9基因部分片段的多态性分析

以影响Belclare羊和Cambridge羊高产性能的生长分化因子9基因(GDF9)的FecGH突变片段作为候选基因,采用PCR-RFLP方法研究其在麻城黑山羊、宜昌白山羊、马头山羊、南江黄羊、波尔山羊5个品种中的多态性,结果未在5个山羊品种中检测到GDF9的FecGH突变,说明所检测的GDF9片段序列比较保守。

黄羽鹌鹑产蛋性状遗传参数的估计

[目的]为进行鹌鹑产蛋性能分析及实现产蛋性状早期选种提供科学依据。[方法]通过家系选择并结合个体选择的方法开展黄羽鹌鹑的选育,并以黄羽鹌鹑产蛋记录为材料,采用动物模型,运用MTDFREML软件对鹌鹑产蛋相关性状(开产日龄、开产体重、开产蛋重、105日龄蛋数)进行了遗传力(h2)和遗传相关(r)的估计。[结果]经过5个世代的选择,105日龄的黄羽鹌鹑平均产蛋数G5代比G1代提高了5枚(P<0.05),变异系数由1世代的22.71%降低到12.33%;105日龄产蛋数的估计遗传力h2=0.05,为低遗传力性状,开产体重、开产日龄、开产蛋重的遗传力分别为0.30、0.11和0.31。产蛋相关性状间的遗传相关分析结果表明,105日龄的产蛋数与开产日龄、开产体重的遗传相关系数分别为-0.46和0.83。[结论]该研究为黄羽鹌鹑优良性状的综合选择奠定了基础。

丁酸梭菌制剂对猪只保育及肥育前期生长性能的影响研究

丁酸梭菌是一种专性厌氧的革兰氏阳性菌，是肠道内的有益菌，有促进肠道营养、免疫和调节肠道菌群的作用。本试验研究目的在于通过分析丁酸梭菌制剂不同添加水平对仔猪及肥育前期猪只的日增重、料重比和腹泻的影响，验证丁酸梭菌促生长和减少腹泻的效果及最佳添加比例。

不同剂量PMSG对未性成熟小鼠卵巢发育的影响

探讨了不同剂量PMSG对20-21日龄未性成熟小鼠卵巢发育的影响，结果表明，PMSG处理后小鼠卵巢出现增大现象，其中20IU、15IU、10IU、6IU组处理的小鼠卵巢增重最明显，且组问差异不显著；卵巢内生长卵泡数量差异不显著，随激素作用量的上升，有腔卵泡数和有腔卵泡所占比例而增大。

不同饲喂方式对保育猪生长性能的影响及经济效益分析

为研究干料饲喂与湿料饲喂对保育猪生长性能及经济效益的影响,试验选择体重约8~9 kg、健康的大约克仔猪120头,随机分为干料饲喂组和湿料饲喂组,每组公母比例相同,分为6个栏,每栏10头猪进行饲喂。干料饲喂组猪只断奶转入保育舍后,用干料自动食槽投喂,自由采食,自由饮水。湿料饲喂组猪只采用智能保育食槽,在下料同时配给一定量的水进行饲喂,自由饮水。试验期20 d。结果表明,湿料饲喂可提高保育猪生长速度,降低腹泻率,其试验期日增重为352.60 g,料重比为1.21;每千克增重成本为7.25元,较干料饲喂组低1.89元,经济效益明显。

两种方法研究不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰效应

目的:旨在观察不同茎部长度串联shRNA表达载体对EGFP基因的干扰作用。方法:采用体外培养的Vero细胞,选用不同茎部长度串联shRNA表达载体+EGFP表达载体+脂质体转染的方法,将构建好的干扰载体转染Vero细胞,然后使用实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。在小鼠腿部肌肉注射干扰质粒,实时荧光定量RT-PCR对其沉默效应进行定量分析。结果:转染Vero细胞时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的4.3%、3.0%和6.9%;小鼠腿部肌肉注射干扰质粒时,pGenesilR21、pGenesilR27和pGenesilR29荧光表达量仅为对照质粒pEGFP-C1的2.5%、1.3%和5.1%。结论:在细胞和个体水平,不同茎部串联干扰载体对目的基因的抑制效应均很明显(达到90%以上),比单一位点产生的沉默效应要强许多,不同茎部长度干扰效应彼此间差异不显著。

母猪生殖对策的初探

为了研究哺乳动物生殖对策,以母猪生殖记录为研究对象,对母猪不同胎次间产仔数的变化等进行研究。研究发现,在母猪的不同胎次间存在一定规律。通过优化每次繁殖过程所产生后代的数量,结果将身为发现哺乳动物对外界环境的感知和自适应机制奠定基础。

猪黑皮质素受体1基因密码子偏好分析

遗传密码子是生命信息的基本遗传单位，每种氨基酸对应1～6个同义密码子。特定物种在长期进化中形成了适应自身基因环境的密码子使用偏好。运用CHIPS、CUPS和CodonW程序分析猪黑皮质素受体1基因密码子偏好，并与牛、羊、小鼠、人等多种动物的黑皮质素受体1基因密码子偏好进行比较，以期为转基因动物育种提供依据。结果表明。猪偏好使用以C、G结尾的密码子（96．88％），且在整个编码区序列中G＋C含量（67．81％）大于A＋T（32．19％），该基因在猪体内表达水平很高（CAI=0．849），并且发现，猪的密码子偏好性与牛、犬等动物类似，明显不同于纯、雀、獾、大猩猩等动物。要实现目的基因在猪MClR基因中进行定点整合并成功表达和尽可能地提高其表达量，需对目的基因的部分密码子进行改造。

转EGFP-attB基因PK15细胞核型分析方法的建立

以转EGFP-attB基因PK15细胞（猪肾细胞15）为试验材料,研究不同秋水仙素浓度、低渗时间对染色体标本制备的影响。结果表明,使用秋水仙素浓度为0.04~0.08μg/mL、低渗时间为15~20 min时所制备的染色体标本分裂相分散好,可以做核型分析用,为下一步做染色体荧光原位杂交检测研究转EGFPattB基因在染色体上的整合位点奠定了基础。