人胚胎干细胞系NS1的建立

目的：探讨利用长期冷冻的废弃胚胎建立人胚胎干（hES）细胞系.方法：将临床体外受精（IVF）及精子卵浆内注射（ICSI）周期中剩余冷冻5年以上的废弃胚胎复苏后继续培养至扩张囊胚,链霉蛋白酶去除透明带后采用全囊胚培养法获取原代类胚胎干细胞,再用机械法传代分离纯化hES细胞,命名为NS1.取不同代次的培养细胞,进行碱性磷酸酶染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原SSEA-4、肿瘤排斥抗原TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内分化实验对NS1进行全能性鉴定.结果：12枚废弃胚胎在体外继续培养后,有4枚发育为囊胚,最终得到1个干细胞系,经鉴定,这些细胞都具有hES细胞的生物学特性.结论：长期冷冻的废弃胚胎可用来建立hES细胞系.

MicroRNA在干细胞增殖与分化过程中的调控作用

背景:研究表明MicroRNA(miRNA)可通过抑制干细胞特定mRNA序列的翻译来调控干细胞的自我更新和分化。目的:探讨miRNAs在干细胞增殖和分化过程中的作用。方法:由第一作者检索2000/2010PubMed数据库、Elsevier数据库及Nature数据库。英文检索词为"stem cell,embryonic stem cell(ESC),induced pluripotent stem cells(iPS cell),microRNA(miRNA)"。排除重复性研究。共保留其中的39篇进行归纳总结。结果与结论:胚胎干细胞有特异性的miRNAs表达,miRNAs对胚胎干细胞增殖与分化起重要的调控作用;miRNAs对造血干细胞分化的多个阶段和方向有调控作用;miRNAs还参与了神经干细胞、间充质干细胞和皮肤干细胞等成体干细胞分化的调控。干细胞特异性的miRNAs可提高体细胞重编程的效率。

TAT-PDX1蛋白诱导的人胎肝间充质干细胞治疗NOD/SCID鼠糖尿病

目的:观察人胎肝间充质干细胞在TAT-PDX1蛋白的作用下体外分化为胰岛β细胞的能力以及治疗NOD/SCID鼠糖尿病的效果。方法:体外分离纯化获得人胎肝间充质干细胞,用TAT-PDX1蛋白体外诱导分化为胰岛β细胞,制作NOD/SCID鼠糖尿病模型,并将诱导后的细胞移植到糖尿病鼠肾包膜下,观察各组小鼠血糖变化并行IPGTT试验。结果:用TAT-PDX1蛋白体外诱导分化的细胞稳定表达胰岛素,移植到糖尿病鼠肾包膜下,能快速降低血糖水平,取出移植物,血糖水平再次升高。结论:TAT-PDX1蛋白诱导的人胎肝间充质干细胞能有效降低糖尿病鼠血糖,有望成为糖尿病细胞治疗的种子细胞。

TAT-PDX1融合蛋白诱导人胎肝间充质干细胞向胰岛β细胞分化

背景：PDX1是决定胰岛β细胞功能的关键因子,应用穿膜蛋白TAT将PDX1蛋白导入细胞内,若能发挥诱导分化作用将使干细胞治疗糖尿病向临床应用更进一步。目的：观察TAT-PDX1融合蛋白诱导人胎肝间充质干细胞向胰岛β细胞分化的能力。设计、时间及地点：细胞学体外观察,于2007-05/2008-03在郧阳医学院附属太和医院湖北省胚胎干细胞研究重点实验室完成。材料：流产胎儿来源于肝功能正常、HBsAg（-）的健康产妇,TAT-PDX1融合蛋白由美国佛罗里达大学医学院唐东启博士惠赠。方法：采用贴壁法体外分离培养人胎肝间充质干细胞,传至第3代加入20mol/LTAT-PDX1融合蛋白诱导,分别于第4,6,8,10天向诱导细胞中加入含葡萄糖的DMEM/F12培养基。主要观察指标：诱导后细胞形态变化及双硫腙染色结果,RT-PCR检测胰岛β细胞特异基因的表达,放射免疫法测定胰岛素累积分泌量。结果：人胎肝间充质干细胞易于体外分离和扩增,加入TAT-PDX1融合蛋白诱导后细胞由梭形逐渐变圆,并形成胰岛样细胞团,双硫腙染色呈棕红色。诱导第4,6,8,10天细胞序贯表达胰岛β细胞特异基因,NeuroD基因最先出现,随后消失,Nkx2.2,Pax4,Nkx6.1,ISL-1基因随后依次出现。诱导后胰岛素累积分泌量逐渐增加,葡萄糖刺激后2-4周细胞胰岛素基础分泌量和刺激后胰岛素分泌量均显著增加,且可以维持在较高水平。结论：TAT-PDX1融合蛋白能诱导人胎肝间充质干细胞向胰岛β细胞分化。

过表达小窝蛋白-1对293T细胞生长的影响及机制

目的:探讨小窝蛋白-1(caveolin-1)蛋白过表达对细胞生长与增殖的影响及其机制。方法:将重组的真核表达质粒PHLCX Nflag3/小窝蛋白-1以脂质体法转染293T细胞,流式细胞仪测定细胞周期变化;Western Blotting分析P53、P21、ERK、pp-ERK蛋白表达。结果:293T细胞出现了G0/G1期阻滞;P53/P21表达增加,ERK/ppERK表达减少。结论:过表达小窝蛋白-1抑制293T细胞生长,并且这种对细胞生长抑制作用通过P53/P21与ERK信号传导通路实现的。

表观遗传修饰与胚胎着床

哺乳动物胚胎着床是指卵母细胞和精子结合受精直到孵化为囊胚并植入子宫内膜的过程。在受精后父母双方染色体重组是胚胎发育所必需的,大部分染色质结构的改变一直持续到胚胎着床,在这过程中发生许多表观遗传调控的生物学变化,如组蛋白修饰、DNA甲基化对子代染色体的重塑等,但对于这些修饰在亲代与子代之间的变化知之甚少。可以明确的是在哺乳动物早期发育中,遗传与表观基因组高度动态的变化息息相关。本文就表观遗传修饰在哺乳动物胚胎发育及着床方面进行阐述。

Wnt2/β-catenin通路在C57BL/6小鼠肝再生修复中的变化

目的探讨Wnt2/β-catenin通路在C57BL/6小鼠肝再生修复中的变化特征。方法将C57BL/6雄鼠随机分为假手术组(Sham组)、术后1 d组、术后2 d组、术后4 d组、术后6 d组、术后8 d组,手术组小鼠行部分肝切除术(PHx),分别切除肝左叶和中叶。于术后第1、2、4、6、8天收集血浆和肝脏组织,丙氨酸氨基转移酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)生化分析试剂盒检测血浆ALT和AST活力;免疫组化检测各组Ki67阳性细胞数目;免疫荧光检测HNF4-α和Ki67双阳性细胞数、LYVE1和Ki67双阳性细胞数及β-catenin入核细胞数;Western blot检测各组Wnt2蛋白的表达,分析其在肝再生过程中表达的时间特征。结果PHx后第6天肝质量、肝质量/体质量达到高峰,接近Sham组水平。PHx后第1天肝损伤严重,第4天即可恢复正常。PHx后第2天主要是肝细胞增殖,第4、6天主要是肝窦内皮细胞增殖,同时Wnt2/β-catenin通路被激活。结论肝脏有强大的再生修复功能,与肝实质细胞和肝窦内皮细胞的快速增殖密切相关,Wnt2/β-catenin通路在小鼠肝脏再生修复中被激活。

顽固性重度卵巢过度刺激综合征合并亚临床甲状腺功能减退症1例报道

本文报道了1例32岁育龄期女性,控制性促排卵后发生重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)合并亚临床甲状腺功能减退,及时给予左旋甲状腺素片纠正甲状腺功能,同时给予补液、抗凝、纠正低白蛋白血症、腹腔穿刺减压等对症治疗OHSS,患者最终于孕37^(+3)周剖宫产分娩2名男婴,母婴状况较好。关于OHSS合并(亚临床)甲状腺功能减退的文献资料较少,本文对该例患者的临床资料进行整理并开展文献复习与讨论,建议临床工作中对于孕前甲状腺功能正常者,在发生OHSS后或者妊娠早期应关注甲状腺功能,以便及时进行诊断及干预,降低对母婴的影响。

缺氧诱导的外泌体活化自噬促进肝癌进展

目的探讨缺氧诱导的外泌体对肝癌进展的调节作用及其机制。方法将Huh7细胞置于0.1%O_(2)培养箱培养24 h作为缺氧组,另设常氧组,提取外泌体,纳米追踪技术检测外泌体的浓度和粒径大小,免疫印迹检测HSP70、Alix、CD63的表达。将Huh7细胞分为对照组(PBS)、常氧外泌体组(20μg/ml常氧外泌体)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体),实时无标记细胞分析仪(real-time cell analysis,RTCA)实验检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,免疫印记检测细胞PCNA、cyclin D1、Bax、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3、p62的表达,激光共聚焦检测自噬流的改变。Huh7细胞分为对照组(PBS)、缺氧外泌体组(20μg/ml缺氧外泌体)、缺氧外泌体+3-MA组(5 mmol/L 3-甲基腺嘌呤+1 h后20μg/ml缺氧外泌体),检测细胞增殖、迁移和相关蛋白的表达。结果与常氧组相比,缺氧组外泌体浓度增加,但外泌体粒径的大小没有明显变化,缺氧组外泌体标记蛋白HSP70、Alix、CD63的表达增加(P<0.05)。与常氧外泌体组相比,缺氧外泌体组Huh7细胞增殖和迁移能力增强(均P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达上调,Bax、E-cadherin和p62的表达下调(均P<0.05),自噬流增强(P<0.05)。与缺氧外泌体组相比,缺氧外泌体+3-MA组Huh7细胞增殖、迁移和上皮间质转化作用减弱(P<0.05),PCNA、cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Beclin1、LC3-Ⅱ的表达下调(P<0.05),Bax、E-cadherin和p62的表达上调(P<0.05)。结论缺氧诱导的外泌体可以参与细胞自噬的发生进而促进肝癌进展。

PDX1与糖尿病

随着人们生活水平的提高，糖尿病的发病率越来越高。传统的治疗措施存在不足，新的治疗方法越来越受到人们的关注。PDX1作为对胰腺发育、胰岛细胞分化和胰岛素合成具有重要作用的转录因子，在糖尿病新的治疗方法中引起广泛的关注，并有可能成为糖尿病治疗的一个新的靶标。现将近年来有关PDX1作用机制及其与糖尿病治疗的相关研究进展综述如下。

系统性炎症在慢加急性肝衰竭发病机制中的作用

慢加急性肝衰竭(ACLF)是在慢性肝病基础上,由各种诱因引起急性黄疸加深、凝血功能障碍为表现的综合征,可合并肝性脑病、腹水、电解质紊乱、感染、肝肾综合征、肝肺综合征等并发症,以快速进展的多器官功能衰竭和超高的短期死亡率为特点[1]。ACLF是终末期肝病的临床常见类型,是导致慢性肝病患者死亡的主要原因之一。

羟乙基淀粉预防卵巢过度刺激综合征的应用进展

卵巢过度刺激综合征(OHSS)是一种主要发生在辅助生殖技术促排卵时的自限性疾病,没有特异性疗法。近年来国内外有大量文献报道羟乙基淀粉溶液能够起到显著预防OHSS的作用。本文就近年羟乙基淀粉溶液预防OHSS的应用进展进行分析总结,基于目前对羟乙基淀粉溶液的研究,发现其对预防OHSS的效果是明确的,可以降低OHSS发生率及严重程度,且妊娠期使用对胎儿也是安全的。然而羟乙基淀粉溶液预防OHSS的使用尚缺乏适应证,所以在大量使用于临床前,仍需要质量高的随机对照研究来证实。

老年与中青年食管鳞癌患者食管菌群的宏基因组学对比研究

目的探讨老年与中青年食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)患者食管组织的菌群特征及差异,以助于研究老年ESCC患者潜在的生物标志物。方法采用回顾性研究,选取2018年7月至2019年7月在湖北省十堰市太和医院确诊的72例ESCC患者,其中老年组49例(≥60岁,男性40例,女性9例),中青年组23例(<60岁,男性21例,女性2例),以同期消化内镜中心20名胃镜检查无异常的健康体检者作为对照组(年龄范围35~78岁,中位年龄57岁,男性16名,女性4名)。收集ESCC患者病变食管组织和健康对照组中段食管组织、提取基因组DNA,对细菌16SrRNA基因序列V4高变区扩增,采用Illumina HiSeq测序技术,对比分析老年和中青年ESCC患者菌群特点。采用QIIME和Rstudio软件分析序列数据,统计学方法采用非参数Kruskal-Wallis检验或Wilcoxon秩和检验。结果两组患者菌群Shannon指数[5.17(4.53,5.95)比4.79(3.74,5.97)]、Simpson指数[0.94(0.91,0.96)比0.92(0.83,0.96)]和Chao1[343.55(259.76,570.59)比329.16(268.88,648.00)]指数相似,差异无统计学意义(Z=-0.791、-1.057、-0.380,均P>0.05);Beta多样性老年组与中青年组亦无明显差异(PC1=19.14%、PC2=6.95%,PPC1=0.67、PPC2=0.42)。在门水平,中青年组丰度前五的菌门依次为厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、放线菌门(Actinobacteria)和梭杆菌门(Fusobacteria),老年组患者丰度最高的五个门分别是厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)和放线菌门(Actinobacteria);两组差异显著的是梭杆菌门(Fusobacteria)(Q=0.596,P<0.05)。在属水平,中青年组丰度前五的菌属依次为:普雷沃菌属(Prevotella)、拟杆菌属(Bacteroides)、链球菌属(Streptococcus)、月形单胞菌属(Selenomonas)和韦荣球菌属(Veillonella);而老年组丰度前五的分别是普雷沃菌属(Prevotella)、拟杆菌属(Bacteroides)、链球菌属(Streptococcus)、月形单胞菌属(Selenomonas)和嗜血杆菌属(Haemophilus),两组有显著差异的为梭杆菌属(Fusobacterium)(Q=0.938,P<0.05)。基于未观测状态重建的群落系统发育研究(PICRUSt)功能预测,老年组患者氨酰tRNA生物合成(Aminoacyl.tRNA.biosynthesis)、核苷酸切除修复(Nucleotide.excision.repair)、核糖核酸聚合酶(RNA.polymerase)、核糖体(Ribosome)、克拉维酸生物合成(Clavulanic.acid.biosynthesis)、光合作用(Photosynthesis)和光合作用蛋白(Photosynthesis.proteins)丰度较中青年组降低(均Q=0.734,P<0.05)。结论老年ESCC患者食管菌群与中青年患者的Alpha多样性和Beta多样性无明显差异,但老年患者梭菌属菌群丰度增高。