UPLC/Q-TOF-MS特征图谱结合化学计量学评价秋海棠属5种药材质量

目的:采用UPLC/Q-TOF-MS技术结合化学计量学方法综合评价秋海棠、中华秋海棠、掌裂叶秋海棠、长柄秋海棠和柔毛秋海棠的质量。方法:采用ACQUITY UPLC HSS T3 C_(18)(2.1 mm×100mm,1.8μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸为流动相进行梯度洗脱,柱温30℃,流速0.2 mL·min^(-1),检测波长254 nm;采用电喷雾离子源(ESI)正负离子同时扫描,以MSE方式进行采集,建立秋海棠属5种药材UPLC/Q-TOF-MS特征图谱,并对它们各自共有峰进行确认和归属,运用主成分分析法(PCA)和偏最小二乘判别分析法(PLS-DA)对数据进行统计分析。结果:筛选出秋海棠、中华秋海棠、掌裂叶秋海棠、长柄秋海棠和柔毛秋海棠药材各自的共有特征峰分别为15、13、12、12、15个,且共鉴定出29个化合物;秋海棠属5种药材质量存在较大差异,其中,柔毛秋海棠与其他4种药材的化学成分差异显著,秋海棠与中华秋海棠药材之间化学成分差异较小,掌裂叶秋海棠与长柄秋海棠药材之间化学成分差异较小;还筛选出对该5种药材区分贡献显著的8个化学标志物,原花青素B2、表儿茶素、葫芦素D或其同分异构体、葫芦素D葡萄糖苷和葫芦素B为潜在鉴别特征性化学标志物,原花青素B1、儿茶素和芦丁为潜在含量差异性化学标志物。结论:该方法直观、准确地反映了此5种药材的整体质量及化学成分差异情况,并对于建立科学、合理的秋海棠属药材质量评价方法和安全用药具有重要的指导意义,也为其整体质量评价和控制及标准修订提供参考。

婴儿健脾散质量评价研究

目的:对国家评价性抽检婴儿健脾散质量现状及存在问题进行评价分析。方法:依据标准检验中发现的问题,结合探索性研究结果,从药物的安全性、有效性、稳定性及处方工艺的真实性全面分析评价制剂质量。结果:138批样品按法定标准检验总合格率为96.4%,探索性研究结果表明,影响产品质量的主要因素为外源性污染风险、违规生产等因素。结论:婴儿健脾散产品的质量标准及质量均存在一定缺陷,质量标准需进一步完善。

基于网络药理学对鹿蹄橐吾镇咳活性成分的初步研究

目的:采用网络药理学方法获取鹿蹄橐吾治疗咳嗽的潜在活性成分及蛋白靶点,并探讨可能的作用机制。方法:从PubMed等数据平台获得鹿蹄橐吾化学成分并使用SwissADME和SwissTargetprediction对其进行筛选,获取潜在成分;利用GeneCards获取咳嗽相关靶点;通过STRING和Cytoscape构建和分析PPI网络,获取核心靶点;使用Metascape平台进行GO生物功能过程和KEGG代谢通路富集分析。结果:在多平台分析下得到23个核心靶点,其对应成分中多为艾里莫芬烷型倍半萜,GO分析获取了如蛋白磷酸化正调控、炎症反应调节等生物过程,细胞膜及突触等细胞组成,以及蛋白激酶结合、蛋白质结构域特异性结合等分子功能条目。KEGG富集显示与炎症等相关的信号通路。结论:鹿蹄橐吾存在改善咳嗽病征的有效成分,且以多组分、多靶点、多通路的形式发挥作用,其机制可能涉及炎症和免疫等相关通路。

石膏煎煮入药方式对小儿麻甘颗粒钙含量影响的研究

目的:建立微波消解前处理结合电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)测定小儿麻甘颗粒钙含量,探讨石膏煎煮入药方式对小儿麻甘颗粒钙含量的影响。方法:建立微波消解前处理结合电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)对制剂中钙的含量进行测定,比较不同粉碎度石膏投料与不同醇沉工艺制备的小试制剂及小儿麻甘颗粒样品中钙含量差异。结果:不同企业间、同企业批间样品钙含量一致性较差;小试制剂结果显示颗粒越大,钙转移率越低;颗粒越小,钙转移率越高。结论:石膏煎煮入药钙的转移率与其粉碎度有关,为保证制剂质量一致性,建议对投料石膏的粉碎度进行统一。本法可为小儿麻甘颗粒生产工艺的优化提供指导意见。

胡椒属三种民族药的生药学鉴别研究

目的:对胡椒属植物石南藤Piper wallichi(Miq.)Hand.-Mazz.、毛蒟P.puberulum(Benth.)Maxim.、山蒟P.hancei Maxim.进行生药学对比研究,建立鉴别三者主要特征的方法。方法:基于原植物基原鉴定、药材性状鉴定、不同器官显微组织鉴定,比较三者异同点,采用薄层色谱法鉴别三者。结果:三者显微特征较为相似。石南藤的叶片形状为椭圆形,毛蒟及山蒟叶片均为卵状披针形;石南藤枝被疏毛,毛蒟幼枝及叶片被短柔毛,而山蒟无毛。石南藤茎显微横切中髓部所占比例最小,仅为60%,而毛蒟和山蒟占比达到80%~90%。建立的薄层色谱鉴别方法能鉴别石南藤、毛蒟及山蒟。结论:可根据叶片形状、茎枝是否被毛、茎显微中髓部所占比例、薄层色谱鉴别区分石南藤、毛蒟及山蒟。该研究为三者的鉴别、质量控制及资源开发利用奠定了基础。

蛇菰属药用植物药理作用及质量标准研究现状

蛇菰属药用植物种类繁多,药用历史悠久,在民间临床广泛用于治疗肝损伤、肝癌、醒酒保肝和外伤出血等症。本文梳理并总结了近年来关于蛇菰属药用植物的药理作用,并结合蛇菰属药材质量标准和质量评价相关内容进行综述,以便更好地为该属药用植物的药效物质基础研究、临床应用和资源开发提供研究思路和科学依据。

菊花提取物对肝旺痰阻型高血压大鼠的降压作用研究

目的探讨菊花提取物对肝旺痰阻型高血压大鼠的降压作用。方法除正常组外,造模组大鼠采用高脂高糖及梯度饮酒的方式制备肝旺痰阻型高血压大鼠模型。造模成功后,将造模大鼠随机分为模型组,缬沙坦组,菊花水提物低、中、高剂量组,菊花醇提物低、中、高剂量组,给药组给予相应的药物,正常组及模型组给予相同量的水,给药同时重复前法继续造模,连续给药4周。给药期间每周测量一次体质量、面温,每两周测量一次血压,分别在造模开始前、造模结束时及给药结束时测量血糖值。通过HE染色观察大鼠肝脏及胸主动脉的组织病变情况;检测总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、C反应蛋白(CRP)、内皮素-1(ET-1)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS)水平。结果菊花水提物能显著降低肝旺痰阻型高血压大鼠的血压,改善大鼠肝脏病变及脂肪空泡情况,抑制胸主动脉中膜增厚情况;显著降低大鼠肝脏组织中AST、ALT、TG水平及血清中TC、TG、CRP水平。结论菊花提取物对肝旺痰阻型高血压大鼠具有降压、降脂作用,其降压机制可能与其抑制炎症因子释放、改善高血压大鼠血管内皮细胞的炎症反应密切相关。

基于UPLC-Q-TOF/MS的新月蕨属三种中药材化学成分分析

目的:对新月蕨属3种中药材的主要化学成分进行定性研究,分析三者差异成分;并对披针新月蕨的根茎和须根化学成分进行比较,评价药用部位。方法:色谱分离采用ACQUITY UPLC BEH Shield RP18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相梯度洗脱,质谱采用超高效液相-四极杆-飞行时间串联质谱法(UPLC-Q-TOF/MS)及电喷雾(ESI)离子源,在正、负离子模式下采集数据。采用OPLS-DA筛选披针新月蕨根茎及须根的差异性成分。结果:应用Masslynx 4.1软件及The Critical Assessment of Small Molecule Identication(CASMI)方法鉴定了3种药材中的33种主要化学成分,其中披针新月蕨22种,红色新月蕨23种,二者共有成分20个,主要为黄酮类化合物;单叶新月蕨仅鉴定了8种,初步判断含有较多有机酸类化合物。披针新月蕨根茎及须根的差异性成分为6″-O-Acetyltriphyllin A、5,2′,5′-三羟基-7-甲氧基黄烷酮等8个化合物。结论:该研究初步阐明了新月蕨属3种中药材的药效物质基础,为制定3种药材的质量评价标准,明确质控指标奠定了基础。

熵权逼近理想排序法结合谱效分析辨识菊花抗氧化功能的物质基础

目的评价不同产地菊花的抗氧化功能并辨识其药效物质基础。方法建立不同产地菊花水提物高效液相色谱(HPLC)指纹图谱;测定其2,2-联苯基-1-苦基肼基(DPPH)、羟基、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、超氧阴离子自由基清除能力和铁离子还原能力(FRAP);采用熵权逼近理想排序法(TOPSIS)计算单指标的权重系数,从而计算不同产地菊花的抗氧化总药效;采用灰色关联度和偏最小二乘法进行谱效分析,辨识菊花抗氧化功能的物质基础。结果10批不同产地菊花指纹图谱共鉴定16个共有峰,指认其中13个成分;不同产地菊花均具较好的抗氧化能力,熵权TOPSIS分析结果显示10批菊花抗氧化总药效排序为:S1>S8>S3>S5>S4>S10>S7>S2>S9>S6;谱效分析结果发现峰1~5、9、10、12、14与抗氧化活性呈正相关,变量投影(VIP)值均>1,且这9个峰与总药效的关联系数均>0.7。结论熵权TOPSIS结合谱效分析可用于筛选菊花抗氧化功能的物质基础,研究结果为建立基于质量标志物的菊花质量评价体系从而提升其质量控制水平提供依据。

基于磁固相萃取和液相色谱-质谱联用技术的日本医蛭抗凝活性成分研究

目的使用磁固相萃取、转录组文库及液相色谱-质谱联用(LC-MS/MS)鉴定技术,筛选和鉴定日本医蛭中的抗凝活性成分。方法采用通用合成方法制备凝血酶固定化磁纳米粒,日本医蛭粗提液经磁固相萃取后,洗脱溶液使用高效液相串联三重四级杆飞行时间质谱联用(TripleTOF LC-MS/MS)技术并结合日本医蛭唾液腺转录组文库,进行抗凝多肽的筛选。结果经傅立叶变换红外分光光度计及透射电镜表征,凝血酶成功固定于磁珠上,凝血酶磁珠的酶活性稳定性良好(37℃,19 d,RSD为4.74%);洗脱液经扫描比对含有5种水蛭素变体,均为凝血酶抑制剂,洗脱液冻干粉抗凝活性为70 U·g^(-1)。结论将磁固相萃取、转录组文库以及LC-MS/MS技术相结合成功开发了一种能快速筛选和鉴定日本医蛭中抗凝多肽分子的方法,该方法方便易行,可为动物药活性成分发掘提供参考。

我国部分地区中药材栽培土壤污染情况分析

目的:对我国63批中药材栽培土壤的酸碱度、5种重金属污染状况等进行评估。方法:参考《土壤环境质量标准》和《土壤环境质量农用地土壤污染风险管控标准》(试行)对土壤进行等级划分,并采用单因子污染指数法和内梅罗(N.L.Nemerow)综合污染指数法分析土壤的污染状况。结果:符合GAP要求的二级以上土壤占比为71.4%;经酸碱度分析,有效性最大的中性土壤占比为41.3%;经综合评估,危险级的土样(警戒级和污染级)占比达34.9%。结论:我国中药材种植土壤存在严重酸化和碱化、重金属镉残留高等问题,部分中药材栽培土壤不符合GAP种植要求,中药材规范化种植的源头问题需引起广泛关注。

黄连重金属ATP酶基因CcHMA3的克隆和表达分析

目的:克隆黄连重金属ATP酶基因CcHMA3,并对其编码蛋白进行生物信息学以及差异表达分析。方法:根据黄连基因组和转录组数据,利用PCR扩增CcHMA3的全长cDNA并进行生物信息学分析。利用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测CcHMA3基因在黄连植株中的表达差异。结果:克隆获得CcHMA3基因,开放阅读框全长为3030 bp,编码1009个氨基酸;蛋白相对分子量为109.03 kD,理论等电点为6.7;蛋白序列中含有6个跨膜结构域和2个保守结构域,亚细胞定位预测表明CcHMA3位于质膜上,具有一定亲水性。qRT-PCR结果表明,CcHMA3基因在黄连不同组织中的相对表达量由高到低依次为须根、根茎、叶柄、叶片;当镉处理后,CcHMA3基因在须根中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且对不同镉胁迫处理时间存在明显不同的响应表达。结论:该研究为进一步深入研究CcHMA3基因在黄连重金属镉代谢过程中的调控机制,进而寻找可能的阻断方式奠定了实验基础。

天山假狼毒化学成分及抗菌活性研究

目的研究瑞香科植物天山假狼毒Stelleropsis tianschanica(Pobed)的化学成分及抗菌活性。方法采用柱色谱的分离方法对天山假狼毒的95%乙醇提取物进行分离纯化,利用核磁共振NMR、高分辨质谱等方法,结合理化鉴定化合物结构。采用滤纸片法对不同浓度的单体化合物的抗菌活性进行筛选。结果从天山假狼毒中分离鉴定11个化合物,分别为:(E)-11-methoxy-11-oxoundec-2-enoic acid(1)、Methyl-(E)-9-oxooctadec-10-enoate(2)、3-Hydroxyphthalimide(3)、Dimethyl hexadecanedioate(4)、Octadecane-1,18-dimethylester(5)、壬二酸氢甲酯(6)、正十六烷酸(7)、bothrioclinin(8)、Daphnolon(9)、β-谷甾醇(10)、芝麻素(11)。化合物7(128μg/ml)对金黄色葡萄球菌有一定抑制活性,抑菌圈大小为8.65 mm。化合物9(128μg/ml和64μg/ml)对鲍曼不动杆菌有抑制活性,抑菌圈大小分别为12.65 mm和8.05 mm。结论化合物1~9为首次从天山假狼毒中分离得到;其中化合物1~3的碳谱数据为首次报道。化合物7和化合物9均表现出一定的抗菌活性。

不同包装对婴儿健脾散稳定性的影响

目的考察不同包装系统对婴儿健脾散质量的影响,为选择合适的包装提供参考依据。方法通过燃烧实验快速鉴定药品包装药用复合膜中间层的材质;采用高效液相色谱法考察不同包装样品加速实验(温度40℃、相对湿度75%)0,10,20,30 d后水分含量、挥发性成分(木香烃内酯和去氢木香内酯)含量的变化。结果第Ⅳ类铝膜和第Ⅲ类镀铝膜包装的样品经加速后含水量变化的RSD分别为2.9%~7.9%,2.9%~21.8%;木香烃内酯下降均值分别为21.3%和42.2%;去氢木香内酯下降均值分别为18.2%和42.3%。结论样品中水分和挥发性成分的含量受药用复合膜的材质及质量的影响。第Ⅳ类铝膜为更适宜婴儿健脾散的包装材料。不论采取内Ⅲ+外Ⅳ、内Ⅳ或内Ⅳ+外Ⅲ的组合方式,均可较好地保证产品的质量稳定。

土家族药材冷水七指纹图谱及根皮苷含量测定的研究

目的提高土家族药材冷水七的质量控制方法,建立该药材指纹图谱及含量测定方法。方法指纹图谱采用超高效液相色谱法(UPLC),ACQUITY UPLC BEH C18柱,根皮苷含量测定采用高效液相色谱法(HPLC),Eclipse XDB-C18柱,流动相均为乙腈-0.1%甲酸梯度洗脱,检测波长为283 nm,对冷水七及其易混品(同属块节凤仙花、滇水金凤、黄金凤、水金凤的根茎)进行比较研究。结果指纹图谱中9个特征峰可作为冷水七的特征峰,其中4个峰分别与儿茶素、表儿茶素、东莨菪素及根皮苷相对应;该指纹图谱反映了冷水七化学成分的分布,且可与其易混品区分。根皮苷为首次在冷水七中发现,16批冷水七中根皮苷含量范围为0.007%~0.085%,易混品未检出根皮苷。结论本研究建立的冷水七指纹图谱及其根皮苷含量测定方法专属、准确、有效,可用于冷水七药材的质量控制。

中国特色民族药材藤茶的资源调查

目的:调查藤茶的基原品种、资源分布现状、商品药材情况和标准收载情况,为藤茶资源保护和药材质量评价提供参考。方法:结合文献考证、访问专家和实地调查,对藤茶主产区的资源和商品药材情况进行调查,并采集样本。结果:明确藤茶基原为显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata(Hand.-Mazz.)W.T.Wang,主要分布在广西、湖北、湖南、贵州等地及重庆、江西部分地区。目前广西、贵州、重庆、江西等地藤茶野生资源较为丰富,湖北、湖南等地随着野生蕴藏量不断减少,藤茶栽培产业逐渐扩大。结论:藤茶在不同产地同物异名现象较为严重,应对其药名进行统一;藤茶野生资源不断减少,应加大野生资源保护力度,以维护生物多样性,同时应建立规范化、规模化、产业化的种植基地,提高栽培藤茶药材质量,推进藤茶药材质量标准研究,以保证藤茶商品药材资源优质和稳定。

固相萃取-液质联用法测定藤茶中11种真菌毒素

目的建立固相萃取-液质联用法同时测定藤茶中11种真菌毒素。方法藤茶样品加入80%乙腈溶液,高速均质提取,亲水-亲脂平衡(HLB)固相萃取柱净化富集;以乙腈-5 mmol·L^(-1)醋酸铵(pH值3.0)为流动相,经C 18色谱柱梯度洗脱分离,采用电喷雾(ESI)离子源、多反应监测(MRM)及正负离子模式采集数据,以基质匹配标准曲线外标法进行定量。结果11种真菌毒素线性关系良好,相关系数(r)均>0.99,方法检出限1.66~37.50μg·kg^(-1),低、中、高水平加样回收率69.82%~118.77%,RSD 0.63%~14.50%。结论该方法简单、快速、实用性强,适用于藤茶中11种真菌毒素的检测。

基于中药血清化学与网络药理学筛选玄参质量标志物

目的:基于中药质量标志物(quality marker,Q-Marker)“五原则”,结合中药血清化学与网络药理学,分析和预测玄参质量标志物。方法:采用液质联用技术鉴定玄参水煎液中化合物以及灌胃给药后大鼠血清中原型成分,经网络药理学预测原型成分主要作用靶点、通路,依据靶点、通路与玄参传统功效关联性,筛选出与传统功效密切相关的活性成分,并基于原型成分生源关系确定其特异性,综合研究结果确定玄参Q-Marker。结果:在玄参水煎液以及大鼠血清中分别鉴定出50个化合物和5个原型成分;网络药理学预测哈巴苷、哈巴俄苷和安格洛苷C调节糖脂代谢、保护血管的药理作用与传统功效联系更为密切。结论:哈巴苷、哈巴俄苷和安格洛苷C可作为玄参Q-Marker用于质量控制。

多重连接探针扩增结合熔解曲线法鉴别南、北板蓝根掺杂

目的 针对南、北板蓝根在市场流通和中医临床用药中混用现象,建立多重连接探针扩增结合熔解曲线法来快速准确地鉴别两者。方法 针对南、北板蓝根ITS2序列设计两对特异性探针,通过DNA变性、杂交、连接、扩增和进行熔解程序建立MLPA-熔解曲线,根据T_(m)值的差异进行鉴别,并对其探针特异性和检测灵敏度进行考察。结果 在特异性试验中,南板蓝根产生84.98℃的熔解曲线峰,北板蓝根产生83.35℃的熔解曲线峰;在灵敏度试验中,南板蓝根中掺杂10%的北板蓝根或北板蓝根中掺杂5%的南板蓝根均可被检出。26批商品药材中,有12批熔解曲线峰与北板蓝根相符,14批熔解曲线峰与南板蓝根吻合,与测序结果一致。结论 该方法灵敏准确,特异性强,可为南、北板蓝根的鉴别提供支持。

利用多重连接探针扩增结合熔解曲线法鉴别五味子与南五味子掺杂

目的探究多重连接探针扩增技术(MLPA)结合熔解曲线在五味子和南五味子鉴别中的应用。方法以五味子和南五味子为研究对象,基于其ITS2序列设计探针进行MLPA反应,通过分析荧光熔解曲线的Tm值对二者进行鉴别,并将此方法应用到市场随机收集的31份五味子和南五味子商品中,通过对聚合酶链反应(PCR)产物测序验证此方法的准确性。结果两对探针都表现出很好的特异性和灵敏度,均只出现对应的单一熔解曲线峰,五味子产生82.3℃的熔解曲线峰,南五味子产生80.7℃的熔解曲线峰。31份五味子商品中,16份商品的熔解曲线Tm值与五味子吻合,15份商品的熔解曲线Tm值与南五味子吻合,实验结果与测序结果一致。结论该研究建立的方法特异性强,灵敏度高,且操作简单方便,可以快速鉴别五味子及其掺混品。