RNA干扰沉默PPARγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响

目的观察RNA干扰沉默PPARγ基因对小鼠骨髓基质干细胞成脂与成骨分化潜能的影响。方法针对小鼠PPARγ基因，构建短发夹RNA（shRNA）真核表达载体并转染小鼠骨髓基质干细胞，逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹沉淀（Wetern—blot）观察PPARγ／的基因沉默效果。分别在成脂及成骨诱导培养基条件下，诱导培养14d，采用油红O（OilRedO）染色及茜素红染色鉴定分化结果，并与空载体转染组和未转染组比较。结果测序证实成功构建PPARγ的shRNA真核表达载体pSilencer．shPPARγ，转染小鼠骨髓基质干细胞后，PPARγ基因表达在转录水平和翻译水平都显著受到抑制，与两对照组相比，抑制率分别为92％和90％。成脂及成骨诱导分化后，shPPAR~／转染组小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化率为56．46％±1．92％，明显高于pSilencer-neo空载体转染组和未转染组（P〈0．01）；成脂分化率为19．24％±0．98％，显著低于pSilencer—shPPARγ-neo空载体转染组和未转染组（P〈0．01）。结论RNA干扰沉默PPARγ基因后，可增强小鼠骨髓基质干细胞的成骨分化潜能，抑制其成脂分化潜能。