柯萨奇病毒B3调控CAPN总体活性促进H9c2细胞凋亡的机制

目的探讨柯萨奇病毒B3(CVB3)调控进H9c2细胞凋亡的潜在机制。方法 CVB3感染大鼠心肌细胞H9c2后,通过Annexin-PI染色和流式细胞仪检测H9c2的凋亡水平。抽取感染CVB3和未感染的H9c2细胞的总RNA后进行高通量测序。使用siRNA敲低测序结果中差异较大的基因,并检测H9c2细胞的凋亡水平。结果CVB3感染大鼠心肌细胞H9c2后,细胞的凋亡水平上升(P<0.05)。高通量测序发现感染CVB3和未感染的H9c2细胞表达差异大于5倍的基因有40个。siRNA敲低这些基因后,发现当敲低CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10时,H9c2细胞凋亡水平下降(P<0.05)。感染CVB3后,H9c2细胞中CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10的蛋白水平上升。感染CVB3后12 h、24 h、48 h H9c2细胞中总体Calpain活性上升(P<0.05)。感染CVB3的同时使用Calpain抑制剂Z-LLY-FMK处理,Calpain总体活性和H9c2细胞凋亡水平无显著变化(P>0.05)。结论 CVB3通过上调CAPN1、CAPN2、CAPN3、CAPN10的表达水平提高了Calpain的总体活性来诱导大鼠心肌细胞H9c2凋亡。