实验性猕猴2型糖尿病模型的建立及评价

背景:目前国内外关于2型糖尿病的非人灵长类动物模型研究报道很少,缺乏标准化制作方法和评价标准。目的:建立一种安全、有效的猕猴2型糖尿病模型及评价方法。方法:将12只猕猴随机分为实验组(n=9)与对照组(n=3),实验组高糖高脂饮食喂养4周后,一次性腹腔注射30 mg/kg链脲佐菌素,建立2型糖尿病模型;对照组注射等量生理盐水。注射第12周,采集外周血血清,测定空腹血糖、血脂、胰岛素、C-肽水平,通过静脉葡萄糖耐量试验、C-肽释放试验检测胰腺胰岛功能,取胰腺、肾脏、肝脏组织行病理组织学检查。结果与结论:(1)注射第12周时,实验组空腹血糖、三酰甘油、总胆固醇均显著高于对照组(P<0.05),C-肽及胰岛素显著低于对照组(P<0.05);(2)实验组静脉葡萄糖耐量试验曲线下面积较对照组增大(P<0.05),C-肽释放试验曲线下面积明显减小(P<0.05);(3)实验组胰腺、肝脏、肾脏组织切片显示均发生了典型糖尿病病理改变;(4)因此认为高糖高脂饮食联合小剂量链脲佐菌素诱导猕猴2型糖尿病模型成功,是一种简单安全、有效的方法。

MiR-499靶向HMGB1保护缺氧复氧心肌细胞损伤的分子机制探讨

目的研究miR-499对缺氧复氧心肌细胞H9c2损伤的影响,并探讨其作用机制。方法运用免疫印迹法(Western blot)检测缺氧复氧心肌细胞中高迁移率族蛋白1(HMGB1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、免抗人单克隆抗体(Bax)、caspase-3的蛋白表达;将H/R+miR-con组(转染miRcon)、H/R+miR-499组(转染miR-499 mimics)、miR-con组(转染miR-con)、miR-499组(转染miR-499 mimics)、anti-miR-con组(转染anti-miR-con)、anti-miR-499组(转染anti-miR-499)、H/R+si-con组(转染si-con)、H/R+si-HMGB1组(转染si-HMGB1)、H/R+miR-499+Ctrl组(miR-499 mimics和pcDNA3.1共转染)、H/R+miR-499+HMGB1组(miR-499 mimics和pcDNA3.1-HMGB1共转染),均以脂质体法转染至H9c2细胞;实时荧光定量聚合酶链锁反应(qRT-PCR)检测各组细胞中miR-499的表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞的荧光活性。结果与NC组相比,H/R组细胞中HMGB1蛋白表达显著升高,miR-499表达显著降低(P<0.05);过表达miR-499或敲减HMGB1均可显著下调H/R H9c2细胞凋亡率,显著下调Bax、caspase-3的蛋白表达,上调Bcl-2的蛋白表达(P均<0.05);过表达HMGB1可逆转miR-499对H/R H9c2细胞凋亡的抑制作用。结论MiR-499可抑制缺氧复氧心肌细胞H9c2凋亡,保护心肌细胞,其机制与靶向HMGB1有关,将可为心脏病的治疗提供新靶点。

糖尿病肾病患者血清胱抑素C与氧化应激的相关性研究

目的:探讨2型糖尿病肾病患者血清胱抑素C(CysC)与氧化应激的相关关系。方法:共选取研究对象106例,包括健康体检者(对照组)26名,2型糖尿病患者80例,根据尿白蛋白排泄率(UAER)将糖尿病患者分为3组,正常白蛋白尿组(UAER<20ug/min),26例;微量白蛋白尿组(20ug/min≤UAER<200ug/min),28例;大量白蛋白尿组(UAER≥200ug/min),26例。采用免疫比浊法测定血清胱抑素C水平,全自动生化仪测定血脂和空腹血糖(FPG)等生化指标,高压液相法测定糖化血红蛋白(HbA1c),比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。分析血清胱抑素C与氧化应激的相关关系及其影响因素。结果:血清胱抑素C水平随着蛋白尿排泄的增加而逐渐升高:正常白蛋白尿组(6.20±0.62)mg/L vs微量白蛋白尿组(8.04±0.21)mg/L vs大量白蛋白尿组(10.18±0.74)mg/L,有统计学差异(P<0.05)。胱抑素C与尿白蛋白和MDA均呈正相关(r=0.5736,P<0.05;r=0.6435,P<0.05),与SOD、GSH-Px呈负相关(r=0.3521,P<0.05;r=0.3065,P<0.05)。结论:CysC有助于评估早期糖尿病肾病体内氧化应激水平,CysC、MDA、SOD和GSH-Px联合检测可能有助于早期诊断糖尿病肾病。

左卡尼汀对AMI大鼠心肌细胞以及对PI3K/Akt/Sirt1信号通路、PDGF、Profilin-1表达的影响

目的探究左卡尼汀对急性心肌梗死(AMI)大鼠PI3K/Akt/Sirt1信号通路以及血小板衍生因子(PDGF)、前纤维蛋白-1(Profilin-1)表达的影响。方法成年Wistar大鼠45只随机分为对照组(假手术组)、模型组和左卡尼汀组3组,AMI建模后药物干预2周。使用酶联免疫法检测血清中肌钙蛋白(cTnT)、肌酸激酶(CK-MB)、PDGF、Profilin-1水平。CCK-8法和流式细胞术检测大鼠心肌胞活力和凋亡率。使用Western blot和qRT-PCR检测PI3K/Akt/Sirt1信号通路蛋白水平和mRNA水平。结果模型组大鼠血清cTnT和CK-MB水平显著高于对照组(P<0.05),左卡尼汀组大鼠血清cTnT和CK-MB水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞的细胞活力显著低于对照组而凋亡率显著高于对照组(P<0.05),左卡尼汀组大鼠心肌细胞活力显著高于模型组而凋亡率显著低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠血清PDGF显著低于对照组而Profilin-1水平显著高于对照组(P<0.05),左卡尼汀组大鼠血清PDGF显著高于模型组而Profilin-1水平显著低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠心肌组织PI3K、Akt、Sirt1蛋白和mRNA水平显著低于对照组(P<0.05),左卡尼汀组大鼠心肌组织PI3K、Akt、Sirt1蛋白和mRNA水平显著高于模型组(P<0.05)。结论左卡尼汀具有促进PDGF和PI3K/Akt/Sirt1表达的作用,促进心肌增殖并抑制细胞凋亡,同时可改善氧化应激状态使Profilin-1的水平下调。

狼疮肾炎患者肠道菌群变化与临床病理特征、肾脏远期生存的相关性研究

目的研究狼疮肾炎(lupus nephritis,LN)患者肠道菌群特征与临床病理特征、肾脏远期生存的相关性。方法选择2017年8月至2018年8月期间在我院诊断为LN的患者作为LN组,同期诊断为系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)且肾功能正常的患者作为SLE组、体检的健康者作为对照组。检测粪便中肠道菌群的含量,采用COX回归模型分析LN患者终末期肾脏病(end-stage renal disease,ESRD)的影响因素,采用ROC曲线分析肠道菌群对LN患者ESRD的预测价值。结果LN组患者粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌的含量明显低于SLE组和对照组,大肠杆菌的含量明显高于SLE组和对照组(P<0.05)且与LN组中未合并关节炎、血肌酐(SCr)正常、无大量蛋白尿、Ⅲ/Ⅲ+Ⅴ型患者比较,合并关节炎、SCr升高、大量蛋白尿、Ⅳ/Ⅳ+Ⅴ型患者粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌的含量明显降低,大肠杆菌的含量明显升高(P<0.05);COX回归分析显示,LN病程、SCr、病理类型、双歧杆菌含量是LN患者ESRD的影响因素(P<0.05);ROC曲线分析显示,LN患者粪便中双歧杆菌含量对ESRD具有预测价值。结论LN患者存在肠道菌群紊乱且与部分临床病理特征相关,肠道菌群中双歧杆菌的减少与ESRD的发生有关,对ESRD具有预测价值。

外周血miR-410表达变化与系统性红斑狼疮疾病活动及预后的关系

为探究系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血miR-410表达变化与疾病活动及预后的关系,收集2017年9月至2018年9月于湖北科技学院附属第二医院收治的82例SLE患者作为SLE组,收集同期体检的100例健康志愿者作为对照组,采用荧光定量PCR法检测2组外周血miR-410表达水平;SLE疾病活动度评分(SLE disease activity index-2000,SLEDAI-2K)评价SLE患者的疾病活动度并分析miR-410表达水平与SLEDAI-2K的关系,比较SLE组不同临床特征[是否合并狼疮性肾炎(lupus nephritis,LN)、关节炎,是否累及皮肤及造血系统]患者miR-410表达水平的差异;随访SLE组LN患者终末期肾病(end-stage renal disease,ESRD)病情并采用COX回归模型分析ESRD的影响因素;采用ROC曲线分析miR-410表达水平对ESRD的预测价值。结果显示,SLE组患者外周血miR-410的表达水平显著低于对照组(P<0.05)且与SLEDAI-2K评分负相关,即SLE组患者SLEDAI-2K越高,外周血miR-410表达水平越低(P<0.05,r=-0.632);SLE组中合并LN、关节炎的患者外周血miR-410表达水平显著低于未合并相关疾病的患者(均P<0.05);血清miR-410水平、LN病程、血肌酐(serum creatinine,Scr)和疾病病理类型是LN患者ESRD的影响因素,miR-410对LN患者ESRD有预测价值。由此,外周血miR-410表达减少与SLE疾病发生及活动度有关,也与SLE中LN患者ESRD的发生有关,并影响疾病的远期预后。