GLP-1受体激动剂对心血管作用的研究进展

胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1,GLP-1)由肠道内分泌细胞产生。GLP-1受体激动剂(GLP-1 receptor agonists,GLP-1RAs)促进葡萄糖相关的胰岛素分泌和抑制胰高血糖素分泌。GLP-1RAs还能抑制胃排空、食物摄入和限制体质量增加。在过去的十年中,GLP-1RAs对心血管系统影响的研究已经取得重大进展。口服小分子GLP-1RAs具有潜在优势,可以提高该类药物的应用。该文综述了GLP-1RAs在心血管疾病治疗中的多种作用,为GLP-1RAs的心血管获益提供新见解。

一种GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型

目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒(ELISA)进行验证。结果成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。

GLP-1R激动剂及正变构调节剂研究进展

胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)是治疗2型糖尿病的重要靶标,作为一种G蛋白偶联受体可通过胰高血糖素样肽-1介导胰岛素分泌。该文对胰高血糖素样肽-1和GLP-1R的结构与功能进行综述,并对肽类GLP-1R激动剂、非肽类小分子GLP-1R激动剂和GLP-1R正变构调节剂的设计开发进行讨论,旨在为进一步探寻2型糖尿病的治疗方案提供思路。

应用pCMV3-MdmX-RFP表达载体建立H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)稳转细胞系

[目的]探索应用pCMV3-MdmX-RFP表达载体构建H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)稳转细胞系。[方法]用KpnⅠ和NotⅠ双酶切后连接,构建pCMV3-MdmX-RFP表达载体并测序。重组质粒转染H1299p53R^(2)13X细胞,用100μg/mL的潮霉素B筛选2 w。将筛选出的细胞无限稀释后分到96孔板中,每孔一个单细胞,并扩增成单细胞群,选出荧光较强的3个细胞克隆(C1、C2和B4)采用Western Blotting和基因组PCR验证。将建立的稳定细胞系命名为H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)细胞系,用荧光显微镜观察稳转细胞系的第10代细胞,并用Western Blotting检测MdmX-RFP蛋白的表达情况。G418处理H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)细胞后,Western Blotting检测全长p53(full-length p53,FL-p53)和截断的p53(Truncated p53,TR-p53)蛋白表达水平。[结果]测序结果显示,重组质粒pCMV3-MdmX-RFP与数据库中的基因序列相同。稳定细胞系中MdmX-RFP蛋白的高表达,在第10代仍然如此。与对照组相比,用G418处理H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)细胞后,FL-p53蛋白水平升高1.6±0.12倍(P<0.05),TR-p53蛋白水平升高3±0.17倍(P<0.01)。[结论]构建的H1299^(p53R^(2)13X/MdmX)稳转细胞系过表达效率高,可直接用于后续实验。