浅析动态思维方式在病理教学中的应用

随着病理学在医学科目中地位的不断升高,如何能让学生更好地掌握这一基础医学与临床医学的桥梁学科,笔者从自身数年教学经历出发,认为在病理学教学过程中应从多发面,多手段的启发学生在学习过程养成动态思维的思考方式,将形象思维,抽象思维与逻辑思维相结合,并且也为学生们以后进入临床实践,形成独立思考的临床思维打下坚实的基础。

膀胱癌T24中肿瘤干细胞样细胞的分离与鉴定

目的观察使用无血清培养基悬浮培养能否从膀胱癌T24中分离出微球体,并证实其是否有肿瘤干细胞的特点。方法使用无血清培养基DMEM/F12添加生长因子EGF、bFGF、胰岛素、B27对膀胱癌T24进行悬浮培养,并从长期增殖能力、克隆形成能力、自我更新能力、对放化疗的抵抗能力、迁移和侵袭能力等方面证实这些微球体是否有肿瘤干细胞的特点。结果从培养的第4天开始长出微球体,微球体细胞比普通贴壁T24细胞有更强的增殖能力和克隆形成能力,对放化疗的抵抗能力更强,有更强的迁移和侵袭能力,微球体有自我更新能力,具有肿瘤干细胞的特点。结论使用无血清悬浮培养可以从T24中分离出微球体,而且这些微球体细胞有肿瘤干细胞的特点。

siRNA沉默RIP1对膀胱癌细胞株T24恶性生物学行为的影响

目的利用siRNA转染干扰沉默膀胱癌细胞株T24的受体相互作用蛋白1(RIP1)基因,并观察沉默前后T24恶性生物学行为的变化。方法使用Lipofectamine誖2000和RIP1siRNA与膀胱癌细胞株T24共孵育48 h,RT-PCR和Western-blot检测孵育前后RIP1mRNA和蛋白质的表达变化以观察沉默效率,并观察沉默前后T24增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力的变化。结果与siRNA孵育48 h后,RIP1的沉默效率可以达到85%,RIP1沉默后T24的增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力下降。结论沉默RIP1基因可以降低T24的恶性程度,提示RIP1在膀胱癌T24中起癌基因的作用。

受体相互作用蛋白1RIP1在食管鳞癌的表达及意义

目的明确受体相互作用蛋白1 RIP1在人食管鳞癌组织中的表达及与临床病理因素、病人预后的关系。方法使用免疫组化SP法检测76例人食管鳞癌组织和相对应的癌旁正常食管黏膜中RIP1的表达状况,并分析与临床病理因素如病人的性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、临床分期、分级、有无淋巴结转移的关系,并进行了随访。结果76例食管鳞癌中RIP1阳性的病例有53例,占69.7%,癌旁组织RIP1阳性的只有19例,占25%,差异有统计学意义,RIP1的阳性表达与病人的性别、年龄、肿瘤大小无关,与浸润深度、临床分期、分级、有无淋巴结转移成正相关,随访结果表明:食管鳞癌中RIP1阳性率越高,病人生存期越短,预后越差,RIP1蛋白的表达是个预后不良的独立因素。结论 RIP1在食管鳞癌中表达增高,可能参与食管鳞癌的发生。

食管鳞癌癌干细胞的分离与功能特性

目的运用无血清培养基悬浮培养的方法从数个食管鳞癌细胞株中分离出微球体,并对其癌干细胞特性进行鉴定。方法使用无血清培养基DMEM/F12添加20 ng/mL EGF、10 ng/mL bFGF、5%B27和5μg/mL胰岛素的方法从3个食管鳞癌细胞株EC109、EC9706和HK-3中分离出微球体,并从增殖能力、克隆形成能力、对放化疗的抵抗能力、迁移和侵袭能力、干性基因的表达能力证实HK-3的微球体是否有癌干细胞的特点,同时分析了3个食管鳞癌细胞株恶性程度与其癌干细胞干性之间的关系。结果我们发现3个食管鳞癌细胞株均有形成微球体的能力,其中HK-3微球体比普通贴壁HK-3细胞有更强的增殖能力、克隆形成能力、对放化疗的抵抗能力、迁移和侵袭能力,表达更高的干性基因如ABCG2和ALDH1,而且EC109、EC9706和HK-3表达c-myc的蛋白量逐渐降低,形成微球体的能力及干性基因的表达量亦逐渐降低。结论食管鳞癌细胞株存在癌干细胞样细胞,且其恶性程度与癌干细胞的比例成正相关。

hMLH1和干细胞标志物CD44在胃癌的表达及相互间的关系

目的研究错配修复基因hMLH1和干细胞标志物CD44在胃癌的表达状况、意义及相互间的关系。方法采用免疫组化SP法检测79例胃癌组织和相对应的癌旁组织中错配修复基因hMLH1和干细胞标志物CD44的表达状况,结合临床资料分析这两个指标的表达与肿瘤病理参数间的关系,运用卡方检验分析该两个指标间的相互关系。结果79例胃癌标本中,hMLH1阳性表达的有15例,占19%,,CD44阳性表达的有53例,占67.1%,两者在癌旁正常组织表达的阳性率分别为51%和15.2%,两者差异均有统计学意义(P<0.05);胃癌组织中hMLH1的表达与CD44呈负相关(P<0.05);hMLH1阴性表达、CD44阳性表达与胃癌淋巴结转移、浸润深度、TNM分期及脉管浸润呈正相关(P<0.05)。结论 hMLH1在胃癌的形成过程中起到重要作用,它与胃癌干细胞标志物CD44之间存在拮抗关系。

受体相互作用蛋白RIP1在乳腺癌的表达及其临床意义

目的评价受体相互作用蛋白RIP1在乳腺癌的表达及与临床病理特征的关系。方法使用免疫组化SP法检测46例乳腺癌组织和相应癌旁组织中RIP1的表达状态,并结合临床病理特征如临床分期、病理分级、肿瘤大小、有无淋巴结转移进行统计学分析。结果 46例乳腺癌组织中,阳性表达的有30例,占65.2%,癌旁组织中阳性表达的只有13例,仅占28.3%,差异有统计学意义(P<0.01),癌组织中RIP1的阳性表达与病人的年龄、肿瘤大小、组织学类型无关,与临床分期、病理分级、有无淋巴结转移呈正相关,即癌组织中RIP1表达越高,病人临床分期病理分级越高、淋巴结转移越多。结论癌组织中RIP1表达增高是乳腺癌恶性程度较高的一个标志。

结肠癌细胞株COLO201中癌干细胞样细胞的分离与鉴定

目的运用无血清悬浮培养体系从结肠癌细胞株COLO201中分离微球体,并证实其癌干细胞特性。方法使用无血清培养基DMEM/F12添加40ng/ml EGF、20ng/ml bFGF、B27的方法从结肠癌细胞株COLO201中分离微球体,并从长期增殖能力、克隆形成能力、长期分化能力、对放化疗的抵抗能力、迁移侵袭能力等方面证实这些微球体有癌干细胞的特性。结果从培养的第3d开始分离出微球体,微球体细胞比非微球体细胞有更强的增殖能力、克隆形成能力、长期分化能力、对放化疗的抵抗能力和迁移侵袭能力。结论使用无血清悬浮培养可以从结肠癌细胞株中分离出癌干细胞样细胞。

膀胱癌干细胞研究进展

癌干细胞（CSCs）是一小群能够再现肿瘤全部特点的细胞。CSCs的概念早在20世纪60年代就已提出，最近10年研究人员对其进行了分离。首先，是在急性髓性白血病,接着在实体肿瘤（如乳腺癌，脑肿瘤）进行分离。CSCs对放疗和化疗表现出抵抗性。因此，膀胱CSCs的分离、分子特征、治疗靶点的确定对理解其病理发生很有意义。

siRNA沉默PELP1基因对结肠癌Lovo恶性生物学行为影响的实验研究

目的:明确雌激素受体共调节因子脯氨酸,谷氨酸,亮氨酸富集蛋白1(PELP1)在结肠癌Lovo中的作用及其机制。方法:使用siRNA沉默结肠癌Lovo中的PELP1基因,并观察沉默前后结肠癌Lovo恶性生物学行为的变化。结果:PELP1的沉默效率可达80%,沉默后Lovo的增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力均下降。结论:在结肠癌Lovo中沉默PELP1可以降低Lovo的恶性程度,提示PELP1在Lovo中起癌基因的作用。

结肠癌 COLO 耐药株的构建及其与肿瘤干细胞的关系

目的：构建结肠癌 COLO 耐药株，探索其功能特性及其与肿瘤干细胞的关系。方法通过逐渐递增化疗药5-氟尿嘧啶（5-FU）浓度的方法，构建了耐0．10μmol／ml 和0．20μmol／ml 5-FU 的结肠癌 COLO 耐药株各1株，分别命名为 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2。从增殖能力、克隆形成能力、迁移和侵袭能力、微球体形成能力、干性基因的表达、交叉耐药等方面与亲本结肠癌细胞株 COLO 进行对比。结果在存活检测中，常规培养后第4天，结肠癌耐药株 COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的 A 值分别为0．61±0．13、0．54±0．07、0．41±0．09，差异有统计学意义（F ＝63．43，P ＝0．033）。随着耐5-FU 药物浓度的增加，COLO 耐药株的克隆形成率逐渐增强，COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO的克隆形成率依次为（87．6±12．7）％、（65．3±9．7）％、（38．5±7．6）％，差异有统计学意义（F ＝33．64， P ＝0．017）。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 每高倍视野中迁移穿过基底膜的细胞数分别为（482±39）个、（434±45）个、（373±38）个，侵袭穿过基底膜的细胞数分别为（174±42）个、（112±31）个、（87±29）个，差异均有统计学意义（F ＝109．61，P ＝0．009；F ＝67．31，P ＝0．032）。与亲本结肠癌细胞株COLO 比较，耐药株表达更高的干性基因，差异有统计学意义（F ＝47．31，P ＝0．042）；且耐药株对其他化疗药如米托蒽醌存在交叉耐药[如给药96 h，米拖蒽醌对亲本 COLO 的抑制率高于 COLO／5-FU-1、COLO／5-FU-2（0．749±0．042、0．423±0．024、0．342±0．018），差异有统计学意义（F ＝12．61，P ＝0．028）]。COLO／5-FU-2、COLO／5-FU-1、亲本 COLO 细胞的微球体形成率依次为（8．90±0．97）％、（6．20±0．75）％、（3．90±0．32）％，差异有统计学意义（F ＝164．32，P ＝0．006）。结论结肠癌 COLO耐药株有肿瘤干细胞样细胞的特点，是富集了的肿瘤干细胞。