铜绿假单胞菌外毒素A基因DNA片段的克隆及序列测定

目的 建立含有铜绿假单胞菌外毒素A基因DNA片段的克隆株。方法 根据已报道的序列设计铜绿假单胞菌外毒素A基因的特异引物 ,用PCR方法从标本扩增出预期大小的DNA片段 ,并将该片段纯化后与T载体连接 ,转化到大肠埃希菌 ,筛选出含有插入片段的克隆。结果 阳性克隆株经DNA序列测定 ,证实与已报道的铜绿假单胞菌外毒素A基因DNA序列 ,在399个碱基中仅有 3个碱基不同 ,但编码的氨基酸完全一致。结论 成功构建含有铜绿假单胞菌外毒素A基因的克隆 。

PCR阻断联合荧光探针检测HBV基因前C区G1896A突变株

目的研究和评估PCR扩增阻断联合荧光探针检测乙型肝炎病毒(HBV)基因前C区1896位点突变的新方法。方法根据HBVDNA前C区1896位点的突变设计一系列引物,引物3′末端位于1896位,并与突变模板1896位碱基互补.在引物的倒数第2及第3位碱基设计为错配碱基,以增加反应的特异性。结果以2个错配碱基的突变型引物对野生型质粒进行PCR扩增,具有显著的阻断作用,对1896位突变型质粒无阻断作用,而且对其检测的最低拷贝数可达5×103拷贝/ml。选用该引物对95例随机采集的HBV阳性标本进行HBV前C区G1896A位碱基突变的检测,8例为阳性,其突变率为8.4%。结论本法在临床标本检测中是一种有效的和简便的方法。