湖南地区类风湿性关节炎主要中医证型分布规律研究

目的：研究分析湖南地区类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）的主要中医证型流病学分布规律,为其临床辨证论治研究提供参考依据。方法：采集2013年1月—2014年12月于湖南中医药大学第一附属医院风湿内科就诊且确诊为类风湿性关节炎患者病历资料299例。建立数据库,并采用SPSS 22.0软件进行统计,分析类风湿性关节炎主要中医证型在性别、年龄及病程方面的分布规律。结果：类风湿性关节炎各证型分布存在显著差异（χ2=179.679,P=0.000）。类风湿性关节炎各证型在性别（P=0.217）、病程（P=0.804）方面无显著性差异,而在年龄（P=0.012）方面存在显著性差异。在年龄方面：年龄〈40岁的患者,证型分布依次为寒湿痹阻证〉湿热痹阻证〉肾气虚寒证〉肝肾阴虚证;40~60岁的患者,证型分布为寒湿痹阻证〉湿热痹阻证〉肝肾阴虚证〉肾气虚寒证〉痰瘀互结证;年龄〉60岁的患者,证型分布为寒湿痹阻证〉肝肾阴虚证〉湿热痹阻证〉肾气虚寒证〉痰瘀互结证。结论：湖南地区类风湿性关节炎主要证型为寒湿痹阻证,其次为湿热痹阻证、肝肾阴虚证,肾气虚寒证、痰瘀互结证相对较少。年龄可能是影响湖南地区类风湿性关节炎证型分布的主要因素之一。

理中汤调控Raf/MEK/ERK信号通路抗大鼠胃溃疡的效应与机制

目的基于Raf/MEK/ERK信号通路探究理中汤(LZT)治疗大鼠胃溃疡(GU)的效应及分子机制。方法将SD大鼠随机分为正常组、模型组、埃索美拉唑组、LZT低、高剂量组。肉眼结合HE染色观察胃黏膜溃疡形态改变;测定胃酸和胃蛋白酶活性;ELISA法检测胃黏膜前列腺素E 2(PGE 2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;免疫荧光法检测胃黏膜p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠胃黏膜可见明显的溃疡损伤,LZT具有较好的修复大鼠胃溃疡的作用。与模型组相比,LZT治疗组溃疡指数明显降低,胃酸酸度和胃蛋白活性均明显下降,胃黏膜TNF-α含量明显降低、PGE 2含量和SOD活性均明显升高,胃黏膜p-Raf、p-MEK、p-ERK蛋白表达均明显下调。结论理中汤具有良好的治疗大鼠脾胃虚寒型GU的效应,其作用机制可能与干预Raf/MEK/ERK信号通路,调控胃黏膜炎性介质释放和抗氧化作用有关。

二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型的建立

目的通过对二甲苯的用量和保留时间进行研究,优选二甲苯致小鼠耳肿胀急性炎症模型的最佳成模条件。方法二甲苯涂抹昆明系小鼠右耳廓上下两面,诱导建立急性耳肿胀,对二甲苯剂量(20、30、40μL)和保留时间(30、45、60、75、90 min)进行优选,并采用阳性药对优选建立的小鼠耳肿胀急性炎症模型进行验证。结果二甲苯用量对鼠耳肿胀率影响不明显(P>0.05);但随保留时间延长,耳肿胀度呈下降趋势,且90 min组与30 min组比较有显著性差异(P=0.045)。与模型组比较,经吲哚美辛治疗后,耳肿胀度显著降低(P=0.007),TNF-α含量亦明显下降(P<0.001)。结论二甲苯用量20μL,保留时间30 min,可成功建立最佳的小鼠耳肿胀急性炎症模型。

一种小鼠2型糖尿病合并动脉粥样硬化模型的构建方法及评价

目的:对比2型糖尿病合并动脉粥样硬化的造模方法,研究优化模型条件,构建一种发病过程类似人类2型糖尿病合并动脉粥样硬化的小鼠模型。方法:8周龄MKR小鼠20只,随机选取10只作为MKR空白组,剩余MKR小鼠(MKR模型组)与FVB/N小鼠(FVB/N对照组,10只)及ApoE^(-/-)小鼠(ApoE^(-/-)模型组,10只)腹腔注射链脲佐菌素(STZ),后经高脂乳剂及N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)灌胃联合诱导完成糖尿病动脉粥样硬化模型制备,另取10只FVB/N小鼠作为正常组。造模诱导12周后采血,血糖仪(电化学法)检测空腹血糖;全自动生化分析仪检测血脂相关指标;化学发光法测定血清胰岛素水平;ELISA检测血清C-反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)及IL-18水平;HE及Masson染色观察胰腺和动脉组织病理学形态改变;免疫组化检测动脉组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)和金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)的表达水平。结果:(1)与正常组比较,MKR模型组血糖、血脂及胰岛素水平显著升高(P<0.05),呈现明显糖脂代谢紊乱及胰岛素抵抗特征。造模诱导组间比较中,MKR模型组血糖、血脂及胰岛素水平显著高于FVB/N对照组(P<0.05),而与ApoE^(-/-)模型组水平相当(P>0.05)。(2)ELISA结果显示,与MKR模型组比较,MKR空白组、FVB/N对照组及正常组血清CRP、TNF-α、IL-1β和IL-18水平显著降低(P<0.05),而ApoE^(-/-)模型组差异无统计学显著性(P>0.05)。(3)HE染色显示,与正常组比较,MKR模型组胰腺出现胰岛萎缩,胰岛细胞减少,小叶间隙增宽及明显炎症细胞浸润表现,主动脉出现明显斑块脂质斑块沉积;Masson染色观察到斑块内胶原含量明显减少。(4)免疫组化结果显示,MKR模型组动脉组织MMP-9表达与正常组比较显著上调,TIMP-1表达显著下降,而与ApoE^(-/-)模型组比较差异无统计学显著性(P>0.05)。结论:MKR小鼠经STZ、高脂乳剂及L-NAME诱导建立的模型可作为研究2型糖尿病血管并发症的一种病理模型。

甘草对胃黏膜上皮细胞损伤修复及多胺含量影响的研究

目的观察甘草含药血清对胃黏膜上皮细胞(GES-1)迁移、增殖及细胞内多胺(腐胺、精脒、精胺)含量的影响,探讨甘草促进胃黏膜损伤修复的作用机制。方法枪头(Tips)划痕法建立GES-1细胞损伤迁移模型,NIH Image J软件统计分析细胞迁移率;MTT法检测细胞增殖;柱前衍生高效液相色谱法测定细胞内多胺含量。结果 10%甘草含药血清可加速GES-1细胞迁移(与空白对照血清组比较P<0.01);在损伤后24 h或36 h,10%甘草含药血清可促进GES-1细胞增殖(与空白对照血清组比较P<0.01);10%甘草含药血清可提高胃黏膜上皮损伤修复过程细胞内腐胺、精脒和精胺含量(与空白对照组血清组比较P<0.05,P<0.01)。结论益气健脾中药甘草可促进胃黏膜损伤修复,其机制可能与提高细胞内多胺(腐胺、精脒、精胺)含量,促进细胞迁移和增殖有关。

黄芪多糖调控多胺介导的Ca^(2+)-RhoA通路促进小肠上皮细胞迁移研究

目的考察黄芪多糖对小肠上皮细胞(IEC-6)迁移及迁移过程细胞内多胺水平、细胞质游离钙离子([Ca2+]cyto)的量、细胞骨架蛋白Rho A表达的影响,探讨黄芪修复胃肠黏膜损伤的疗效机制。方法黄芪药材经水提醇沉、Sevage法去蛋白后得到黄芪粗多糖,运用DEAE纤维素柱分离得到黄芪多糖I、II、III、IV,黄芪多糖I以Sephadex LH-20凝胶柱色谱得到黄芪多糖V。Tips划痕法建立IEC-6细胞损伤迁移模型,柱前衍生高效液相色谱法测定多胺的量,流式细胞仪检测[Ca2+]cyto水平,Western blotting法检测Rho A蛋白表达。考察黄芪多糖对正常IEC-6细胞[未加α-二氟甲基鸟氨酸(DFMO)]和多胺耗竭IEC-6细胞(加入DFMO)迁移、多胺水平、[Ca2+]cyto的量及Rho A蛋白表达的影响。结果黄芪粗多糖、黄芪多糖I、黄芪多糖V(50、100、200 mg/L)均能促进IEC-6细胞迁移(P<0.01),并且可逆转多胺合成抑制剂DFMO所致的细胞迁移抑制效果(P<0.01);在正常(未加DFMO)或多胺耗竭情况(加DFMO),黄芪多糖V均可提高迁移过程细胞内多胺的量(P<0.01);黄芪多糖V可提高细胞迁移过程[Ca2+]cyto水平(P<0.01),并且可逆转DFMO所致的[Ca2+]cyto水平下降(P<0.01);黄芪多糖V(100、200 mg/L)可明显提高Rho A蛋白表达,同时可逆转DFMO所导致的Rho A蛋白表达抑制作用。结论黄芪多糖可加速胃肠黏膜损伤早期修复过程,其机制可能与增加黏膜上皮细胞多胺的量,提升[Ca2+]cyto,从而提高Rho A蛋白表达,进而促进胃肠黏膜上皮细胞迁移有关。

西黄丸抗肿瘤作用机制的研究进展

随着我国人口老龄化进程加快,病原微生物的持续感染以及不健康生活方式等影响,肿瘤已成为我国民众健康面临的最大难题之一。根据国家癌症中心发表的最新数据报告显示,平均每天超过1万人被确诊为癌症[1]。目前,放疗、化疗及手术治疗手段仍占据着临床上对抗肿瘤的制高点。虽能取得一定的临床效果,但患者的不良反应和机体损伤均较大。对于临床上已失去有效治疗的肿瘤中晚期患者,结合中医药综合治疗的方法目前被视为一个较大的突破口。

左归降糖清肝方通过改善肠道菌群稳态促进2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病小鼠肠黏膜屏障的修复

研究左归降糖清肝方对高脂饮食诱导的2型糖尿病(T2DM)合并非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的肠道菌群稳态调节及肠黏膜屏障的修复作用。以MKR转基因小鼠(T2DM小鼠)为研究对象,使用高脂饮食(HFD)来诱导NAFLD,然后用左归降糖清肝方(7.5、15 g·kg^(-1))、二甲双胍(0.067 g·kg^(-1))对小鼠进行8周的治疗。取血清进行肝功能、甘油三酯的检测分析;肝脏组织行HE、Masson染色,肠组织进行HE、AB-PAS染色;利用16S rRNA测序观察各组小鼠肠道菌群的变化;采用免疫荧光、PCR法检测小鼠肠道黏膜屏障关键蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1及其基因(mRNA)的表达水平。结果显示,左归降糖清肝方可改善T2DM合并NAFLD小鼠体质量,降低肝脏指数,下调肝功能及血脂异常的血清生物标志物ALT、AST、TG,增加胰岛素敏感性,并改善葡萄糖耐受的情况。16S rRNA测序结果表明,左归降糖清肝方的治疗改变了肠道微生物群的组成和丰度,增加了Muribaculaceae、Lactobacillaceae、Lactobacillus、Akkermansia、Bacteroidota的相对丰度,降低了Lachnospiraceae、Firmicutes、Desulfobacterota、Proteobacteria、Desulfovibrionaceae的相对丰度。肠黏膜病理分析显示左归降糖清肝方可增加紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的表达水平,并促进肠道黏膜的修复,保护肠道绒毛,增加肠黏膜绒毛的高度及杯状细胞的数量。左归降糖清肝方可通过调节肠道微生物群稳态、促进肠道黏膜屏障的修复改善T2DM合并NAFLD诱导的肠黏膜损伤。

基于“肾主骨”理论探讨金匮肾气丸调控AGEs/RANKL/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症小鼠的影响

目的:基于“肾主骨”理论研究金匮肾气丸通过调控晚期糖基化终产物(AGEs)/核转录因子-κB(NF-κB)受体激活剂(RANKL)/NF-κB信号通路对糖尿病性骨质疏松症(DOP)小鼠的影响。方法:选取40只6周龄骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体功能缺失(MKR)小鼠,雌雄各半,高脂饲料喂养8周建立DOP模型,将造模成功的小鼠随机分成模型组、金匮肾气丸低、高剂量组(1.3、2.6 g·kg^(-1))和阿仑膦酸钠组(0.01 g·kg^(-1)),每组10只;另取10只同龄FVB/N小鼠为正常组。各给药组分别予以相应药物灌胃,每日1次,连续4周。给药结束后,各组小鼠行空腹血糖(FBG)检测和口服糖耐量实验(OGTT);检测小鼠肾功能和肾指数;采用苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察肾脏组织病理学变化;免疫组化检测小鼠肾脏组织AGEs、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)和RANKL蛋白表达水平;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肾脏组织AGEs/RANKL/NF-κB信号通路相关蛋白和股骨组织中骨保护素(OPG)、Runt相关转录因子2(RUNX2)蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠FBG显著升高(P<0.01),骨小梁退变,骨形态参数指标异常,OGTT的曲线下面积(AUC)显著升高(P<0.01),肾脏体积增大,肾功能指标、肾指数显著升高(P<0.01),肾小球、肾小管结构紊乱,肾脏组织AGEs、RANKL表达和p-NF-κB/NF-κB值明显升高(P<0.05),股骨组织中OPG和RUNX2表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,金匮肾气丸各剂量组小鼠OGTT的AUC显著降低(P<0.01),组织病理分析显示,肾小球和肾小管的结构病变缓解,肾脏组织AGEs、RANKL的表达和p-NF-κB/NF-κB值明显降低(P<0.05,P<0.01),股骨组织中RUNX2和OPG表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:金匮肾气丸可通过改善肾功能,下调AGEs/RANKL/NF-κB信号通路抑制炎性反应,进而缓解DOP小鼠骨质疏松症状,起到从肾论治DOP的作用。

大黄调控Nrf2/ARE通路对重剂蜈蚣给药小鼠的肝脏保护作用

目的:探讨大黄对重剂蜈蚣给药小鼠的肝脏保护作用机制。方法:以10倍剂量(6.5 g·kg^(-1)·d^(-1))蜈蚣提取物灌胃小鼠为模型,设置模型组、大黄干预组1(49 mg·kg^(-1)·d^(-1))、大黄干预组2(98 mg·kg^(-1)·d^(-1)),同时设置正常组。持续给药28 d,禁食24 h时观察小鼠肝脏组织形态学变化,测定血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)及碱性磷酸酶(ALP)含量,免疫荧光检测肝细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)表达及入核情况,WesternBlot测定组织醌氧化还原酶(NQ O1)和血红素氧化酶-1(H O-1)蛋白表达。结果:10倍剂量蜈蚣给药小鼠出现肝索结构模糊和细胞排列紊乱、水肿以及部分坏死,血清ALT、AST、ALP含量显著升高(P<0.05)。与模型组比较,大黄干预后可减轻病理形态学改变,显著降低血清ALT、AST、ALP含量(P<0.05),免疫荧光显示大黄干预两组肝细胞核内Nrf2表达增加,Western Blot显示大黄干预组1肝组织NQO1、HO-1蛋白表达显著升高(P<0.05)。结论:低剂量大黄即可改善重剂蜈蚣给药造成小鼠肝脏组织细胞损伤、稳定肝功能相关指标,激活Nrf2/ARE氧化应激通路并增强下游NQO1、HO-1蛋白表达,是其发挥肝脏保护机制之一。

四君子汤含药血清上调c-Myc表达促进小肠上皮细胞迁移和增殖

目的:考察四君子汤含药血清(SJZ)对小肠上皮(IEC-6)细胞损伤后迁移、增殖及c-核蛋白类基因(c-Myc)mRNA和蛋白表达的影响,以探讨四君子汤促进胃肠黏膜损伤修复的作用机制。方法:采用大鼠制备四君子汤含药血清,Tips划痕法建立IEC-6细胞迁移模型,观察四君子汤药物血清对细胞迁移的影响;实时细胞分析仪(RTCA)检测四君子汤含药血清对IEC-6细胞增殖的影响;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法检测c-Myc mRNA表达;蛋白免疫印迹(Western blot)法检测c-Myc蛋白表达。结果:中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞迁移(P<0.01);细胞损伤后12 h,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可促进IEC-6细胞增殖(P<0.01);细胞损伤后24 h和36 h,低(5%),中(10%),高(20%)体积浓度的四君子汤含药血清均可促进IEC-6细胞增殖(P<0.05,P<0.01);进一步研究发现,中体积浓度(10%)和高体积浓度(20%)的四君子汤含药血清可提高与胃肠黏膜损伤修复密切相关的c-Myc mRNA和蛋白表达(P<0.01)。结论:四君子汤修复胃肠黏膜屏障损伤,促进溃疡愈合的作用可能与其提高c-Myc mRNA和蛋白表达,促进黏膜上皮细胞的迁移和增殖有关。

护卵汤对早发性卵巢功能不全模型小鼠SIRT1/NF-κB/p53/p21通路的影响

目的:观察护卵汤对雷公藤多苷诱导早发性卵巢功能不全模型小鼠卵巢组织中凋亡相关蛋白沉默信息调节子1(SIRT1),肿瘤抑制基因p53,乙酰化p53(Ac-p53),细胞周期蛋白依赖性抑制剂p21,核转录因子-κB(NF-κB)p65表达情况及组织结构变化。方法:50只雌性C57BL/6J小鼠随机分正常组、模型组、护卵汤低、高剂量组、戊酸雌二醇组,采用雷公藤多苷80 mg·kg^(-1)·d^(-1)连续灌胃,第15天给予护卵汤低、高剂量组1.6,6.2 g·kg^(-1)·d^(-1)灌胃,戊酸雌二醇组给予戊酸雌二醇0.13 mg·kg^(-1)·d^(-1),连续21 d,正常组予等量蒸馏水。末次给药后取血和卵巢,苏木素-伊红(HE)染色观察组织形态学变化,ELISA检测血清中抗苗勒激素(AMH),促卵泡激素(FSH),黄体生成素(LH)水平含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Realtime PCR)法检测p53,p21 mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测SIRT1,p53,p21,Ac-p53,NF-κB蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠动情周期紊乱,卵巢体积减小,各级卵泡数明显减少,AMH含量降低,FSH,LH含量升高,p53,p21 mRNA表达显著升高,p53,p21,Ac-p53,NF-κB蛋白表达显著升高,SIRT1蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,护卵汤高剂量组卵泡增多,AMH升高,FSH,LH降低,SIRT1蛋白表达升高(P<0.01),p53,p21 mRNA表达水平显著下调(P<0.01),p53,p21,Ac-p53,NF-κB蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论:护卵汤的治疗可明显扭转衰老进程,其改善卵巢功能的机制可能与提高了卵巢细胞中SIRT1/NF-κB/p53/p21通路活性,改变细胞凋亡状态相关,从而增加了生长卵泡及成熟卵泡含量,降低了闭锁卵泡的含量。