不同中医临床证型下行型鼻咽癌组织细胞核蛋白质差异表达的初步研究

目的:研究下行型鼻咽癌不同中医临床证型患者原发病灶组织细胞核差异表达蛋白质,为中医证型分类的科学性提供依据。方法:采用双向凝胶电泳及基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(MALDI-TOF-MS)对下行型鼻咽癌火毒困结型、气阴两虚型和气血凝结型患者的鼻咽癌组织细胞核蛋白进行分离和表达谱研究,利用生物信息学方法鉴定差异蛋白质。结果:与下行型鼻咽癌气阴两虚型细胞核蛋白点相比,气血凝结型有28个蛋白点表达上调、12个蛋白点表达下调,火毒困结型有9个点表达上调,19个蛋白点表达下调;与下行型鼻咽癌气血凝结型细胞核蛋白点相比,火毒困结型有25个蛋白点表达上调、18个蛋白点表达下调。MALDI-TOF-MS成功鉴定出3个差异蛋白质,来源于气血凝结型鼻咽癌患者的瘤组织细胞不均一性核糖核蛋白H(heterogeneous nuclear ribonucleoprotein H,hnRNPH)和微管蛋白β链1(tubulinbeta-1chain,TUB1)表达上调,来源于火毒困结型鼻咽癌患者瘤细胞的核蛋白Ⅵ型胶原蛋白α2链(type Ⅵ collagen alpha 2 chain,COLⅥA2)前体表达下调。结论:下行型气血凝结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白hnRNPH和TUB1表达上调,下行型火毒困结型鼻咽癌患者的瘤细胞核蛋白中COLⅥA2前体表达下调。

依泽替米贝通过上调甾醇调控元件结合蛋白2、低密度脂蛋白受体促进肝细胞摄取低密度脂蛋白胆固醇

目的 探讨依泽替米贝对肝脏低密度脂蛋白胆固醇（LDLC）摄取的影响及其机制。 方法 使用5 mg/（kg·d）依泽替米贝灌胃高脂模型小鼠,4个月后测定其血液中总胆固醇（TC）、LDLC和高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）的含量；HE染色观察肝脏组织形态。依泽替米贝（30 μmol/L）与低密度脂蛋白（25 mg/L）共同孵育肝脏HepG2细胞24 h,油红O染色观察细胞的脂滴分布情况；酶学方法检测细胞内TC、游离胆固醇（FC）和胆固醇酯（CE）的含量；采用DiI-LDL检测细胞对LDLC的摄取情况；实时荧光定量PCR和Western blot分别检测甾醇调控元件结合蛋白2（SREBP-2）和低密度脂蛋白受体（LDLR）在mRNA及蛋白水平的表达；流式细胞术检测肝细胞膜上LDLR含量。 结果 依泽替米贝降低小鼠血浆中TC和LDLC的含量,升高HDLC含量,减少肝脏脂质沉积；提升HepG2细胞摄取LDLC的能力,促进FC向CE转化；上调HepG2细胞中SREBP-2和LDLR的表达水平,并增加LDLR在细胞膜上的分布。 结论 依泽替米贝通过上调SREBP-2、LDLR促进肝细胞摄取LDLC。

细胞炎症反应与脂质代谢的相互作用及调节

本文讨论了脂质代谢紊乱与炎症反应在动脉粥样硬化发生发展中的作用及相互关系。脂质代谢失衡诱发炎症反应;脂蛋白异常修饰和异常定位调节炎症反应,脂质代谢紊乱通过影响单核细胞、M1/M2漂移、核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白3炎症小体等诱导炎症反应。而炎症促进细胞对脂质的摄取和蓄积,抑制细胞脂质流出,与脂代谢紊乱共同促进了动脉粥样硬化的发展。Caveolae/Caveolin、核因子κB通路和过氧化体增殖物激活型受体通路等调节了炎症与脂代谢之间的相互作用。

雷公藤红素通过激活LXRα/ABCA1通路和细胞自噬抑制巨噬细胞脂质蓄积

巨噬细胞源性泡沫细胞转化被认为是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)形成与发展的早期变化,其细胞内蓄积的过量脂质可通过促进血管内膜生长与坏死核形成,继而诱发斑块破裂及血栓形成等严重后果.近期研究发现,雷公藤红素可显著调节脂质代谢,对泡沫细胞转化进程具有潜在的治疗意义.本研究表明,雷公藤红素(Celasrol,CeT)呈浓度依赖性减少巨噬细胞Raw264.7内的脂滴积蓄,并上调胆固醇转运关键分子ABCA1、LXRA蛋白质表达.进一步研究显示,CeT可逆转ABCA1敲低介导的脂质蓄积与ABCA1表达下调.此外,CeT处理Raw264.7细胞24 h时观察到自噬标志物LC3Ⅱ/Ⅰ增加、p62减少,且采用自噬抑制剂3MA可恢复细胞内脂质水平.综上,CeT可能通过上调LXRα/ABCA1信号及激活荷脂细胞自噬,抑制巨噬细胞内脂质蓄积.因此,深入探究CeT在巨噬细胞源性泡沫细胞转化及AS发生发展中的作用,是研究AS治疗新的着力点,并为药物干预提供新的靶点.

病证结合模式下肺癌实验动物模型的研究进展

肺癌(lung cancer)的高发病率与高死亡率对人民健康造成了极大的危害。中医药在恶性肿瘤的防治方面具有广泛的临床经验,在治疗肺癌方面也显示出明显的优势。实验动物模型是肺癌研究领域中必不可少的一部分。构建中医特色的病证结合动物模型是以中医辨证论治理论为基础,将中医证候纳入了评价标准,使动物模型既符合西医疾病特征又具备中医证候的特点。本文总结了当前常用的肺癌动物模型和病证结合动物模型的构建方法与特点,以期为从事肺癌科学研究的中西医科研工作者提供参考。

高血压病血管重塑的分子机制及中医药干预

血管重塑是高血压病的一种显著性病理特征,在发展过程中受到复杂的调控网络调控。血管重塑早期是一种适应性的过程,但最终变为适应不良和失代偿,损害心、脑、肾等重要靶器官,引发高血压并发症。本文就目前报道的血管重塑在高血压病及并发症病程进展中的作用和机制研究进展作一综述,并阐述了中医药干预血管重塑的基础及临床研究依据。深入阐明高血压病血管重塑的分子机制、治疗靶点及活性物质筛选将有助于提供有效的血管保护方法。

LC-MS/MS测定大鼠血浆中乌头碱的浓度

目的:建立LC-MS/MS法检测大鼠血浆中乌头碱的浓度。方法:以维拉帕米作内标,血浆样品经MTBE液液萃取后,采用HyPURITYCyano(150mm×2.1mm,5μm)柱分离,流动相为乙腈:10mmol/L甲酸铵=(70∶30,V/V),流速为0.30mL/min。然后采用电喷雾离子源(ESI源)正离子多反应监测(MRM)扫描分析,乌头碱和维拉帕米的离子选择通道分别为:m/z646.4→586.4和455.2→164.9。结果:乌头碱的线性范围为9.3～2390pg/mL,最低检测浓度为9.3pg/mL,日内和日间变异均<15%。结论:本方法灵敏度高,适用于乌头碱在鼠内的药物代谢动力学研究。

雷公藤红素通过调节血管平滑肌细胞表型转化改善血管重塑的作用机制研究

目的 研究雷公藤红素(CeT)通过调节血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化对血管重塑的作用及机制。方法 将A7r5细胞随机分为对照组(正常培养)、模型组(30 ng·mL^(-1)PDGF-BB)、CeT低剂量组(30 ng·mL^(-1)PDGF-BB+1.5μmol·L^(-1))、CeT中剂量组(30 ng·mL^(-1)PDGF-BB+2.0μmol·L^(-1))和CeT高剂量组(30 ng·mL^(-1)PDGF-BB+2.5μmol·L^(-1))。用划痕实验检测A7r5细胞迁移情况;用蛋白质印迹(Western blot)法检测细胞表型转化相关蛋白及细胞中信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)和磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。通过手术剥夺动脉方式建立小鼠股动脉导丝拉伤模型;将50只C57BL/6小鼠随机分为5组,每组10只,分别为假手术组、手术组、溶媒组(DMSO组)、低剂量CeT组(1 mg·kg^(-1))、高剂量CeT组(2 mg·kg^(-1))。以苏木精-伊红(HE)染色检测CeT对小鼠股动脉血管重塑的影响;以免疫组化染色检测CeT对VSMCs表型转化相关蛋白的影响。结果 与对照组比较,模型组24 h存活率和迁移率增加;与模型组相比,CeT中、高剂量实验组24、48 h存活率和迁移率均明显降低(均P<0.05)。与对照组相比,模型组的平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平均明显降低,骨桥蛋白(OPN)蛋白水平明显升高(均P<0.05);与模型组相比,CeT低、中、高剂量实验组的SM-MHC、α-SMA、平滑肌22α蛋白(SM22α)和p-STAT3/STAT3蛋白表达水平均明显升高,OPN蛋白水平明显降低(均P<0.05)。假手术组、手术组、DMSO组和低、高剂量CeT组股动脉SM-MHC水平分别为(41.55±2.21)%、(16.46±1.74)%、(16.15±1.96)%、(39.33±1.98)%、(38.92±5.97)%;α-SMA水平分别为(40.35±1.24)%、(10.60±5.50)%、(16.55±1.45)%、(41.47±4.05)%、(40.65±3.14)%;SM22α水平分别为(39.04±1.08)%、(7.19±0.81)%、(7.81±4.02)%、(31.20±4.86)%、(42.28±2.31)%;钙调蛋白(Calponin)蛋白水平分别为(37.21±2.15)%、(9.99±4.97)%、(11.27±3.69)%、(37.04±2.25)%、(36.27±3.21)%;OPN蛋白水平分别为(20.37±1.48)%、(32.78±5.70)%、(34.44±1.88)%、(14.38±6.62)%、(17.58±3.13)%;手术组与假手术组比较,低、高剂量CeT组与DMSO组比较,上述指标差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 雷公藤红素通过抑制VSMCs表型转化,减少VSMCs增殖和内膜增生,从而抑制血管重塑的发生发展。

基于网络药理学和实验验证探讨雷公藤红素抗血管重塑的作用机制

目的基于网络药理学和实验验证探讨雷公藤红素抗血管重塑的潜在靶点和作用机制。方法通过Swiss Target Prediction、PharmMapper数据库筛选出雷公藤红素作用靶点。采用NCBI Gene、GeneCards及OMIM数据库预测血管重塑相关靶点,聚焦共同靶标,借助Cytoscape 3.8.1及STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用(protein-protein interaction,PPI)并筛选核心靶点。通过构建体外血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖模型和小鼠股动脉拉伤模型,考察雷公藤红素对VSMCs增殖、促炎细胞因子水平及关键靶点表达的影响。结果共获得雷公藤红素靶点56个,血管重塑靶点737个,药物疾病共同靶点20个,核心靶点有细胞周期蛋白D1(cyclin D1)、原癌基因c-Myc、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)等。体外细胞实验表明,雷公藤红素显著抑制A7r5血管平滑肌细胞增殖能力(P<0.01),显著下调cyclin D1、c-Myc、NLRP3和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1(cystein-asparate protease-1,Caspase-1)的蛋白表达(P<0.05、0.01)。动物实验结果显示,雷公藤红素显著抑制股动脉拉伤小鼠模型股动脉NLRP3和Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.01、0.001),降低血清中白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和IL-1β水平(P<0.01、0.001)。结论雷公藤红素可抑制VSMCs增殖,减轻损伤血管的重塑,其作用机制可能与改善血管炎症有关。

SARS-CoV-2与SARS-CoV的主要生物学特性差异对研发防治COVID-19药物的启示

本文分析了2019年新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的基本构成、遗传性状、受体特征、蛋白切割位点、进入宿主细胞机制及引起细胞因子风暴等主要生物学特征,并与2003年“非典”病毒(SARS-CoV)进行比较,以期对研发防治COVID-19药物有所启示。