ELK-1/JNK/c-Fos对左归降糖解郁方(ZGJTJYF)体外培养的模拟糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元凋亡中的作用

目的:研究信号通路ELK-1/JNK/c-Fos在左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下抗海马神经元凋亡中的作用。方法:原代培养海马神经元,加入高糖(150 mmol/L)+皮质酮(200μmol/L),构建DD体外细胞模型;将培养的海马神经元细胞随机分为5组:空白血清组、正常组、左归降糖解郁方含药血清组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)含药血清组和模型组(每组3个复孔)。模型组和正常组给予等量培养液,其余组加入相应体积分数10%的相应血清,均干预18 h。分别采用Hoechst染色、高内涵细胞成像分析技术和RT-PCR技术分别检测海马神经元凋亡情况及检测凋亡相关ELK-1、JNK和c-Fos蛋白和基因的表达。结果:与空白组比较,模型组细胞凋亡明显,其海马神经元凋亡数量明显增多,ELK-1、JNK和c-Fos的mRNA及蛋白表达水平均显著升高(P<0.05);与模型组比较,左归降糖解郁方含药血清组和阳性药含药血清组大鼠海马神经元可见局部亮点明显减少,凋亡细胞数显著减少,ELK-1、JNK和c-Fos蛋白及mRNA表达均明显下调(P<0.05),且神经网络及树突连接情况得到明显改善。结论:左归降糖解郁方可以减低DD环境下海马神经元中Elk-1、JNK、c-fos表达而起到抗凋亡的效果。

补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞模型大鼠海马组织Cdk5的调控

目的评价补阳还五汤精简方对大脑中动脉阻塞(MCAO)模型大鼠海马组织周期素依赖性蛋白激酶5(cyclin-dependent kinase 5,Cdk5)的调控。方法将♂SD大鼠随机分为假手术组、MCAO模型组、补阳还五汤干预组(灌胃3.15 g·kg^(-1))及补阳还五汤精简方干预组(灌胃2.41 g·kg^(-1)),每组按给药后1、3、7、14、28 d再各分5小组。采用免疫组化法、Western blot法和RT-PCR法考察不同时间点各组大鼠海马组织中Cdk5的表达。结果 MCAO模型大鼠海马组织中,脑缺血后1 d即出现Cdk5上调趋势,并随着脑缺血的加剧,Cdk5的表达继续上调,其中mRNA及蛋白水平在7~14 d达最大,28 d则出现下降趋势,与各时间点假手术组比较P<0.01,提示脑缺血损伤将激活Cdk5信号转导途径;补阳还五汤精简方干预后的3、7、14、28 d均能明显降低Cdk5的表达,与各时间点模型组比较P<0.05,且随着干预时间的延长,下调趋势越明显,干预28 d后,Cdk5的表达接近假手术组,提示补阳还五汤精简方可下调Cdk5的异常表达,与补阳还五汤原方比,两方对Cdk5的调控差异无统计学意义(P>0.05)。结论补阳还五汤精简方可能通过调控Cdk5的表达水平对脑缺血海马组织发挥保护作用。

理中汤超微颗粒与传统饮片临床疗效比较研究

目的对不同剂量理中汤超微配方颗粒与传统饮片治疗胃脘痛的临床疗效进行比较研究。方法将60例符合中医脾胃虚寒证诊断标准的胃脘痛患者随机分为传统汤剂组、1/3剂量组和1/5剂量组,分别予传统理中汤饮片制剂、1/3剂量的超微配方颗粒和1/5剂量的超微配方颗粒。比较分析3组用药1个疗程后的临床疗效。结果 3组在年龄、病程、治疗前证候积分、胃脘痛疾病疗效和证候疗效方面,组间比较差异无统计学意义(P>0.05),3组均能降低胃脘痛的严重程度、频率和持续时间,治疗前后比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论传统理中汤饮片制剂、1/3剂量超微配方颗粒和1/5剂量超微配方颗粒治疗胃脘痛的疗效无明显差异,且1/3剂量组与传统汤剂组的疗效十分接近。

下丘脑-垂体-肾上腺轴紊乱对焦虑性抑郁模型大鼠海马结构的影响

目的研究下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴紊乱对焦虑性抑郁模型大鼠海马结构的影响,探讨焦虑性抑郁的潜在发病机制。方法将大鼠随机分为空白组、溶媒组、焦虑组、抑郁组和焦虑性抑郁组,每组12只。采用慢性束缚应激联合皮质酮注射方法建立焦虑性抑郁大鼠模型,连续21 d;造模后采用高架十字迷宫(EPM)、旷场实验(OFT)、强迫游泳实验(FST)评价大鼠焦虑和抑郁样行为;HE染色检测大鼠HPA轴各组织及海马病理变化;ELISA检测大鼠血浆中促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)含量;Western blot检测大鼠海马糖皮质激素受体(GR)蛋白表达。结果焦虑性抑郁组大鼠进入开臂的时间、次数及自主活动次数均与焦虑组相当,不动时间显著增加,与对照组及抑郁组比较有显著差异(P<0.01或P<0.05);HPA轴各组织均出现不同程度损伤,海马神经元肿胀,呈空泡状;同时,血浆中CRH、ACTH和CORT含量显著增加(P<0.01或P<0.05),海马GR表达显著下降。结论焦虑性抑郁模型组大鼠具有显著的焦虑及抑郁样行为,其发病机制可能与机体HPA轴紊乱及其引发的脑内海马损伤密切相关。

腺苷A1受体激动剂减轻糖尿病并发抑郁症大鼠的认知功能障碍

目的观察腺苷A1受体(A1R)激动剂对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆功能的影响。方法将大鼠分为对照组、模型组、二甲双胍(Met)组[Met组:灌胃给予二甲双胍(0.18 g/kg) 28 d]和二甲双胍联合腺苷A1受体激动剂(Met+CPA)干预组[Met+CPA组:灌胃给予二甲双胍28 d,于第22天开始腹腔注射CPA(1 mg/kg),注射给药7 d]。观察大鼠血糖水平和学习记忆功能;ELISA检测大鼠海马谷氨酸的含量;用免疫组化法和Western blot检测海马谷氨酸转运体GLT-1和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖含量显著升高(P<0.01);学习和记忆功能明显下降(P<0.01);海马中谷氨酸含量明显升高(P<0.01);而GLT-1和BDNF表达显著下降(P<0.01或P<0.05)。与模型组比较,Met组大鼠仅血糖含量显著下降(P<0.01),其余指标均未见显著变化;而Met+CPA组大鼠血糖含量显著下降(P<0.01),认知功能得到明显的改善(P<0.01),海马中谷氨酸含量显著减少(P<0.01),且GLT-1和BDNF表达显著增加(P<0.01或P<0.05)。结论激活腺苷A1受体可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠的认知功能,这可能与其通过减少谷氨酸释放和增加神经营养作用双途径共同减轻神经元兴奋性毒性有关。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元凋亡的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠学习记忆能力以及海马JNK、Bcl-2、Bax表达的影响,探讨其对糖尿病并发抑郁症大鼠海马损伤的保护机制。方法采用高脂饲料灌胃联合尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型,继续给予28 d慢性应激建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。实验大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及左归降糖解郁方高、中、低剂量组。末次给药后,采用Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期时间,Western blot检测海马JNK、Bcl-2、Bax蛋白表达;RT-PCR检测JNK、Bcl-2、Bax基因表达。结果与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),JNK、Bax蛋白及基因表达明显上升,Bcl-2表达明显下降(P<0.05,P<0.01);与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量组大鼠逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),JNK、Bax蛋白及基因表达均明显下降,Bcl-2表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论左归降糖解郁方能明显改善糖尿病并发抑郁症大鼠的学习记忆能力,其作用机制可能与抑制海马神经元凋亡有关。

甘麦大枣汤对慢性应激抑郁大鼠HPA轴及海马显微结构的影响

目的研究甘麦大枣汤对慢性应激抑郁模型大鼠HPA轴及海马显微结构的影响,探讨其可能的抗抑郁机制。方法将SD大鼠随机分为6组:空白组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)、甘麦大枣汤高、中、低剂量组(3.84、1.92、0.96 g/kg),采用慢性不可预见性温和应激建立抑郁模型,于造模同时给药,连续21 d。采用糖水消耗实验和旷场测试检测大鼠的抑郁样行为,ELISA法检测大鼠血浆促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)的变化,HE染色观察大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回(DG)区的病理结构变化。结果与空白组比较,抑郁模型组大鼠蔗糖偏食度及自主活动次数显著下降(P<0.01),血浆CRH、ACTH、CORT含量显著上升(P<0.01),海马CA1区、CA3区以及DG区神经元均萎缩、缺失,损伤明显;与模型组比较,甘麦大枣汤高剂量组大鼠蔗糖偏食度及活动次数均显著提高(P<0.01),血浆ACTH、CORT含量下降(P<0.05),同时海马各区神经元损伤情况得到缓解。结论甘麦大枣汤能显著改善模型大鼠的抑郁样行为,其作用可能与调节HPA轴高亢,保护海马的损伤有关。

UPLC-Q-TOF-MS法分析双丹明目胶囊入血成分

目的采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)法分析双丹明目胶囊入血成分。方法大鼠灌胃药物浸膏后取血浆,分析采用Agilent Extend C_(18)色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm);流动相乙腈-水,梯度洗脱;体积流量0.4 mL/min。正离子采集模式下进行质谱全扫描。结果检测出36种入血原型成分,主要来源于旱墨莲和山茱萸。同时,鉴定出3种代谢产物,分别为原儿茶酸的葡萄糖醛酸结合物、丹参素的甘氨酸结合物、隐丹参酮的D环开环代谢产物。结论该方法稳定可靠,可为研究双丹明目胶囊治疗糖尿病视网膜病变在体内的药效物质提供一定依据。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症胎鼠海马神经元NR及mEPSC的影响

目的探讨左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁(diabetes mellitus with depression,DD)症状态下胎鼠海马神经元N-甲基-D-天冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartic acid receptor,NR)和微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic current,mEPSC)频率及幅度的干预作用。方法取胎鼠(16~18 d)的海马,进行分离纯化和培养,用神经元特异性烯醇化酶(NSE)免疫细胞化学染色法鉴定。随机把海马原代神经元分6组:空白组、模型组、空白血清组、MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组。根据分组,于空白组加10%的培养液;其他5组加15 mmol/L的高糖和50μmol/L的皮质酮予以造模;造模后,空白血清组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组中分别加10%的空白血清、二甲双胍+氟西汀含药血清、左归降糖解郁方含药血清,MK-801组中加10μmol/L的MK-801,同时干预18 h。蛋白NR2A、NR2B的表达运用高内涵细胞成像技术(high content analysis,HCA)检测;海马神经元细胞的mEPSC采用全细胞膜片钳技术来记录,并对比不同组间神经元细胞的mEPSC频率和电流幅度。结果经镜下观察及NSE鉴定,所培养的细胞是海马神经元细胞,阳性率在95%以上。经HCA检测,空白组细胞的胞体明显,形态完整,突触之间形成丰富的神经网络。与空白组比,模型组和空白血清组的海马神经元细胞出现萎缩、突触断裂或神经网络消失,蛋白NR2A、NR2B的荧光值增强(P<0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组、左归降糖解郁方组细胞突触间的连接恢复,蛋白NR2A、NR2B荧光值减弱(P<0.01或P<0.05)。膜片钳结果显示,对比空白组,模型组、空白血清组的mEPSC频率和幅度上升(P<0.01);与空白血清组比,MK-801组、二甲双胍+氟西汀组和左归降糖解郁方组的mEPSC频率和幅度下降(P<0.01)。结论左归降糖解郁方抗DD大鼠海马神经元细胞受损的保护作用机制,可能在于其能够调控DD状态下的海马神经元蛋白NR2A、NR2B的表达及突触可塑性功能。

S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响

目的探讨S100B、AQP4和CX43表达紊乱对糖尿病并发抑郁症大鼠海马血脑屏障功能的影响。方法将大鼠分为糖尿病组[高脂乳灌胃2周+尾静脉注射链脲佐菌素(STZ,38 mg/kg)]、抑郁症组(慢性不可预知性应激28 d)、糖尿病并发抑郁症组(联合以上两种方法建立)、对照组。造模结束后,旷场实验和Morris水迷宫实验观察大鼠行为学,ELISA检测血清S100B含量,免疫组化法检测海马血脑屏障AQP4和CX43的表达。结果与对照组比较,糖尿病组和抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间显著减少,逃避潜伏期延长(P<0.05,P<0.01);血清S100B含量明显增多(P<0.01);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P<0.01)。与糖尿病组比较,糖尿病并发抑郁症组大鼠自主活动次数和空间探索时间减少,逃避潜伏期延长(P<0.05,P<0.01);血清S100B含量明显增多(P<0.05);海马血脑屏障功能性蛋白AQP4、CX43积分吸光度明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论 S100B、AQP4和CX43表达紊乱所致海马血脑屏障功能障碍可能是糖尿病并发抑郁症发生机制之一。

逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症小鼠海马神经元突触后致密蛋白95表达的影响

目的观察逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症(BCRD)小鼠海马神经元突触后致密蛋白95(PSD95)的影响,探讨其对海马组织的可能保护机制。方法腋下注射4T1炎性乳腺癌细胞联合背部皮下注射皮质酮建立BCRD小鼠模型。随机分为模型组、紫杉醇组、紫杉醇+氟西汀组、逍遥抗癌解郁方组、紫杉醇+逍遥抗癌解郁方组,另取未造模BALB/c小鼠作为正常组。采用悬尾实验和强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,HE染色观察小鼠海马和乳腺肿瘤病理变化,免疫组化染色和Western blot检测小鼠海马PSD95的表达。结果与正常组比较,模型组小鼠悬尾实验、强迫游泳实验不动时间显著增加(P<0.01),海马结构损伤明显,PSD95表达水平显著降低(P<0.01);给予逍遥抗癌解郁方干预后,模型小鼠悬尾实验、强迫游泳实验不动时间明显减少(P<0.05),海马结构损伤得以恢复,PSD95表达显著升高(P<0.01),联合紫杉醇出现肿瘤细胞大面积坏死。结论逍遥抗癌解郁方可改善BCRD小鼠抑郁症状,有效辅助化疗药物抑制乳腺肿瘤增殖,并通过上调突触可塑性相关蛋白PSD95的表达,保护海马组织。

基于PCA-GRA的补阳还五汤及其精简方抗脑缺血损伤功效的谱效关系研究

采用高效液相色谱法获取12批补阳还五汤全方、14批补阳还五汤精简方指纹图谱化学成分的数据,运用主成分分析法(principal component analysis,PCA)对采集的数据进行降维处理,计算出综合排名第一的中药材指纹图谱批次。运用灰色关联度法(grey relational analysis,GRA)将所求批次的指纹图谱特征峰和脑损伤的保护作用关联起来,探讨补阳还五汤全方及精简方中指纹图谱共有峰和特有峰与脑损伤保护作用贡献程度的强弱关系。本研究结合PCA和GRA开展补阳还五汤谱效关系研究,能提升数据的有效性和准确度。

“风寒湿”外邪影响Th17/Treg失衡促进类风湿关节炎病证发生的分子机制研究

目的探讨Th17/Treg细胞在类风湿关节炎(痹证)中的表达情况及“风寒湿”外邪影响痹证发生的分子机制。方法(1)雄性SD大鼠90只,随机分为正常对照组、单纯佐剂性关节炎(AIA)组和AIA风寒湿痹组,每组30只。正常对照组和单纯AIA组大鼠正常饲养;AIA风寒湿痹组每天置于人工智能气候箱内接受风寒湿刺激,14 d后单纯AIA组和AIA风寒湿痹组免疫含有热灭活结合杆菌的完全弗氏佐剂(CFA);AIA风寒湿痹组CFA免疫后风寒湿再刺激6 d。各组动物CFA免疫前1天、免疫后第6、10天,分离外周血单核细胞(PBMCs),流式细胞术检测CD4^(+)Th17和CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞,分析Th17/Treg细胞比例。(2)雄性SD大鼠20只,随机分为正常对照组和AIA风寒湿痹组,每组10只。正常对照组和AIA风寒湿痹组大鼠的实验条件同(1)。CFA免疫后第14天麻醉大鼠,分离PBMCs,流式细胞术检测外周血CD4^(+)T细胞pSTAT3蛋白、CD4^(+)IL-17^(+)淋巴细胞pSTAT4和pSTAT6的蛋白平均荧光强度,RT-PCR检测外周血CD4^(+)T细胞中RORγt、Foxp3、STAT3、STAT4、STAT6 mRNA的表达。结果随着AIA风寒湿痹大鼠病情的进展,外周血CD4^(+)Th17细胞比例逐渐增加,CD4^(+)CD25^(+)Foxp3^(+)Treg细胞比例逐渐降低,与同时间点单纯AIA组大鼠比较,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。与正常对照组比较,AIA风寒湿痹组大鼠外周血CD4^(+)pSTAT3^(+)和CD4^(+)IL-17^(+)pSTAT4^(+)及CD4^(+)IL-17^(+)pSTAT6^(+)蛋白表达量显著增加,CD4^(+)T细胞中Foxp3 mRNA表达量显著降低,而RORγt、STAT3、STAT4、STAT6 mRNA表达量显著增加,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论“风寒湿”外邪可能通过JAK/STAT信号通路激活Th17细胞分化,并抑制Treg细胞分化,导致Th17/Treg细胞失衡,从而促进RA病证的发生。

左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症环境下海马神经元的影响

目的观察左归降糖解郁方对模拟糖尿病并发抑郁症(DD)环境下海马神经元的影响,探讨其可能的作用机制。方法海马神经元原代细胞取自受孕18 d SD大鼠胎鼠,葡萄糖联合皮质酮干预构建DD海马神经元细胞模型。将培养的海马神经元随机分为正常组、空白血清组、模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)药物血清组、中药(左归降糖解郁方)药物血清组和阻断剂组。正常组和模型组给予等量培养液,阻断剂组给予促肾上腺皮质激素释放激素1型受体(CRHR1)阻断剂安塔拉明200μmol/L,其余组给予体积分数为10%的药物血清或空白血清,造模干预18 h后,尼氏染色检测海马神经元损伤情况,高内涵细胞成像分析(HCA)技术检测CRHR1、突触可塑性相关蛋白切丝蛋白(Cofilin)和肌动蛋白(Actin)蛋白的表达,实时荧光定量PCR检测CRHR1、Cofilin和Actin mRNA的表达。结果与正常组及空白血清组比较,模型组海马神经元神经网络、树突棘断裂或消失,尼氏小体数量显著减少,CRHR1表达明显上调(P<0.01),Cofilin和Actin表达明显下调(P<0.05);与模型组比较,阳性药药物血清组、中药药物血清组和阻断剂组可一定程度上逆转上述变化(P<0.05,P<0.01)。结论左归降糖解郁方对模拟DD环境下海马神经元具有保护作用,其机制与调控CRHR1、Cofilin、Actin的表达有关。

逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症小鼠海马CRHR1、GR、BDNF mRNA表达的影响

目的研究复方中药逍遥抗癌解郁方对乳腺癌并发抑郁症(breast cancer related depression,BCRD)小鼠海马促肾上腺皮质激素释放激素受体1(corticotropin releasing hormone receptor 1,CRHR1)、糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)mRNA的调控作用,阐明其对海马组织的可能保护机制。方法通过腋下注射4T1炎性乳腺癌细胞联合背部皮下注射皮质酮建立BCRD小鼠模型并随机分为模型组、紫杉醇组、紫杉醇+氟西汀组、逍遥抗癌解郁方组、紫杉醇+逍遥抗癌解郁方组,同时设正常组。采用悬尾实验和强迫游泳实验检测小鼠抑郁样行为,HE染色观察小鼠海马的病理结构变化,实时荧光定量PCR检测CRHR1、GR、BDNF mRNA的表达。结果与正常组相比,模型组小鼠悬尾实验、强迫游泳实验中不动时间显著增加(P<0.01),海马结构损伤明显,GR、BDNF mRNA表达显著下降(P<0.01),CRHR1 mRNA表达显著上升(P<0.01);给予逍遥抗癌解郁方干预后,模型小鼠悬尾实验、强迫游泳实验中不动时间下降(P<0.05),海马结构损伤得以恢复,GR、BDNF mRNA表达显著上升(P<0.01)、CRHR1 mRNA表达显著下降(P<0.01)。结论逍遥抗癌解郁方可以改善BCRD小鼠的抑郁症状,保护海马组织,其作用机制与上调GR、BDNF和下调CRHR1的mRNA表达有关。

不同产地天麻标准汤剂的制备与质量评价研究

目的:制备天麻标准汤剂,并建立其质量评价方法。方法:收集有代表性的15批天麻药材,以水为溶媒,采用标准化制备工艺制备标准汤剂,计算出膏率。采用HPLC法建立天麻标准汤剂的指纹图谱,并测定其中天麻素和对羟基苯甲醇的含量,计算转移率。结果:15批天麻标准汤剂的出膏率范围为10.50%~21.15%,平均值为16.47%,标准偏差为3.62%。天麻素含量范围为4.85~20.12 mg·g-1,均值为13.56 mg·g-1,标准偏差为4.667 mg·g-1,其转移率范围为22.67%~69.25%,均值为50.66%,标准偏差为12.31%。对羟基苯甲醇含量范围为4.28 mg·g-1~14.38 mg·g-1,均值为7.91 mg·g-1,标准偏差为3.22 mg·g-1,转移率范围为40.90%~89.48%,均值为60.62%,标准偏差为15.21%。标准汤剂指纹图谱共得到7个峰,其中天麻素与对羟基苯甲醇含量较高,与药材保持一致。结论:15批不同产地天麻药材与其对应的标准汤剂基本属性保持一致,但不同产地之间存在一定差异,以云南产地较佳。该实验制备了天麻的标准汤剂并建立了其质量评价方法,为后续天麻配方颗粒及其标准汤剂的质量控制提供了参考。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠前额叶-边缘结构及GR/BDNF/NPY表达的影响

目的:探讨百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠前额叶-边缘(海马、杏仁核)结构及GR/BDNF/NPY表达的影响。方法:将SD大鼠按体质量随机分为7组:焦虑性抑郁模型组、阳性药(文拉法辛6.75 mg/kg)组、百合疏肝安神汤高(24.28 g/kg)、中(12.24 g/kg)、低(6.12 g/kg)剂量组,另设空白对照组和溶媒组;连续21 d慢性束缚应激+孤笼饲养,并皮下注射皮质酮(30mg/kg)复制焦虑性抑郁症动物模型,造模同时灌胃给药,溶媒组皮下注射生理盐水+5%DMSO,空白对照组正常饲养。采用HE染色检测前额叶皮层、海马、杏仁核结构形态变化;Western blotting法测定糖皮质激素受体(glucocorticoid,GR)、脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)和神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)的表达。结果:与空白对照组比较,焦虑性抑郁模型大鼠前额叶皮层胶质细胞增多,神经元细胞数量减少,椎体神经元发生空泡样改变,细胞核萎缩;海马DG区和CA3区神经元丢失,CA3区神经元细胞核出现深染;杏仁核神经元细胞核边界模糊,细胞排列散乱,细胞数量明显减少;前额叶皮层、海马、杏仁核中GR、BDNF、NPY蛋白表达均显著降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,百合疏肝安神汤高剂量组大鼠前额叶皮层神经胶质细胞增生情况明显缓解,细胞排列较整齐;海马DG区和CA3区神经元细胞增多,CA3区神经元损伤减轻;杏仁核神经元损伤减轻;百合疏肝安神汤高剂量组大鼠前额叶皮层、海马、杏仁核中GR、BDNF、NPY蛋白表达均明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:百合疏肝安神汤抗焦虑抑郁作用可能与调节GR/BDNF/NPY信号级联反应,保护前额叶-边缘(海马、杏仁核)结构损伤有关。

左归降糖解郁方对DD大鼠海马NVU神经元mEPSC的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症(diabetes mellitus with depression, DD)大鼠海马神经血管单元(neurovascular unit, NVU)体外共培养体系的神经元微小兴奋性突触后电流(miniature excitatory postsynaptic currents, mEPSC)频率及幅度的影响,探讨其对海马NVU培养体系的保护机制。方法有效构建海马NVU体外培养体系,采用免疫细胞化学染色法进行细胞鉴定;采用高糖(150 mmol/L)联合皮质酮(200μmol/L)干预构建海马NVU细胞模型;采用全细胞膜片钳记录NVU体外共培养体系神经元mEPSC,比较各组NVU培养体系神经元mEPSC频率和电流幅度。结果经免疫细胞化学鉴定,NVU培养体系中细胞结构完整。与正常组和空白血清组相比,模型组大鼠海马NVU培养体系神经元mEPSC的频率和幅度均显著上升(P<0.01);与模型组相比,左归降糖解郁方血清组和阳性药血清组大鼠海马NVU体外培养体系神经元mEPSC的频率和幅度均显著下降(P<0.01);与阳性药血清组相比,左归降糖解郁方血清组大鼠NVU细胞培养体系神经元mEPSC频率和幅度差异均无统计学意义(P>0.05)。结论左归降糖解郁方可降低DD大鼠海马NVU体外培养体系神经元mEPSC的频率和幅度,对海马NVU培养体系的具有调控作用。

地■西平马来酸盐对体外糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元变性损伤及凋亡的保护作用

目的研究地■西平马来酸盐(MK-801)对体外糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元变性损伤和凋亡的影响。方法海马神经元原代细胞取自受孕18 d SD大鼠胎鼠用皮质酮联合葡萄糖干预构建DD海马神经元细胞模型。将培养的海马神经元随机分为正常组、模型组、对照组和实验组。对照组给予体积分数10%的阳性药药物血清,实验组给予终浓度为10μmol·L-1的MK-801溶液,正常组与模型组均给予等量细胞培养液。造模干预18 h后,用四氮唑蓝(MTT)法检测海马神经元细胞活力,用尼氏染色检测海马神经元变性损伤情况,用Hoechst荧光染色检测海马神经元的凋亡情况,用高内涵细胞成像分析技术检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR) 2种亚型NR2A和NR2B的蛋白表达。结果正常组、模型组及实验组海马神经元细胞活力分别为(100. 04±3. 26)%,(52. 55±2. 94)%和(65. 02±2. 96)%,NR2A平均荧光强度分别为(2038. 49±187. 03),(2378. 36±125. 99)和(1784. 81±102. 87),NR2B平均荧光强度分别为(1642. 52±122. 92),(1845. 79±108. 17)和(1453. 61±150. 80)。与正常组比较,模型组海马神经元细胞活力明显降低(P <0. 01),尼氏小体数量显著减少,神经元凋亡显著,NR2A和NR2B的蛋白表达量均明显升高(P <0. 01或P <0. 05);给予MK-801干预后可以逆转上述变化。结论 MK-801对体外DD大鼠海马神经元变性损伤及凋亡具有保护作用,其作用机制与下调NR2A和NR2B的蛋白表达量有关。

百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠细胞因子及单胺类神经递质表达的影响

目的研究百合疏肝安神汤对焦虑性抑郁症模型大鼠细胞因子及单胺类神经递质表达的影响。方法 SD大鼠按体重被随机分为7组:模型组、阳性药对照组(文拉法辛6.75 mg·kg^(-1))、高中低3个剂量实验组(百合疏肝安神汤,24.28,12.24,6.12 g·kg^(-1)),空白对照组(正常饲养)和溶媒组(皮下注射0.9%NaCl+5%二甲基亚砜)。经连续21 d慢性束缚应激+孤笼饲养,并皮下注射皮质酮(30 mg·kg^(-1))来复制焦虑性抑郁症动物模型。造模同时,灌胃给药。用酶联免疫吸附法检测血浆、前额叶皮层(PFC)、海马和杏仁核组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;以免疫印迹法检测PFC、海马和杏仁核组织中吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)表达;用HPLC-ECD法测定前额叶皮层、海马和杏仁核中单胺类神经递质5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)和去甲肾上腺素(NE)的含量。结果血浆TNF-α含量、PFC中IDO的OD值、PFC中5-HT含量、海马中DA含量、杏仁核中NE含量:空白对照组与模型组分别(53.00±7.36),(96.75±10.10)pg·mL^(-1);0.40±0.06,0.79±0.08;(477.10±63.56),(231.94±31.51)ng·mg^(-1);(432.08±30.00),(249.41±25.35)ng·mg^(-1);(829.55±116.67)ng·mg^(-1),(461.49±70.00)ng·mg^(-1),与空白对照组比较,模型组差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。血浆TNF-α含量、PFC的IDO的OD值、PFC的5-HT含量、海马DA含量、杏仁核NE含量:高剂量实验组分别为(73.62±7.46)pg·mL^(-1)与(0.55±0.08)及(362.60±42.53),(328.85±30.22),(664.40±65.05)ng·mg^(-1),与模型组比较差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论百合疏肝安神汤可能是通过调节大鼠血浆和大脑组织中细胞因子和单胺类神经递质,起到抗焦虑抑郁的作用。