益母草愈伤组织诱导与生物转化能力初探

目的:建立益母草愈伤组织培养体系,用于生物转化外源底物初探。方法:以MS为基本培养基,研究不同外植体及植物生长调节剂对益母草愈伤组织诱导及增殖的影响,并对获得的愈伤组织生物转化能力进行初探。结果:益母草子叶诱导率85.79%、真叶诱导率97.88%、下胚轴诱导率29.78%;诱导的最适配方为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;初期增殖最适配方为MS+2,4-D 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L;长期继代最适配方为MS+2,4-D 0.1 mg/L+6-BA 1 mg/L;最佳继代周期10 d;获得的3种愈伤组织悬浮培养均具有转化外源氢醌生成熊果苷的能力。结论:益母草愈伤组织经优选增殖,有望成为转化外源物质的良好材料。

前体喷施对小叶女贞叶中红景天苷含量累积的影响

目的:探寻喷施酪醇等前体后红景天苷在小叶女贞叶中累积的规律。方法:采用叶面施肥方式,将酪醇溶液喷施于小叶女贞叶片上。在喷施不同浓度的酪醇溶液和不同的喷施时间间隔后,采用HPLC法对叶中红景天苷含量每天变化的情况进行检测,并测定喷施酪氨酸等前体后小叶女贞叶片中红景天苷含量的变化。结果:喷施酪醇后,小叶女贞叶中红景天苷含量最高可增加6.5倍,喷施酪氨酸和对羟基苯丙酮酸均能显著增加红景天苷含量,但喷施酪胺不能。结论:小叶女贞中红景天苷的生物合成很可能是通过酪氨酸转氨代谢途径。通过喷施前体,可有效增加小叶女贞叶中红景天苷的含量,从而使其具有良好的开发利用价值。

DNA条形码技术在中药材鉴定中的应用

DNA条形码技术是一种新兴的分子鉴定方法,它能弥补传统化学方法和形态学方法鉴定中药材的不足之处。通过查阅文献,在分析DNA条形码技术的原理、发展的基础上,对目前一些热门的DNA条形码候选序列ITS、ITS2、psbA-trnh、rbcL、matK展开讨论,重点分析其在植物类和动物类中药材鉴定中的应用,为中药材的鉴定提供新的思路。

益母草植物DNA条形码的鉴定研究

目的:筛选并确定能用于益母草植物品种鉴定的DNA条形码。方法:通过分子标记手段,选取ITS2、psbA-trnH、matK、rbcL 4个条形码鉴定。并结合GENBANK数据库对不同来源植物样品进行分析,通过多序列对比、遗传距离分析、构建系统发育树比较不同的条形码序列在益母草中的鉴别能力。结果:ITS2条形码扩增效率高且数据稳定可靠。结论:ITS2条形码最适用于益母草植物的鉴定从而为益母草药材的鉴定奠定了基础。

熊果苷的药理作用与资源获取途径研究进展

熊果苷是一种美白化妆品添加成分,最初是从植物中发现的。随着近年来对其开展的药理学研究,发现其具有多种药用功效,因而应用市场也将越来越大。为便于进一步研究和开发利用,本文对熊果苷的药理学研究进行概述,并从资源植物、化学合成、生物转化三方面获取途径对其进行了综述。

水培益母草转化对苯二酚生成熊果苷的研究

目的:对水培益母草转化对苯二酚生成熊果苷的条件进行优化,以提高熊果苷的产量。方法:以水培益母草为转化反应体系,将对苯二酚施加于水培液中,研究不同添加浓度、不同水培液、蔗糖与对苯二酚摩尔比、转化时间、以及pH等几方面对转化效果的影响,通过HPLC测定转化产物熊果苷的含量,并采用LC-MS对产物进行鉴定。结果:对苯二酚施加量不宜超过8 mmol/L;以天黑后施加,转化24 h收获,熊果苷产量最高,是白天施加转化24 h的14倍;在水培液中按蔗糖与对苯二酚摩尔比0.5∶1添加蔗糖能有效促进转化,熊果苷产量比不加蔗糖的增加134%;调整水培液pH为7.5有利于转化产物的提高。结论:确定了本身不含熊果苷的水培益母草植株具有将外源对苯二酚转化生成熊果苷的能力,为熊果苷的获取开辟了一条新途径。

益母草悬浮细胞系的建立及转化外源氢醌生成熊果苷研究

目的建立益母草悬浮细胞系,并对其转化生成熊果苷的条件进行优化。方法以前期实验优选出的愈伤组织为材料建立悬浮细胞系,加入氢醌并培养一段时间后,测定胞内与胞外熊果苷产量,计算转化率。结果建立的益母草悬浮细胞系分散性良好,通过生长曲线的测定,确定加入氢醌的最佳时期为接种培养的第6日;通过对不同浓度氢醌、不同转化时间的研究,结合熊果苷产生的动力学研究,优选出加入3mmol/L氢醌转化12h的熊果苷总产量及胞内产量最高,氢醌转化率也较高。结论益母草悬浮细胞生长速度快,转化氢醌生成熊果苷的能力较强,有望开发成为新的生物转化体系。

女贞子不同产地及采收期苯乙醇苷类成分的含量研究

目的:建立同时测定女贞子药材中酪醇、红景天苷、特女贞苷、松果菊苷、毛蕊花糖苷含量的高效液相色谱方法,并考察女贞子不同产地及采收期苯乙醇苷类成分的含量。方法:样品经50%甲醇回流提取,采用ZORBAX SB-C_(18)色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温40℃,以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 ml·min^(-1),检测波长为224 nm(特女贞苷)、275 nm(酪醇、红景天苷)、332 nm(松果菊苷、毛蕊花糖苷)。运用聚类分析和主成分分析对数据进行统计。结果:聚类分析显示21批不同产地女贞子可分为3类,主成分分析提取出2个主成分,主成分综合评分显示湖南省郴州市安仁县、湖南省岳阳市、浙江省丽水市缙云大源镇女贞子品质较好。不同采收期含量测定结果表明5种成分总含量在12月份达到最高。结论:不同产地女贞子不同采收期女贞子5种成分含量差异较大,12月份可作为湖南省长沙市女贞子的适宜采收期,所建立的高效液相色谱色谱方法简便、准确,可用于女贞子的质量控制。

女贞子有效成分提取工艺及含量研究进展

中药女贞子分布广泛,价格低廉,用药历史悠久,药理作用明确,具有极大的开发利用价值。通过查阅近10年的文献,对女贞子有效成分的提取工艺、质量检测方法、含量3个方面的研究进展进行了归纳总结,以期为女贞子的开发利用提供参考。

药用植物离体培养研究进展

近年来,由于药用植物的大量开发应用、人工栽培的困难和品质退化等原因,导致许多药用植物资源严重短缺。而采用植物细胞或器官离体培养技术,可快速积累药用植物的活性成分,为资源短缺问题的解决提供了有效手段。本文从离体培养条件、天然活性成分的积累、离体培养体系三方面总结了药用植物离体培养近年来的研究进展。

益母草转化酪醇合成红景天苷的研究

红景天苷是红景天属植物中一种重要的次生代谢产物,因其具有多种生理功能而广受人们的青睐。目前,红景天苷需求量不断增长,传统的天然提取和化学合成已难满足市场需求,因而亟待新方法解决这一困境。前期研究发现,益母草具有转化酪醇合成红景天苷的能力,故本研究对益母草水培和悬浮细胞培养转化酪醇生成红景天苷的条件进行探讨。结果显示,以喷洒0.5%(36.2 mmol·L^(-1))酪醇溶液为主,再辅之以低浓度(<2 mmol·L^(-1))的酪醇水培液,可较好地促进益母草转化酪醇生成红景天苷。另外,对于益母草悬浮细胞系,3 mmol·L^(-1)的酪醇浓度是最佳的培养浓度,对其转化48 h后可达红景天苷最高转化率(63%),而且相较水培方式,益母草悬浮细胞在转化时间和空间上都有较好的优势。综上所述,益母草转化酪醇合成红景天苷的研究,不仅进一步证明益母草具有转化酪醇生成红景天苷的能力,而且还为红景天苷的生物转化,以及益母草相关医药保健产品的开发奠定了基础。

小叶女贞叶片转录组研究

目的探讨小叶女贞中化学成分生物合成的遗传基础。方法采用Illumina/SolexaHiseq2000测序平台在转录水平上对小叶女贞叶片进行高通量测序,结合生物信息学方法开展基因功能注释和SSR位点搜索。结果共获得4 907 020 800个cleanreads,含4.90Gb的有效数据。利用生物信息学对cleanreads进行拼接和组装共获得157 450条Unigene,总长度、平均长度和N50分别为115.49 Mb,734 bp和1 510 bp。进一步进行基因功能预测,在GO数据库中共有17 756条Unigene可被分别注释到细胞组分、分子功能和生物学过程3大类别中,将Unigene与COG数据库进行比对,可获得25个功能类别,其中大部分Unigene与叶片中物质的合成与转运相关。在KEGG数据库中进行搜索比对,Unigene可定位到21类代谢途径中,涉及重要次生代谢产物苯丙素类、黄酮类和萜类生成的Unigene数目分别为860,216和806条。利用SSR分析软件,在所有的Unigene中共搜索到17593个SSR位点,重复类型以二核苷酸为主。结论本研究首次对小叶女贞转录组进行测序分析,获得的参与次生代谢的关键基因可为研究小叶女贞药用成分的生物合成和调控机制研究奠定基础。