基于“冲气理论”探讨中药药对在治疗脑出血后神经炎症中的运用

脑出血(ICH)具有高病死率及高致残率的致病特点,而神经炎症是ICH后神经细胞和脑组织损伤的主要原因。ICH属中医“出血性中风病”的范畴,其病机特点为冲气上逆、气血上涌,造成脑玄府通透性增加,血气外溢,痰湿瘀血阻滞,脑神失司。其中,冲气上逆、气血上涌及血气外溢与ICH后各种炎性细胞的激活、炎性因子的释放有关;而气滞、津停、血瘀等病理改变造成脑玄府阻塞与脑出血后炎症因子的停积造成神经细胞损伤的过程相关。中药药对因具有增效减毒的特点而成为现在的研究热点,因此,本文基于“冲气理论”,从平冲、镇冲、调冲三个方面探讨了中药药对在治疗ICH后神经炎症中的运用,以期为ICH的中医药防治提供新思路。

肺心汤通过调控AMPK/mTOR信号通路抑制自噬对低氧性肺动脉高压大鼠的保护作用

目的探究肺心汤通过调控腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路对低氧性肺动脉高压(hypoxic pulmonary hypertension,HPH)大鼠的治疗作用及机制。方法36只SD雄性大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组以及肺心汤低、中、高剂量组。除正常组外,将其余5组置于氧气浓度为10.0%±0.5%的低氧舱内造模28 d,每天8 h,造模同时灌胃给药。4周后检测大鼠心肺血流动力学指标[右心室收缩压(right ventricular systolic pressure,RVSP),右心室肥厚指数(right ventricular hypertrophy index,RVHI),肺动脉加速时间/肺动脉射血时间(pulmonary acceleration time/pulmonary ejection time,PAT/PET)、三尖瓣环收缩期位移(tricuspid annulus plane systolic excursion,TAPSE)、右心室前壁厚度(right ventricular anterior wall thickness,RVAWT)];HE染色法检测肺动脉重塑;免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)蛋白共定位表达;透射电镜观察自噬溶酶体的数量;免疫组织化学法检测肺组织中p-AMPK、p-mTOR、微管相关蛋白1轻链3B(microtubule-associated protein light chain 3B,LC3B)、Beclin1和p62蛋白阳性表达。结果与正常组相比,模型组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT显著升高(P<0.01),PAT/PET和TAPSE显著降低(P<0.01);肺小动脉壁明显增厚,管腔狭窄,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比(the percentage of wall thickness of pulmonary arterioles to vascular diameter,WT%)显著升高(P<0.01);α-SMA和PCNA共定位表达显著增加;自噬溶酶体数量增加;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达上调(P<0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达下调(P<0.01)。与模型组相比,各给药组大鼠RVSP、RVHI及RVAWT显著下降(P<0.01),PAT/PET、TAPSE显著升高(P<0.05,P<0.01);肺小动脉壁增厚程度减轻,WT%显著降低(P<0.01);α-SMA和PCNA共定位表达减少;自噬溶酶体数量减少;肺组织中p-AMPK、LC3B和Beclin1蛋白阳性表达显著下降(P<0.05,P<0.01),p-mTOR及p62蛋白阳性表达显著上调(P<0.01)。与西地那非组相比,肺心汤低、中剂量组TAPSE降低(P<0.01);肺心汤低、中剂量组肺动脉中膜增厚程度增加,WT%增加(P<0.01);肺心汤低、中剂量组p-AMPK蛋白阳性表达升高(P<0.01),肺心汤高剂量组p-AMPK蛋白阳性表达降低(P<0.05);肺心汤低剂量组p-mTOR蛋白阳性表达降低(P<0.01)。结论肺心汤可能通过下调AMPK/mTOR信号通路抑制自噬,发挥改善HPH的作用。

百合地黄汤多糖提取工艺优化及抗焦虑抑郁药效评价

目的 优化百合地黄汤多糖提取工艺并初步评价其抗焦虑抑郁药效。方法 在Plackett-Burman实验基础上,以多糖得率与多糖含量的综合评分为评价指标,提取时间、加水量、醇沉浓度为考察因素,结合Box-Behnken响应面法优化百合地黄汤多糖提取工艺并验证。将40只ICR小鼠分为对照组、文法拉辛组[阳性对照,13.5 mg/(kg·d)]和百合地黄汤多糖高、低剂量组[5.28、2.64g/(kg·d),以生药量计],每组10只(雌雄各半)。药物组小鼠灌胃相应药液,对照组小鼠灌胃水10 mL/kg,每天1次,连续7 d。采用高架十字迷宫实验、旷场实验、强迫游泳实验、悬尾实验评价最优工艺所制提取物对小鼠焦虑抑郁样行为的改善情况,并采用酶联免疫吸附测定法检测其对小鼠脑组织中神经递质水平的影响。结果 百合地黄汤多糖的最优提取工艺为加25倍量水,提取1.5 h,醇沉浓度70%。3次验证实验的多糖得率、多糖含量平均值分别为33.10%、0.62 mg/mg,与预测值(36.14%、0.65 mg/mg)的相对偏差分别为8.40%、4.62%(RSD<2%,n=3)。所得百合地黄汤多糖提取物能显著增加小鼠进入开放臂的次数比例及开放臂停留时间比例、自主活动总距离及中心区域活动距离,并显著缩短其强迫游泳实验、悬尾实验不动时间(P<0.05或P<0.01);可显著升高小鼠脑组织中5-羟色胺、去甲肾上腺素(百合地黄汤多糖低剂量组除外)、γ氨基丁酸水平,并显著降低谷氨酸(百合地黄汤多糖低剂量组除外)水平(P<0.05或P<0.01)。结论 优化的百合地黄汤多糖提取工艺稳定、可行;所得多糖提取物具有明显的体内抗焦虑抑郁作用。

基于中西医临床病证特点的低氧性肺动脉高压动物模型分析

近年来,低氧性肺动脉高压发病率逐年升高,已严重危害人类健康。建立稳定有效的动物模型可推动低氧性肺动脉高压发病机制及相关药物研究。本文总结目前常见低氧性肺动脉高压动物模型的特点和造模机制,并对各类模型的中西医临床病证特点的吻合度进行分析与评价。慢性低氧、SU5416/慢性低氧、香烟烟雾诱导、博来霉素诱导、野百合碱/慢性低氧模型是5种常见低氧性肺动脉高压动物模型,其中SU5416/慢性低氧、香烟烟雾诱导模型吻合度较高,野百合碱/慢性低氧、博来霉素诱导模型吻合度一般,慢性低氧模型吻合度较低。

RELM-β基因敲除大鼠的繁育及基因型鉴定

目的探讨抵抗素样分子β(RELM-β)基因敲除大鼠的最优繁育方式和基因型鉴定方法。方法将RELM-β^(-/-)纯合子雌性Sprague Dawley(SD)大鼠和野生型雄性Wild type(WT)SD大鼠按2∶1交配,繁育出F1杂合子大鼠,采用RELM-β^(-/-)纯合子互交、RELM-β+/-杂合子互交、纯合子及杂合子互交(正交及反交)4种方式交配,PCR扩增凝胶电泳法鉴定子代大鼠基因型,观察子代大鼠的外形,统计子代大鼠数量、体质量及纯合率。结果PCR扩增凝胶电泳法成功鉴定亲代及子代大鼠的基因型,3种基因型大鼠的外观形态无明显差异,3周至6周龄大鼠体质量无明显差异,不同交配方式子代数量无明显差异。结论合理的繁殖方法并进行正确的鉴定是获得RELM-β基因敲除SD大鼠的重要途径,PCR扩增凝胶电泳法具有快速、经济,重复性较好的优点。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠前额叶皮层IR/IRS-1信号通路和能量代谢的影响

目的观察左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠前额叶皮层胰岛素信号通路相关蛋白表达及能量代谢的影响。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型。将大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组和左归降糖解郁方高、中、低剂量组,各组灌胃给予相应药物4周后,尾尖采血测量大鼠空腹血糖,旷场实验和强迫游泳实验评价大鼠抑郁样行为,ELISA检测大鼠血清胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)及前额叶皮层葡萄糖和丙酮酸含量,Western blot检测大鼠前额叶皮层胰岛素受体(IR)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)、p-IR、p-IRS-1蛋白表达及葡萄糖转运体4(GLUT4)蛋白的膜表达。结果与对照组比较,模型组大鼠空腹血糖、血清TC和TG含量显著增加(P<0.01,P<0.05),旷场实验活动次数显著减少,强迫游泳实验不动时间显著延长(P<0.01),大鼠前额叶皮层葡萄糖含量显著增加,丙酮酸含量显著减少,p-IR/IR和p-IRS-1/IRS-1比值及GLUT4蛋白膜表达均显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量组大鼠空腹血糖、血清TC和TG含量减少(P<0.01),旷场实验活动次数增加,强迫游泳实验不动时间缩短(P<0.01),大鼠前额叶皮层葡萄糖含量显著减少,丙酮酸含量显著增加,p-IR/IR和p-IRS-1/IRS-1比值及GLUT4蛋白膜表达均显著升高(P<0.01)。结论左归降糖解郁方可通过激活糖尿病并发抑郁症大鼠前额叶皮层IR/IRS-1信号通路,促进GLUT4膜转位并加速神经元能量代谢,从而发挥抗抑郁作用。

基于TRP/KYN代谢通路探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经元保护作用

目的探讨左归降糖解郁方(ZGJTJYF)对糖尿病并发抑郁症(DD)大鼠海马神经元的保护作用及其机制。方法(i)体内实验中,取60只SPF级雄性SD大鼠,随机分为6组,每组10只:空白组、模型组、阳性药组(1.8 mg/kg氟西汀+0.18 g/kg二甲双胍)、高剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-H,40.500 g/kg ZGJTJYF)、中剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-M,20.250 g/kg ZGJTJYF)和低剂量ZGJTJYF组(ZGJTJYF-L,10.125 g/kg ZGJTJYF)。除空白组外,其余各组均予以高脂乳剂灌胃联合单次尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)及4周慢性不可预见性温和应激(CUMS)建立DD模型。所有给药组在CUMS造模期间分别经灌胃给予对应药物处理,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃。处理4周后,通过检测大鼠的血糖、血清中糖化血红蛋白含量判断ZGJTJYF的降糖效果;通过开野实验和Morris水迷宫测试评价ZGJTJYF的抗抑郁作用;采用高效液相色谱联合电化学检测器(HPLC-ECD)检测大鼠海马中5-羟色胺(5-HT)水平;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠海马中色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)及吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的含量变化;采用免疫组织化学染色法(IHC)检测大鼠海马中突触素(SYN)、突触后致密物质95(PSD-95)蛋白的表达水平;采用蛋白印迹法检测N-甲基-D-天冬氨酸受体(NR)2A和NR2B蛋白的表达水平。(ii)体外实验中,分别取5只SPF级SD孕鼠(E16–18),6只SPF级SD新生鼠用于原代海马神经元(Ne)、星形胶质细胞(As)和小胶质细胞(MG)提取,构建Ne-As-MG共培养体系,并将其分为6组:空白组(PBS)、模型组[150 mmol/L葡萄糖+200μmol/L皮质酮(G&P)+PBS]、空白血清组(G&P+10%空白血清)、阳性药组(G&P+10%阳性药含药血清)、ZGJTJYF组(G&P+10%ZGJTJYF含药血清)和1-甲基-D-色氨酸组(1-MT,IDO阻断剂)(G&P+1-MT),给予对应处理18 h后,采用免疫荧光法检测神经元突触相关蛋白SYN、PSD-95、NR2A和NR2B表达水平;采用ELISA法检测炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α及TRP/KYN代谢通路中相关因子[TRP、KYN、犬尿喹啉酸(KYNA)和喹啉酸(QUIN)]水平。结果(i)体内研究结果表明,ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L可显著改善DD大鼠的血糖升高状态(P<0.01,P<0.05),ZGJTJYF-H、ZGJTJYF-M和ZGJTJYF-L均显著增加其自主活动能力和学习记忆能力(P<0.01,P<0.01,P<0.05);同时,ZGJTJYF-M可有效升高大鼠海马中5-HT和TRP水平(P<0.01),降低KYN和IDO水平(P<0.01),并能显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01),抑制海马内NR2A和NR2B异常活化(P<0.01)。(ii)体外研究结果表明,ZGJTJYF含药血清可显著提高海马神经元中SYN和PSD-95的表达水平(P<0.01);有效降低IL-1β(P<0.01)、IL-6(P<0.05)、TNF-α(P<0.01)、IDO(P<0.05)、KYN(P<0.05)和QUIN的水平(P<0.01),升高TRP和KYNA的水平(P<0.01);并对DD环境下神经元中的NR2A和NR2B异常活化具有显著的抑制作用(P<0.05)。结论中药复方ZGJTJYF可通过抑制大鼠海马中IDO表达,调节TRP/KYN代谢途径,有效改善海马中的5-HT不足,对DD导致的海马神经元损伤具有良好的保护作用,是防治DD的有效潜在治疗药物。

温阳健脾利水法治疗扩张型心肌病频发室性早搏验案1例

室性早搏(Premature Ventricular Complexes,PVCs)是较为常见的心律失常之一,当24 h PVCs数大于500时,称其为频发PVCs。扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy,DCM)是一类异质性心肌病,常合并室性心律失常(如频发PVCs)等,病情呈进行性加重,猝死风险高,而控制患者心律失常能有效降低其猝死风险,并能在一定程度上改善其心功能。现代医学在治疗频发PVCs上的手段有限,且具有一定不良作用,而中医药在这方面具有较大优势。现将1例运用温阳健脾利水法治疗扩张型心肌病PVCs并取得较好疗效的验案作简要叙述。

柴金解郁安神片调控ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常改善抑郁症大鼠腹侧海马神经元突触重塑的机制研究

探讨柴金解郁安神片调控前扣带皮层(ACC)-腹侧海马(vHPC)谷氨酸能神经环路异常改善抑郁症大鼠腹侧海马神经元突触重塑的分子机制。首先运用化学遗传将谷氨酸能腺相关病毒(AAV)定位注射至大鼠ACC脑区,并通过慢性温和不可预知性应激(CUMS)联合孤笼饲养复制大鼠抑郁模型,实验设正常组、模型组、AAV空载组、AAV病毒组、AAV病毒+糖皮质激素受体(GR)阻断剂组、AAV病毒+趋化因子受体1(CX3CR1)阻断剂组、AAV病毒+柴金解郁安神片组,采用水迷宫(Morris water maze)、旷场(open-field)和强迫游泳(forced-swimming)实验联合动物行为分析系统评估大鼠抑郁样行为;苏木素-伊红(HE)染色检测大鼠ACC及vHPC脑区神经元形态结构变化;免疫荧光及核磷酸蛋白(c-Fos)检测大鼠ACC-vHPC谷氨酸能神经环路激活情况;高尔基染色和透射电镜检测大鼠vHPC神经元树突、树突棘及突触亚微结构变化;免疫荧光、Western blot分别检测大鼠vHPC谷氨酸能神经元细胞内突触重塑相关蛋白谷氨酸受体2A(GRIN2A)、谷氨酸受体2B(GRIN2B)、Ca^(2+)/钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、丝裂原激活蛋白激酶激活蛋白激酶2(MK2)、丝切蛋白(cofilin)表达水平。结果表明,谷氨酸能AAV病毒激活后模型组大鼠抑郁样行为表型、ACC及vHPC神经元形态结构、突触超微结构损伤更加加重,而GR、CX3CR1阻断剂均能不同程度逆转其异常改变,提示ACC脑区内胶质细胞GR/CX3CR1双信号介导的ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常激活可能与抑郁的发生发展密切相关。有趣的是,柴金解郁安神片也能显著抑制AAV病毒诱导的ACC-vHPC神经环路激活及Glu含量异常升高,同时有效逆转模型组大鼠进一步加重的抑郁样行为和vHPC谷氨酸能神经元突触重塑,并揭示其改善腹侧海马神经元突触损伤的分子机制可能与调控突触重塑相关信号NR/CaMKⅡ、MK2/cofilin有关。综上,该文证实了柴金解郁安神片能有效调控ACC-vHPC谷氨酸能神经环路异常进而改善抑郁症大鼠腹侧海马谷氨酸能神经元突触重塑,其分子机制可能与调节突触相关NR/CaMKⅡ、MK2/cofilin信号通路有关,这可能是其发挥抗抑郁作用的重要机制。

左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸代谢的影响

探讨左归降糖解郁方对糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群和短链脂肪酸的调控以及神经炎症的影响。建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为4组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组以及左归降糖解郁方低、高剂量组,另设空白组,每组8只。随后,对大鼠进行抑郁样行为检测;采集脑脊液检测促炎性细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)],采集血清检测下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA轴)相关蛋白[促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇(CORT)]和葡萄糖代谢。收集各组肠道内容物,进行肠道菌群16S rRNA测序分析和短链脂肪酸(SCFAs)测序。结果提示,左归降糖解郁方不仅可以改善糖尿病并发抑郁症大鼠糖代谢(P<0.01),缓解抑郁样行为(P<0.05)和HPA轴亢进(P<0.05或P<0.01),还可以改善脑内炎症反应,表现为脑脊液中促炎性细胞因子显著降低(P<0.05或P<0.01);并改善肠道菌群,使糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群趋于空白组发展,表现为提高糖尿病并发抑郁症大鼠肠道菌群中厚壁菌门Firmicutes的丰度;并能够显著提高SCFAs(乙酸、丁酸、戊酸和异戊酸)的含量(P<0.01)。因此推测,左归降糖解郁方可有效改善肠道菌群紊乱,并调控SCFAs,从而改善糖尿病并发抑郁症糖代谢紊乱和抑郁样行为。

基于PPAR-γ/NF-κB信号通路探讨肺心汤对野百合碱诱导肺动脉高压大鼠模型的作用及机制

目的基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ/核因子κB(PPAR-γ/NF-κB)信号通路探讨肺心汤(黄芪、桃仁、红花、葶苈子、赤芍等)对野百合碱诱导肺动脉高压(PAH)大鼠模型的作用及机制。方法将48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西地那非组(0.025 g·kg^(-1))及肺心汤低、中、高剂量组(11.7、23.4、46.8 g·kg^(-1))。采用单次腹腔注射野百合碱溶液(60 mg·kg^(-1))构建PAH大鼠模型。造模1 h后开始灌胃给药,每日1次,连续28 d。检测各组大鼠的血流动力学及超声心动图指标:右心室收缩压(RVSP)、平均肺动脉压(m PAP)、右心肥厚指数(RVHI)、肺动脉加速时间(PAAT)、肺动脉射血时间(PET)、三尖瓣环缩期位移(TAPSE)、右心室舒张末期内径(RVIDd)和右心室前壁厚度(RVAWT);采用HE染色法观察肺小动脉病理改变;免疫荧光法检测大鼠肺动脉中α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达水平;ELISA法检测血浆白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;免疫组化和Western Blot法检测PPAR-γ/NF-κB信号通路相关蛋白表达水平。结果与正常组相比,模型组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd及RVAWT显著升高(P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著降低(P<0.01);肺小动脉血管壁明显增厚,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著升高(P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著升高(P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平显著升高(P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性表达率显著降低(P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著升高(P<0.01);肺组织中PPAR-γ、IκB-α蛋白表达显著下调(P<0.01);p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著升高(P<0.01)。与模型组比较,各给药组大鼠的RVSP、m PAP、RVHI、RVIDd和RVAWT均显著降低(P<0.05,P<0.01),PAAT、PAAT/PET、TAPSE均显著升高(P<0.05,P<0.01);血管壁厚度明显降低,肺小动脉管壁厚度占血管直径的百分比、血管壁面积占小动脉总横截面积的百分比均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺动脉中α-SMA蛋白免疫荧光的阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);血浆IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中的PPAR-γ蛋白阳性率表达显著升高(P<0.05,P<0.01),NF-κB蛋白阳性表达率显著降低(P<0.05,P<0.01);肺组织中PPAR-γ蛋白表达显著上调(P<0.05,P<0.01),p-NF-κB/NF-κB蛋白表达比值显著降低(P<0.01);肺心汤高剂量组大鼠肺组织中IκB-α蛋白表达显著上调(P<0.01)。结论肺心汤能改善野百合碱诱导的PAH大鼠肺动脉压力升高、右心功能障碍和肺血管重塑,其机制可能与调控PPAR-γ/NF-κB信号通路抑制炎症反应有关。

基于灰色关联度分析和偏最小二乘回归辨识款冬花止咳活性成分

目的:款冬花具有止咳化痰的作用,以止咳为主。研究显示款冬花的某些成分可能与止咳作用相关,另有某些成分被证实具有止咳活性,但款冬花止咳药效的物质基础尚未阐明。本研究通过对款冬花提取物的高效液相色谱指纹图谱与止咳作用进行谱效相关分析,旨在阐明款冬花的止咳活性成分群。方法:采用高效液相色谱法建立10批款冬花提取物的指纹图谱并获得其化学成分数据;选用豚鼠作为实验动物,采用枸橼酸引咳法获得10批款冬花提取物的止咳药效数据。将SPF级健康雄性Hartley豚鼠随机分为S1~S10组、阳性对照组和空白对照组(共12组),每组10只,S1~S10组分别给予款冬花提取物S1~S10(4 g/kg),阳性对照组给予枸橼酸喷托维林(10 mg/kg),空白对照组给予纯化水,各组连续给药5 d,将豚鼠置于5 L容积的密闭广口瓶内,用超声雾化器以最大喷雾力度喷入17.5%的枸橼酸并持续0.5 min,记录每只豚鼠的咳嗽潜伏期和5 min内咳嗽次数。采用灰色关联度分析和偏最小二乘回归对款冬花提取物的化学成分数据和止咳药效数据进行谱效相关分析,预测款冬花的止咳活性成分群。对预测的款冬花止咳活性成分群进行等效性验证:将SPF级健康雄性Hartley豚鼠随机分为S9组、活性成分群组、阳性对照组和空白对照组(共4组),每组10只,S9组给予款冬花提取物S9(4 g/kg),活性成分群组给予预测的止咳活性成分组合物(剂量相当于4 g/kg的款冬花提取物S9),阳性对照组给予枸橼酸喷托维林(10 mg/kg),空白对照组给予纯化水,各组连续给药5 d,动物造模和药效指标观察同前。结果:共建立10批款冬花提取物的高效液相色谱指纹图谱并获得14个主要共有峰的峰面积数据;获得10批款冬花提取物的止咳药效数据。与空白对照组比较,阳性对照组及S1、S2、S3、S4、S6、S7、S8、S9、S10组的咳嗽潜伏期加长(均P<0.01),阳性对照组及S1、S2、S4、S6、S8、S9、S10组的5 min内咳嗽次数减少(均P<0.05)。谱效相关分析显示:异绿原酸C、异绿原酸A、绿原酸、异绿原酸B、异槲皮苷、芦丁6种成分对款冬花止咳作用的贡献度较高,初步判断为款冬花的止咳活性成分群。等效性验证显示:S9组、活性成分群组的2个药效指标的差异均无统计学意义(均P>0.05),证实异绿原酸C、异绿原酸A、绿原酸、异绿原酸B、异槲皮苷、芦丁为款冬花的止咳活性成分群。结论:谱效相关分析结合等效性验证可用于款冬花止咳药效物质基础研究。款冬花发挥止咳作用是多成分共同作用的结果。

左归降糖解郁方调控经典Wnt信号改善糖尿病并发抑郁症海马神经干细胞增殖与分化研究

目的研究左归降糖解郁方调控模拟糖尿病并发抑郁症脑环境下的体外海马神经干细胞增殖与分化作用及分子机制。方法纯化和培养SD大鼠海马神经干细胞并通过标记巢蛋白(Nestin)进行荧光鉴定。取第3代海马神经干细胞进行实验,分为正常组、模型组、空白血清组、左归降糖解郁方含药血清组、左归降糖解郁方含药血清+海马无翅基因3a(recombinant wingless type MMTV integration site family member 3a,Wnt3a)信号抑制剂XAV-939组。在干细胞培养液中添加葡萄糖和皮质酮模拟糖尿病并发抑郁症脑环境进行造模,空白血清组和左归降糖解郁方含药血清组于造模同期分别给予不同血清。干预18 h后,采用WST-1检测干细胞活力,采用Brdu免疫荧光结合高内涵细胞成像技术评价干细胞的增殖能力,分别采用双皮质素(doublecortin,DCX)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、神经元核抗原(neuron specific nuclear protein,NeuN)免疫荧光评估干细胞的分化能力,采用Western blotting检测各组细胞Wnt3a、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(low density lipoprotein receptor-related protein 5,LRP5)、LRP6、β-连环蛋白(β-catenin)表达,采用qRTPCR法检测神经原素2(neurogenin 2,Ngn2)、细胞周期蛋白(cyclinD1)基因表达。结果左归降糖解郁方能显著增加受损海马神经干细胞的活力(P<0.01),增加Brdu、DCX、GFAP、NeuN的表达(P<0.01),增强其增殖和分化的能力。机制研究发现,左归降糖解郁方能显著增加神经干细胞中的Wnt3a、LRP5、LRP6、总β-catenin、核β-catenin蛋白的表达(P<0.05、0.01),激活Wnt3a信号并增加β-catenin的蓄积和入核,从而促进下游Ngn2、cyclinD1靶基因的转录(P<0.05、0.01)。XAV-939可通过增加β-catenin的降解(P<0.01),减少其进入细胞核,减少下游Ngn2、cyclinD1的m RNA转录(P<0.05、0.01),从而降低干细胞的增殖与分化能力。结论左归降糖解郁方能明显改善葡萄糖与皮质酮对体外海马神经干细胞增殖与分化的抑制作用,其改善作用与激活Wnt3a/β-catenin信号有关。

百事乐加味方对卒中后抑郁大鼠小胶质细胞焦亡的影响

目的探讨百事乐加味方对卒中后抑郁(PSD)大鼠海马区小胶质细胞焦亡的影响。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组(PSD模型)、阳性对照组(灌胃给药0.54×10^(2)g·kg^(-1)氟西汀+0.027 g·kg^(-1)阿司匹林)、实验组(灌胃给药23.5 g·kg^(-1)百事乐加味方)。用旷场实验、Morris水迷宫实验进行抑郁样行为学检测;用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测血清中白细胞介素-1β(IL-1β)水平;用免疫荧光双标法检测海马区小胶质细胞标志物离子钙接头蛋白1(Iba-1)与Nod样受体蛋白3(NLRP3)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)蛋白共表达情况;用蛋白质印迹法检测海马组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况。结果假手术组、模型组、阳性对照组和实验组爬格次数分别为(57.60±10.55)、(33.00±10.37)、(53.00±13.05)和(53.00±19.46)次;目标象限停留时间分别为(50.15±4.75)、(38.70±3.32)、(49.31±2.78)和(47.00±7.71)s;血清中IL-1β含量分别为(117.86±8.45)、(145.35±14.36)、(122.08±10.30)和(123.65±9.53)pg·mL^(-1);NLRP3/Iba-1蛋白表达分别为20.93±0.53、65.27±0.61、33.37±0.44和43.43±0.40;Caspase-1/Iba-1蛋白表达水平分别为17.51±0.19、60.38±1.05、26.64±0.35和29.62±0.95;海马组织中NLRP3蛋白相对表达水平分别为0.38±0.04、0.95±0.08、0.49±0.03和0.55±0.06;Caspase-1蛋白相对表达水平分别为0.35±0.01、0.88±0.04、0.52±0.01和0.68±0.04。模型组上述指标与假手术组比较,实验组上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05)。结论百事乐加味方可以抑制PSD大鼠海马区小胶质细胞焦亡,减轻炎症反应,其机制可能与调控NLRP3/Caspase-1信号通路有关。

左归降糖解郁方调控Wnt3a/β-catenin信号通路改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经发生的机制

目的:研究左归降糖解郁方通过调控Wnt3a/β-catenin信号通路改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马神经发生的作用机制。方法:选取SPF级雄性SD大鼠40只建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型,随机分为模型组、二甲双胍+氟西汀组(阳性药组)、左归降糖解郁方组(中药组)、左归降糖解郁方+DKK-1组(中药+DKK-1组),每组10只,另设10只大鼠为正常组。给药4周后,检测各组大鼠的血糖。采用强迫游泳实验和水迷宫实验检测各组大鼠的抑郁样行为和认知功能。采用免疫荧光法检测各组大鼠海马齿状回Nestin、DCX和NeuN的表达。采用Western blot法检测海马神经发生相关蛋白以及Wnt3a/β-catenin信号通路蛋白的表达。结果:与模型组比较,中药组血糖显著降低(P<0.01),抑郁样行为和认知能力显著改善(P<0.01,P<0.05),显著增加海马齿状回Nestin、DCX和NeuN的表达(P<0.05,P<0.01),增加Ngn2、NeuroD1、Wnt3a、Dvl-1的蛋白表达以及β-catenin的核表达(P<0.01),降低APC蛋白表达(P<0.05);与中药组比较,中药+DKK-1组大鼠海马Nestin、DCX、NeuN、Ngn2、NeuroD1、Wnt3a、Dvl-1及β-catenin表达显著减少(P<0.05,P<0.01)。结论:左归降糖解郁方可通过调节海马Wnt3a/β-catenin信号通路改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马齿状回的神经发生过程。

天麻芎苓止眩片对自发性高血压大鼠ACE2/Ang(1-7)/Mas轴的影响

目的 探讨天麻芎苓止眩片(TXZT)对自发性高血压大鼠(SHR)血管紧张素转换酶(ACE)2/血管紧张素(Ang,1-7)/Mas轴的调控作用,探讨其防治高血压病的作用机制。方法 50只SHR大鼠随机分为模型组、厄贝沙坦组、TXZT高、中、低剂量组,另取10只WKY大鼠作为正常组,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦27 mg/kg灌胃;TXZT高、中、低剂量组分别给予TXZT 2.0、1.0、0.5g/kg灌胃;模型组和正常组分别给予等量蒸馏水灌胃。各组均连续给药4周。测量干预前后大鼠收缩压;ELISA法检测血清中肾素(REN)、醛固酮(ALD)、AngⅡ、ACE2、Ang (1-7)的含量变化;免疫组化法检测主动脉AngⅡ、ACE2蛋白表达;Western Blot法检测主动脉ACE2、Mas蛋白表达;RT-PCR法检测主动脉ACE2、Mas mRNA表达。结果 与正常组比较,模型组各时间收缩压升高,血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达升高,血清ACE2、Ang(1-7)水平、主动脉ACE2、Mas蛋白及mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,干预后各组各时间收缩压降低,主动脉ACE2 mRNA表达增加(P<0.05);厄贝沙坦组大鼠血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低,血清ACE2、Ang(1-7)水平升高(P<0.05,P<0.01);TXZT高剂量组大鼠血清REN、ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低,血清ACE2、Ang(1-7)水平、主动脉ACE2蛋白、MasmRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);TXZT中剂量组血清ALD、AngⅡ水平、主动脉AngⅡ表达降低,血清ACE2、Ang(1-7)水平、主动脉ACE2、Mas蛋白、Mas mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01);TXZT低剂量组大鼠血清AngⅡ水平降低(P<0.05)。与厄贝沙坦组比较,TXZT高剂量组给药后第2、4周、TXZT中剂量组给药后各时间、TXZT低剂量组给药后第2、3、4周收缩压升高(P<0.05,P<0.01)。结论 TXZT有明显、持续、稳定的降压作用,调节ACE2/Ang(1-7)/Mas受体轴抑制肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)系统活性可能是其降压效应的重要机制之一。

益生菌调节肠道菌群对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖及抑郁样行为的影响

目的探讨益生菌调节肠道菌群对糖尿病并发抑郁症大鼠血糖及抑郁样行为的影响。方法将24只大鼠分为正常对照组、糖尿病并发抑郁症(DD)组和益生菌组,每组8只。通过高脂饮食结合腹腔注射链脲佐菌素(每只60 mg/kg)诱导,给予慢性不可预计温和应激(CUMS)刺激28 d建立DD大鼠模型,同时给予益生菌(双歧杆菌联合乳酸菌)重建其肠道菌群。每周称量大鼠体重的同时进行空腹血糖(FPG)检测,采用强迫游泳实验和矿场实验检测各组大鼠抑郁样行为,采用酶联免疫吸附测定法检测促炎性细胞因子[白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)相关蛋白[促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质醇]及脂多糖(LPS)在血清中的含量;采用16s rRNA对各组大鼠肠道内容物微生物菌群进行测序分析。两组之间比较采用独立样本t检验,多组之间比较采用单因素或双因素方差分析。结果与对照组比较,DD组大鼠FPG升高并表现出明显抑郁样行为(静止时间增加、水平活动降低)和HPA亢进[功能相关的蛋白(CRH、ACTH和皮质醇)均升高],且血清中LPS及促炎性细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)含量均升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与DD组相比,益生菌组大鼠FPG降低,LPS及促炎性细胞因子含量明显降低,同时抑郁样行为和HPA亢进明显缓解,差异均有统计学意义(P<0.05)。16s rRNA肠道菌群测序提示,各组大鼠肠道菌群α多样性无明显差异,β多样性存在差异;厚壁菌门和拟杆菌门为大鼠肠道菌群的主要菌种,其次为变形菌门和放线菌门;与对照组比较,DD组6个科[瘤胃球菌科_UCG-005(Ruminococcaceae_UCG-005)、瘤胃球菌科_UCG-013(Ruminococcaceae_UCG-013)、瘤胃梭菌科(Ruminiclostridium)、颤杆菌克科(Oscillibacter)、脱硫弧菌科(Desulfovibrionaceae)和普雷沃菌科(Prevotellaceae)]的丰度均降低(P<0.01)。Bugbase表型预测显示,与对照组比较,DD组的好氧菌和革兰阴性菌丰度升高,而厌氧菌丰度下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论益生菌干预改善肠道菌群,可缓解DD大鼠的抑郁症状并降低促炎性细胞因子的表达。