青蒿琥酯抗耐多药结核分枝杆菌的作用活性及机制研究

目的探讨青蒿琥酯(ASN)单独或联合抗结核药物利福平(RFP)和异烟肼(INH)对耐多药结核分枝杆菌(MDR-TB)的抗菌活性及其作用机制。方法选择2021年1月-2022年5月经长沙市中心医院确认保存的MDRTB 20例,进行体外药敏试验。根据不同药物处理将其分为无药对照组、青蒿琥酯组、利福平组、异烟肼组、青蒿琥酯联合利福平组、青蒿琥酯联合异烟肼组,检测其最小抑菌浓度(MIC)。采用基因芯片法检测青蒿琥酯对MDRTB耐药基因突变位点分析,实时荧光定量PCR检测青蒿琥酯改善抗结核药物对MDR-TB影响与外排泵关系,扫描电镜和透射电镜观察青蒿琥酯处理前后细菌细胞的改变情况。结果20株耐药菌株经鉴定均为MDR-TB,耐药基因分别为rpoB531C-T突变、rpoB526C-T突变和rpoB516A-T突变,katG315G-A突变和katG315G-C突变;其中,10株为rpoB531C-T突变、katG315G-A突变;6株为rpoB531C-T突变、katG315G-C突变;4株为rpoB516A-T突变、katG315G-A突变。随机挑选3、8号菌株,MDR-TB耐药位点均为rpoB531C-T突变和KatG315G-C突变,经青蒿琥酯处理24 h前后,rpoB531C-T位点突变和KatG315G-C位点突变均未发生改变。青蒿琥酯单独作用MDR-TB时,MIC较高;青蒿琥酯与利福平、异烟肼联合作用时,MIC值明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.001)。20株MDR-TB菌株中,仅在青蒿琥酯组中有2株能够显著抑制外排泵基因efpA、RV1250 mRNA表达,差异均有统计学意义(t=6.635、16.520,P均<0.05);其余菌株对efpA、RV1250 mRNA表达差异均无统计学意义(P均>0.05)。扫描电镜结果显示,与对照组比较,加入青蒿琥酯后,菌体干枯皱缩;透射电镜结果显示,青蒿琥酯处理后,出现脂质脱落,菌体死亡。结论青蒿琥酯单独作用对MDR-TB未显示出抗结核活性,但联合抗结核药时,可改善抗结核药物对MDR-TB的药物敏感性;药物外排泵efpA、RV1250基因可能不是青蒿琥酯发挥主要机制;青蒿琥酯可破坏结核分枝杆菌细胞结构的完整性,其机制可能与青蒿琥酯增加抗结核菌药物在结核分枝杆菌体内的聚集相关。

不同抗结核治疗效果对患者肠道菌群及免疫状态的影响

目的研究不同治疗效果的结核患者肠道菌群、免疫功能,进一步探索不同治疗效果的结核患者之间是否存在差异菌群、免疫指标。方法收集2020年1月-2021年2月长沙中心医院107例初治后的结核患者,通过查阅住院病历记录和采用面对面问卷访谈、登记的结果分为疗效不良组(n=32)和疗效良好组(n=75)。采集患者粪便和血液样本,通过高通量测序、生物信息学技术以及流式细胞术、ELISA、结核药敏等相关技术,比较不同疗效组间样本肠道菌群多样性、免疫功能的差异。结果与疗效不良组比较,疗效良好组γ-干扰素(IFN⁃γ)、CD4^(+)%水平升高,肿瘤坏死因子(TNF⁃α)水平降低,差异均有统计学意义(t=2.222、2.377、2.104,P均<0.05),而两组白细胞介素4(IL⁃4)、IL⁃10、CD3+%、CD4^(+)/CD8^(+)差异均无统计学意义(P均>0.05)。从目、科、属层面分析,未分类的丹毒丝菌在两组间差异均有统计学意义(U=983、983、982,P均<0.05),其余细菌差异均无统计学意义(P均>0.05);从细菌代谢及表型预测结果来看,两组在非同源末端连接、咖啡因代谢、吲哚生物碱合成及类固醇合成等细菌代谢功能方面差异均有统计学意义(Z=0.999、0.999、0.999、0.999,P均<0.05);在需氧菌化能异养、宿主共生、芳香化合物降解、碳氢化合物降解和硝酸盐还原等功能方面差异均有统计学意义(Z=0.179、0.179、0.179、0.179、0.179,P均<0.05);在感染耐药细菌方面,两组在感染耐多药结核分枝杆菌差异有统计学意义(χ^(2)=8.698,P<0.05)。结论疗效不良的结核患者免疫功能较疗效良好的患者损伤严重;未分类的丹毒丝菌属可能是影响肺结核患者疗效不良的重要因素之一;肠道菌群的代谢功能低下、肠道菌群紊乱以及感染耐多药结核杆菌均对最终疗效有影响。