女贞叶化学成分复杂,糖苷类物质是其发挥药理活性的关键成分,糖苷的形成离不开糖基转移酶。利用cDNA末端快速扩增技术,对女贞叶中一条糖基转移酶编码基因LlUGT3进行了克隆;根据基因和蛋白质序列进行了生物信息学分析;通过基因工程技术使...女贞叶化学成分复杂,糖苷类物质是其发挥药理活性的关键成分,糖苷的形成离不开糖基转移酶。利用cDNA末端快速扩增技术,对女贞叶中一条糖基转移酶编码基因LlUGT3进行了克隆;根据基因和蛋白质序列进行了生物信息学分析;通过基因工程技术使LlUGT3基因在大肠杆菌体内进行了异源表达。结果表明,LlUGT3基因cDNA全长1684 bp,由85 bp 5′-UTR、159 bp 3′-UTR、1440 bp ORF组成,其中ORF编码一条含479个氨基酸残基的酶蛋白,其相对分子质量、理论等电点和亲水性平均系数分别为54.8 kDa、5.86和-0.381;在LlUGT3酶蛋白一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒,但不含信号肽且无跨膜片段,在二级结构中含有α螺旋(42.59%)、β折叠(12.73%)和无规卷曲(44.68%),在三级结构中由肽链折叠形成α/β/α类Rossmann折叠区域,并且两者之间夹着一个底物结合腔;同源建模结果显示,LlUGT3酶蛋白与模板分子PaGT3序列相似度很高,而且系统发育树分析也表明两者亲缘关系最近;分子对接分析表明,LlUGT3酶蛋白的His17-Asp116对发挥催化功能,PSPG盒主要涉及结合UDPG,而LIUGT酶与辣椒素的结合方式与PaGT3相似;通过基因工程技术,实现了LlUGT3基因在大肠杆菌体内的异源表达。该研究为进一步深入研究LlUGT3酶蛋白的结构与功能奠定了基础。展开更多
根据前期小叶女贞转录组研究的结果，利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDN Aends，RACE）从叶片中克隆到1条编码糖基转移酶的基因（xynzUGT）。该基因cDNA全长1598bp，由66bp5’-UTR，1440bpORF，92bp3，-UTR组成，其...根据前期小叶女贞转录组研究的结果，利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDN Aends，RACE）从叶片中克隆到1条编码糖基转移酶的基因（xynzUGT）。该基因cDNA全长1598bp，由66bp5’-UTR，1440bpORF，92bp3，-UTR组成，其中ORF编码1条含480个氨基酸残基的酶蛋白（xynzUGT），其相对分子质量和等电点分别为54826．67Da和5．82。利用生物信息学方法分析酶蛋白的结构，结果表明在一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒，在二级结构中含有理螺旋（38％）、届折叠片（12．1％）和无规蜷曲（49．9％），在三级结构中由肽链折叠形成2个正对的a／／3／a类Rossmann折叠区域，并且两者之间夹着一个底物结合口袋。通过系统进化树分析发现，xynzUGT有可能催化酪醇等苯丙素类物质发生糖基化，进一步开展酶蛋白与酪醇的分子对接模拟实验，结果显示位于结合口袋的G1y138和Ser285通过氢键与酪醇发生相互作用。SDS-PAGE电泳分析表明，原核表达系统成功表达出相对分子质量为58370．57Da的xynzUGT重组蛋白，但它以非可溶性的包涵体形式存在。利用分子伴侣和酶蛋白共表达的方法，在一定程度上可促进酶蛋白的可溶性表达。以上研究结果为进一步开展体外酶促反应研究，并阐明酶的功能机制奠定了基础。展开更多
文摘女贞叶化学成分复杂,糖苷类物质是其发挥药理活性的关键成分,糖苷的形成离不开糖基转移酶。利用cDNA末端快速扩增技术,对女贞叶中一条糖基转移酶编码基因LlUGT3进行了克隆;根据基因和蛋白质序列进行了生物信息学分析;通过基因工程技术使LlUGT3基因在大肠杆菌体内进行了异源表达。结果表明,LlUGT3基因cDNA全长1684 bp,由85 bp 5′-UTR、159 bp 3′-UTR、1440 bp ORF组成,其中ORF编码一条含479个氨基酸残基的酶蛋白,其相对分子质量、理论等电点和亲水性平均系数分别为54.8 kDa、5.86和-0.381;在LlUGT3酶蛋白一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒,但不含信号肽且无跨膜片段,在二级结构中含有α螺旋(42.59%)、β折叠(12.73%)和无规卷曲(44.68%),在三级结构中由肽链折叠形成α/β/α类Rossmann折叠区域,并且两者之间夹着一个底物结合腔;同源建模结果显示,LlUGT3酶蛋白与模板分子PaGT3序列相似度很高,而且系统发育树分析也表明两者亲缘关系最近;分子对接分析表明,LlUGT3酶蛋白的His17-Asp116对发挥催化功能,PSPG盒主要涉及结合UDPG,而LIUGT酶与辣椒素的结合方式与PaGT3相似;通过基因工程技术,实现了LlUGT3基因在大肠杆菌体内的异源表达。该研究为进一步深入研究LlUGT3酶蛋白的结构与功能奠定了基础。
文摘通过cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDNA ends,RACE）从益母草（Leonurus heterophyllus Sweet）叶片中克隆获得了一个编码糖基转移酶的基因（LhsUGT）。该基因cDNA全长为1562 bp,开放阅读框（open reading frame,ORF）为1368 bp,编码455个氨基酸残基,其分子量和等电点分别为50.47 k D和5.52。生物信息学分析结果显示：LhsUGT编码的酶蛋白含有3种二级结构,其中α螺旋占43.1%,β折叠片占17.5%,无规卷曲占39.4%,其C端还发现了一段高度保守的PSPG结构域,说明LhsUGT编码的酶蛋白属于植物糖基转移酶超家族;对LhsUGT的氨基酸序列进行BLAST同源比对,发现益母草与其它植物的糖基转移酶序列相似性为26.4%-68.0%;系统进化树分析表明,LhsUGT蛋白属于拟南芥糖基转移酶超家族的L组,故推测它可能具有催化简单酚类发生糖基化的功能;SDS-PAGE电泳显示,原核表达系统成功表达出分子量约为69 k D的LhsUGT重组蛋白,其N端含有一段17.9 k D的His标签,且在IPTG诱导5 h后达到最高表达量。本研究结果为进一步开展体外酶促反应、阐明益母草糖基转移酶的生物学功能奠定了基础。
文摘根据前期小叶女贞转录组研究的结果，利用cDNA末端快速扩增技术（rapid amplification of cDN Aends，RACE）从叶片中克隆到1条编码糖基转移酶的基因（xynzUGT）。该基因cDNA全长1598bp，由66bp5’-UTR，1440bpORF，92bp3，-UTR组成，其中ORF编码1条含480个氨基酸残基的酶蛋白（xynzUGT），其相对分子质量和等电点分别为54826．67Da和5．82。利用生物信息学方法分析酶蛋白的结构，结果表明在一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒，在二级结构中含有理螺旋（38％）、届折叠片（12．1％）和无规蜷曲（49．9％），在三级结构中由肽链折叠形成2个正对的a／／3／a类Rossmann折叠区域，并且两者之间夹着一个底物结合口袋。通过系统进化树分析发现，xynzUGT有可能催化酪醇等苯丙素类物质发生糖基化，进一步开展酶蛋白与酪醇的分子对接模拟实验，结果显示位于结合口袋的G1y138和Ser285通过氢键与酪醇发生相互作用。SDS-PAGE电泳分析表明，原核表达系统成功表达出相对分子质量为58370．57Da的xynzUGT重组蛋白，但它以非可溶性的包涵体形式存在。利用分子伴侣和酶蛋白共表达的方法，在一定程度上可促进酶蛋白的可溶性表达。以上研究结果为进一步开展体外酶促反应研究，并阐明酶的功能机制奠定了基础。
