水蛭提取液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放凝血因子的影响

目的 观察水蛭提取液对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）释放血管性血友病因子（vWF）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）、组织型纤溶酶原激活物（t-PA）的影响,探讨水蛭抗凝的作用机制.方法 体外培养 HUVECs,将生长良好的2～3代细胞分为对照组、凝血酶刺激组及水蛭提取液高、中、低剂量组5组.将生药浓度600、300、150 mg/L的水蛭提取液加入到10 kU/L凝血酶刺激的HUVECs培养12 h,对照组加等量RPMI 1640培养液.用酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞培养上清液中vWF、PAI-1、t-PA的含量.结果 与对照组比较,凝血酶刺激组细胞培养上清液中vWF、PAI-1（μg/L）含量显著升高[vWF：（11.01±0.54）%比（7.05±0.49）%;PAI-1：72.26±0.85比55.89±1.26,均P〈0.01],t-PA（μg/L）含量显著降低（15.15±1.41比34.29±1.22,P〈0.01）.与凝血酶刺激组比较,水蛭提取液高、中、低剂量组vWF、PAI-1含量[vWF：（9.48±0.64）%、 （8.57±0.50）%、 （7.97±0.44）%;PAI-1：58.30±0.90、 62.69±1.01、 67.47±1.28]显著降低,t-PA含量（32.59±1.46、 26.40±0.82、 21.06±1.13）显著升高（均P〈0.01）.说明水蛭提取液能显著减弱凝血酶诱导HUVECs释放vWF、PAI-1,增强凝血酶促进HUVECs表达t-PA.结论 水蛭具有明显的抗凝作用,其作用机制可能为参与调节内皮细胞释放vWF,调节纤溶平衡及保护受损的血管内皮细胞.

中医“肝脾相关”理论阐微

肝脾各自的生理功能和病理特点,决定了两者密切密不可分的联系,主要表现为生理功能的相互为用,病理状态的相互传变,临床诊疗过程中的肝脾同治。认识肝脾相关对临床具有重大的指导意义。

全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞释放血管性血友病因子和6-酮-前列腺素F1α的影响

目的 观察全蝎纯化液对凝血酶诱导血管内皮细胞（VEC）释放血管性血友病因子（vWF）和6-酮-前列腺素F1α（6-keto-PGF1α）的影响,探讨全蝎抗凝作用的机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,选择生长良好的细胞分为空白对照组、凝血酶组及全蝎纯化液高、中、低剂量组,每组10个复孔.全蝎纯化液高、中、低剂量组加入凝血酶10 kU/L后,分别加入全蝎纯化液24、12、6 mg/L;凝血酶组加入凝血酶10 kU/L;空白对照组加入等量RPMI1640培养液.各组均培养12 h后收集上清液,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中vWF、6-keto-PGF1α的含量.结果 与空白对照组比较,凝血酶组细胞培养上清液中vWF含量显著升高[（17.01±0.54）%比（6.05±0.49）%]、6-keto-PGF1α含量显著降低[（20.40±1.18） ng/L比（35.20±1.37） ng/L,均P＜0.01];与凝血酶组比较,全蝎纯化液高、中、低剂量组vWF均显著降低[（7.18±0.44）%、（8.91±0.47）%、（9.81±0.48）%],6-keto-PGF1α含量均显著升高[（30.10±1.50）、（25.50±1.43）、（23.30±1.47） ng/L],差异有统计学意义（均P＜0.01）.结论 全蝎纯化液能抑制凝血酶诱导HUVEC释放vWF,并对抗凝血酶抑制HUVEC释放6-keto-PGF1α,提示全蝎纯化液对凝血酶诱导的VEC损伤具有保护作用.

心宁片对心肌梗死后大鼠心肌血管内皮生长因子及其受体表达的影响

目的观察心宁片对心肌梗死（心梗）后大鼠心肌血管内皮生长因子（VEGF）及其受体胎肝激酶1（FLK-1）表达的影响，探讨心宁片对心梗后大鼠缺血心肌的保护作用及其相关机制。方法采用结扎大鼠左冠状动脉前降支制备心肌缺血模型。将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、麝香保心丸组（30mg·kg^-1·d^-1）以及心宁片大、中、小剂量组（分别为1．08、0．54和0．27g·kg^-1·d^-1），各组均于制模后2d给药，连用30d。于术前、术后5min、给药30d后动态监测Ⅱ导联心电图，采用免疫组化法测定缺血心肌组织VEGF、FLK-1的表达。结果与假手术组比较，模型组心电图ST段明显抬高，心肌缺血区VEGF及其受体FLK-1的含量显著增加（P〈0．05或P〈0．01）。与模型组比较，心宁片大、中剂量组ST段显著压低[（0．319±0．064）mV、（0．328±0．046）mV比（0．384±0．078）mV，P〈0．01和P〈0．053；心肌缺血区VEGF、FLK-1表达显著升高（VEGFA值：0．190±0．029、0．169±0．027比0．156±0．019；FLK-14值：0．133±0．004、0．101±0．004比0．095±0．003，P〈0．05或P〈0．01]，而心宁片小剂量组虽有压低和升高趋势，但差异无统计学意义。阳性对照药麝香保心丸组与心宁片大、中剂量组的作用差异无统计学意义。结论心宁片可提高心梗后动物缺血心肌组织中的VEGF与FLK-1含量，其中以大剂量组作用最强。

全蝎纯化液对静脉血栓形成大鼠纤溶和凝血系统的影响

目的通过观察全蝎纯化液对静脉血栓形成大鼠凝血和纤溶系统的影响,探讨全蝎抗静脉血栓形成的作用机制。方法 SD大鼠随机分为空白组、模型组和全蝎纯化液大、中、小剂量组,全蝎纯化液各剂量组由颈外静脉分别注入全蝎纯化液,空白组和模型组注入等体积的生理盐水。采用结扎大鼠腹腔主静脉造成静脉血栓模型,观察其对激活部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、组织型纤溶酶原激活物(tPA)、纤溶酶原激活物抑制物-1(PAI-1)等凝血和纤溶指标的影响。结果全蝎纯化液大、中、小剂量能明显减轻血栓重量,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01),血栓形成的抑制率分别为75.23%、61.50%、51.05%;能明显延长APTT、PT、TT时间,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01);模型组tPA明显降低、PAI-1明显升高,而全蝎纯化液各剂量组能明显抑制PAI-1活性升高、增加tPA活性,与模型组相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论全蝎纯化液具有明显的抑制血栓形成的作用,其作用机制可能与其抗凝血及促纤溶作用有关。

健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后层黏连蛋白降解的影响

目的探讨健脾补土法对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞周围层黏连蛋白(LN)的降解机制及其脑保护作用。方法 38只大鼠随机分为:假手术组8只,模型组10只,健脾补土传统汤剂组10只,健脾补土超微剂型组10只,大脑中动脉栓塞再通法建立脑缺血再灌注模型。进行神经功能症状评分,脑组织病理形态学观察,采用TUNEL法检测凋亡神经元,免疫组织化学法检测LN和基质金属蛋白酶9(MMP-9)阳性表达。结果与假手术组比较,模型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显升高,LN表达明显降低(P<0.01)。与模型组比较,健脾补土传统汤剂组和健脾补土超微剂型组神经功能症状评分、细胞凋亡指数、MMP-9阳性细胞表达数明显降低,LN表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 LN降解在脑缺血再灌注损伤中起重要作用,健脾补土法可能通过抑制MMP-9和减少LN降解减轻缺血再灌注所致神经元损伤。

细胞焦亡参与脑缺血再灌注损伤的初步研究

目的:探讨细胞焦亡在脑缺血再灌注后不同时点海马和皮质区的变化,从NLRP3炎症小体介导的经典焦亡途径探讨其机制,分析细胞焦亡在脑内不同部位损伤中的作用。方法:SD大鼠随机分成假手术组(sham组)与模型组(MCAO/R组),模型组又分为脑缺血再灌注6 h组(MCAO/R 6 h组)、12 h组(MCAO/R 12 h组)和24 h组(MCAO/R 24 h组)。右侧改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血-再灌注模型。采用神经功能评分、2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法和形态学观察评价神经细胞损伤程度;TUNEL和caspase-1免疫荧光双染检测细胞焦亡;Western blot法检测NLRP3、cleaved caspase-1、pro-caspase-1和白细胞介素1β(IL-1β)蛋白的表达。结果:脑缺血再灌注后不同时间均出现神经功能损伤,TTC染色显示随着再灌注时间的延长,脑梗死体积逐渐增大(P<0.05)。海马CA1区及皮质区出现组织结构疏松,间质水肿,神经细胞排列紊乱,胞核染色加深,细胞核碎裂,细胞数量减少等细胞死亡的典型形态学特征。免疫荧光双染检测表明,脑缺血再灌注后不同时点均出现细胞焦亡现象,海马CA1区和皮质区在再灌注12 h和24 h时最明显(P<0.05)。Western blot检测结果表明,NLRP3介导细胞经典焦亡通路中的NLRP3、cleaved caspase-1和pro-caspase-1、IL-1β蛋白表达在脑缺血再灌注后均不同程度上调,NLRP3蛋白在海马区再灌注12 h和24 h表达明显增高(P<0.05),皮质区再灌注6 h表达明显增高(P<0.05);pro-caspase-1蛋白在海马区再灌注各个时点表达均明显增高(P<0.05),皮质区再灌注24 h表达明显增高(P<0.05);cleaved caspase-1蛋白在海马区再灌注12 h表达明显增高(P<0.05),皮质区再灌注24 h表达明显增高(P<0.05);IL-1β蛋白表达在海马区再灌注24 h明显增高(P<0.05),皮质区再灌注6 h表达增高(P<0.05)。结论:细胞焦亡参与了脑缺血再灌注后神经细胞损伤,经典焦亡途径在海马和皮质区均发挥重要调控作用,以海马区尤为明显,提示海马区是脑缺血再灌注后细胞焦亡和炎症反应诱发的继发性神经损伤的主要部位。

不同提取方法对水蛭、土鳖虫、蜈蚣抗凝活性的影响

目的观察不同提取方法以及酸、碱、反复冻融对水蛭等3种中药抗凝活性的影响。方法以TT为指标,考察不同提取方法,以及酸、碱和反复冻融法对水蛭、土鳖虫、蜈蚣提取液中抗凝物质的影响。结果冷浸法抗凝活性明显优于煎煮法和冻融法,其抗凝活性不受pH影响,经酸碱处理后TT无明显变化(P>0.05),土鳖虫、蜈蚣提取液的凝血酶时间与冻融次数无关(P>0.05),水蛭凝血酶时间易受冻融次数影响(P<0.05)。结论3种提取方法以冷浸法提取最优,酸碱和反复冻融影响其药抗凝活性。

僵蚕抗凝活性成分的稳定性和提取工艺研究

目的研究僵蚕提取液的抗凝活性成分的稳定性和提取工艺。方法以凝血酶时间(TT)为指标,考察僵蚕提取液中抗凝物质对酸、碱、热及反复融冻的稳定性;以紫外分光光度法测其蛋白含量为指标,用L9(34)正交试验考察僵蚕的提取工艺。结果僵蚕水提液的抗凝活性成分对酸、碱、热及反复融冻均具有较高的稳定性;僵蚕水提液的凝血酶时间与蛋白质含量成正相关(P<0.01);以蛋白质含量作为指标,僵蚕用8倍量水润湿15 min,提取2次,每次30 min,即为水煎提取优化工艺。结论为僵蚕抗凝活性成分的水煎提取和后续分离的样品处理提供了实验依据。

护心康联合静脉骨髓间质干细胞移植对急性心梗后大鼠心功能的影响

目的:研究复方中药对移植骨髓间充质干细胞(MSCs)在心肌梗死组织中的迁移、分化以及心肌梗死大鼠心功能的影响。方法:培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,将各组大鼠分别用护心康和生理盐水灌胃7 d,第8天用改进的方法制作大鼠心肌梗死模型。在造模成功后第3天分别对MSCs移植组、护心康联合MSCs治疗组大鼠经尾静脉将0.5 mLMSCs悬液缓慢注射到相应大鼠体内(MSCs移植物中含1×107个干细胞),护心康组仍以护心康进行灌胃治疗。移植后,精心饲养3周后测定心功能,并行免疫组织化学检测。结果:MSCs移植组、护心康组、护心康联合MSCs治疗组移植3周后与术后1 d,心功能测定,EF对比:移植3周后,明显改善(P<0.001);FS对比:移植3周后,明显改善(P<0.001)。BrdU免疫组织化学染色显示MSCs移植组、护心康联合MSCs治疗组心脏标本切片可见有阳性染色的移植细胞存在,其余各组染色均为阴性。此外,BrdU免疫组化染色阳性细胞cTn-T染色也呈现阳性。结论:中药复方护心康能够促进经静脉移植骨髓间充质干细胞对梗死大鼠的心脏保护作用,增强其归巢的能力可能是机制之一。

药根碱靶向凝血因子Ⅻ发挥抗凝血作用的体外研究

目的以凝血因子Ⅻ(coagulation factorⅫ,FⅫ)为靶点探讨药根碱抗血栓作用的机制。方法通过Ledock软件将药根碱分子与内源性凝血途径接触激活阶段关键靶蛋白FⅫ、活化凝血因子FⅫ(actived coagulation factorⅫ,FⅫa)、凝血因子Ⅺ(coagulation factorⅪ,FⅪ)和活化凝血因子Ⅺ(actived coagulation factorⅪ,FⅪa)进行分子对接,以结合能低于-5 kcal/mol作为阈值判断药根碱与接触激活因子的结合活性;采用体外凝血实验法检测血浆活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time,APTT)、血浆凝血酶原时间(plasma prothrombin time,PT)、凝血酶时间(plasma prothrombin time,TT);乏因子血浆纠正试验检测FⅫ、FⅪ、凝血因子Ⅸ(coagulation factorⅨ,FⅨ)、凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FⅧ)、凝血因子Ⅹ(coagulation factorⅩ,FⅩ)和凝血因子Ⅶ(coagulation factorⅦ,FⅦ)的活性的抑制作用;Western blot法检测药根碱对FⅫ蛋白激活的抑制作用。结果(1)分子对接实验表明,药根碱与FⅫa、FⅪa结合能均低于-5 kcal/mol,结合活性良好。(2)体外实验中,0.2~0.8 mg/mL药根碱均可显著延长APTT(P<0.01),但不延长PT和TT(P>0.05)。(3)药根碱各剂量均显著降低FⅫ活性(P<0.01),药根碱高剂量(0.8 mg/mL)可降低FⅪ活性(P<0.05),但对FⅨ、FⅧ、FⅩ及FⅦ活性无显著影响(P>0.05)。(4)药根碱各剂量均显著抑制FⅫ蛋白的激活(P<0.01)。结论药根碱与FⅫa对接较好,显著延长APTT,抑制FⅫ蛋白激活,降低血浆FⅫ活性,提示其抗栓作用可能通过抑制FⅫ的活性而发挥。

凝血因子Ⅺ——抗血栓形成的新靶点

近年来血栓性疾病发病率上升,严重危害人类的健康。目前临床使用的抗血栓药物存在出血的毒副作用。大量研究表明,凝血因子Ⅺ(factorⅪ,FⅪ)基因剔除或缺陷无出血倾向,却可以抑制闭塞性血栓形成。近年来开展的以FⅪ为靶点的抗血栓研究已取得了一定进展。本文就FⅪ作为抗血栓药物新靶点的依据,FⅪ在血栓形成中的作用及其作为抗血栓药物靶点的研究进展做一综述,以期为研究新的抗血栓药物提供思路。

中风Ⅱ号方联合常规治疗对缺血性脑卒中气虚血瘀证患者的临床疗效

目的探讨中风Ⅱ号方联合常规治疗对缺血性脑卒中气虚血瘀证患者的临床疗效。方法100例患者随机分为对照组和观察组,每组50例,对照组给予常规治疗(阿司匹林、阿托伐他汀、苯磺酸左氨氯地平等),观察组在对照组基础上加用中风Ⅱ号方,疗程7 d。检测临床疗效、ESS评分、中医证候评分、病残/致死程度、NSE、NGF、D-D、Ang-1变化,再对NSE、D-D、Ang-1与ESS评分、中医证候评分进行相关性分析。结果观察组总有效率高于对照组(P<0.05),病残/致死程度更轻(P<0.05)。治疗后,观察组ESS评分、Ang-1升高(P<0.05),中医证候评分、NSE、D-D降低(P<0.05),较对照组更明显(P<0.05)。观察组NSE、D-D与ESS评分呈负相关(P<0.05),与中医证候评分呈正相关(P<0.05),而Ang-1恰好相反(P<0.05)。结论中风Ⅱ号方联合常规治疗对缺血性脑卒中气虚血瘀证患者临床疗效良好,可能与减轻神经元损伤、改善高凝状态、保护血管有关。

化痰通络汤对大鼠脑缺血再灌注后“肠-脑”轴损伤的保护作用

目的探讨化痰通络汤对大鼠脑缺血再灌注后“肠-脑”轴损伤的保护作用。方法60只雄性大鼠随机分为假手术组,模型组,化痰通络汤低、中、高剂量组(7.16、14.33、28.66 g/kg),阳性药物组(依达拉奉4 g/kg+丁酸梭菌5.0×108 cfu/mL),建立大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用神经功能评分和病理形态学检测评价脑组织损伤,ELISA法检测肠道及脑组织中MTL、SS、VIP、5-HT、NA、DA、TLR4、IL-1β、IL-6水平。结果与模型组比较,化痰通络汤中、高剂量组与阳性药物组大鼠神经功能缺损评分降低(P<0.01);化痰通络汤各剂量组、阳性药物组大鼠细胞损伤率降低(P<0.01),脑组织中TLR-4、IL-1β、IL-6、MTL、VIP、SS水平降低(P<0.05,P<0.01),5-HT、DA、NA水平升高(P<0.05,P<0.01),十二指肠中TLR-4、IL-1β、IL-6、VIP、SS、DA、NA水平降低(P<0.05,P<0.01),MTL、5-HT水平升高(P<0.01)。结论化痰通络汤能通过调节神经-内分泌-免疫系统,改善脑缺血再灌注后脑与肠的功能状态,实现对脑缺血再灌注损伤后的胃肠功能紊乱调节和脑保护作用。

化痰通络汤对脑缺血/再灌注损伤大鼠肠道菌群的影响

目的从肠道菌群探讨化痰通络汤抗脑缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤的作用机制。方法将30只SPF级雄性大鼠随机分为假手术组、模型组及化痰通络汤高剂量组(28.66 g/kg)、化痰通络汤中剂量组(14.33 g/kg)、化痰通络汤低剂量组(7.16 g/kg)、阳性对照组(依达拉奉4 g/kg+丁酸梭菌5.0×108 cfu/mL),每组5只。采用大鼠局灶性脑I/R模型,给药组在造模前2 h灌胃给药,缺血2 h后进行再灌注,于再灌注后24 h后取脑组织和新鲜结肠粪便,氯化三苯四氮唑(triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法测定脑梗死体积,16S rRNA测序检测结肠内容物肠道菌群变化。结果TTC染色显示,脑I/R后大鼠出现脑梗死灶,与模型组比较,化痰通络汤高、中、低剂量组均能显著减轻脑梗死体积,减少梗死率,且效应具有剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。Alpha和Beta多样性分析显示,与假手术组比较,模型组大鼠肠道菌群发生显著变化(P<0.05),与模型组比较,化痰通络汤中、高剂量组能提高大鼠肠道菌群丰富度和多样性,并能正向调节脑I/R损伤大鼠肠道菌群和优势菌种(P<0.05)。结论化痰通络汤可能通过改善肠道菌群失调、调节肠道微生物种类和数量发挥对损伤大鼠的脑保护作用。

益气活血开窍组分中药对脑缺血后白质保护的网络药理学研究及药效学验证

目的采用网络药理学方法,以髓鞘再生的主要功能细胞少突胶质前体细胞(oligodendrocyte precursor cells,OPCs)为靶点,预测益气活血开窍组分中药有效成分对脑缺血后白质损伤的促修复作用。方法从TCMSP、PubChem、SwissTargetPrediction数据库中预测组分中药主要有效成分促进脑卒中后OPCs修复脑白质的作用靶点;整合GEO、GeneCards和CTD数据库中获得的脑卒中疾病靶基因,通过STRING绘制“中药组分-疾病”靶点PPI网络图;并进行GO及KEGG富集分析。同时,采用大鼠脑缺血再灌注模型,从神经功能和形态学评价益气活血开窍组分中药对脑缺血再灌注后脑白质损伤的促修复作用。结果网络药理学共获取33个疾病-药物共同潜在靶点。PPI网络及拓扑分析结果显示VEGFA、PTGS2、NTRK1、ESR2和MET等可能为核心作用靶点,富集分析主要涉及钙离子、PI3K-Akt、VEGF、Rap1、Ras、EGFR酪氨酸激酶抑制剂抗性和MAPK信号通路,KEGG富集分析GEO数据集差异基因结果显示,卒中5 d和15 d均涉及PI3K-Akt信号通路。药理学实验结果显示,益气活血开窍组分中药可改善脑缺血再灌注后大鼠神经功能障碍,减轻脑白质损伤和大鼠胼胝体、纹状体髓鞘脱失。结论益气活血开窍组分中药可改善脑缺血再灌注后白质损伤,机制可能与各有效成分通过多靶点、多途径促进髓鞘再生和白质修复有关。

中药复方提取物HNA-1治疗猴免疫缺陷病毒感染的实验研究

目的:研究中药复方提取物HNA-1治疗猴免疫缺陷病毒(SIV)感染的作用。方法:采用SIVmac239毒株静脉感染15只中国恒河猴,待感染10周病毒载量进入平台期后,将动物随机分为高剂量组、低剂量组和模型对照组,分别灌胃给予1.8g.kg-1.d-1和0.6g.kg-1.d-1HNA-1药物以及等容量温开水;给药治疗8周,之后停药观察8周。观察、检测动物的一般情况、血浆病毒载量、CD4+和CD+8T细胞、血细胞学和活检淋巴结病理改变等。结果:模型对照组在观察期间有2例动物死亡,而治疗组动物均存活;且治疗组动物在体质量、CD4+T细胞数上均显著优于模型对照组(P<0.05);活检淋巴结病理检查显示,治疗组动物淋巴组织保存较好,部分原本淋巴组织结构已发生退变甚至耗竭的动物,经治疗后出现了恢复。结论:中药复方提取物HNA-1虽然不能直接起到抗SIV的作用,但可以提高动物体质量、减少动物死亡、提高CD4+T细胞数、改善淋巴结组织结构的病理退变,对SIV感染导致的免疫系统破坏具有一定的保护作用。

黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生、平滑肌细胞表型转化和增殖的影响

目的探讨黄芪-当归配伍对家兔血管内膜增生、平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)表型转化和增殖的影响及作用机制。方法新西兰兔随机分为对照组、模型组、黄芪(1 g/kg)组、当归(1 g/kg)组、黄芪-当归(1∶1)组、黄芪-当归(1∶5)组、黄芪-当归(5∶1)组和阿托伐他汀(5 mg/kg)组。除对照组外,其余各组按颈总动脉套管法改良制备颈总动脉血管内膜增生模型,自术后第1天起给予2%高胆固醇饲料。各给药组于术后第1天起ig相应药物,1次/d,连续28 d。采用ELISA法检测各组家兔血清中总胆固醇(total cholesterol,TC)、三酰甘油(triglycerides,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDL-C)水平;采用Masson染色法观察各组家兔颈动脉病理变化及血管内膜增生程度;采用免疫组化法检测各组家兔颈动脉α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)和增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达情况;采用Western blotting法检测各组家兔颈动脉磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(proteinkinaseB,Akt)通路相关蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组家兔血清中TC、TG、LDL-C水平显著升高(P<0.01),HDL-C水平显著降低(P<0.01);颈动脉内膜增生明显,血管内膜面积(intimalarea,IA)、内膜厚度(intimal thickness,IT)、内膜面积增生率(hyperplasia ratio of intimal area,HRIA)和内膜厚度增生率(hyperplasia ratio ofintimalthickness,HRIT)均显著增加(P<0.01);颈动脉VSMC收缩表型α-SMA表达显著降低(P<0.05),合成表型OPN和细胞增殖标志物PCNA表达增加(P<0.01);颈总动脉p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。与模型组比较,黄芪-当归(1∶1、5∶1)组家兔血清中TC、TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05、0.01),HDL-C水平显著升高(P<0.01);当归组血清中TG和LDL-C水平显著降低(P<0.05、0.01);黄芪-当归(1∶1、5∶1)组家兔颈动脉IA、IT、HRIA、HRIT均显著降低(P<0.01),颈总动脉α-SMA表达显著升高(P<0.05、0.01),OPN和PCNA表达显著降低(P<0.01);黄芪-当归(1∶5)组颈总动脉PCNA表达显著降低(P<0.01);黄芪-当归(1∶1、1∶5、5∶1)组颈总动脉p-PI3K和p-Akt蛋白表达水平显著降低(P<0.05、0.01)。结论黄芪-当归(1∶1、5∶1)能够有效改善家兔血管内膜增生、调节血脂、调控VSMC表型转化和增殖,其作用机制与抑制PI3K/Akt信号通路有关。

中西医结合治疗糖尿病性脑梗死系统评价研究

目的:参照国际循证医学中心随机对照文献质量评价标准研究中西医结合治疗糖尿病性脑梗死文献质量,并与单纯西医治疗糖尿病性脑梗死进行比较。方法:收集中西医结合治疗糖尿病性脑梗死临床研究随机对照文献,评价了文献的数量、质量、干预措施等,并运用Meta分析方法比较中西医结合与单纯西医治疗糖尿病性脑梗死的总有效率、神经功能缺损评分(NDS)、空腹血糖(FBG)和糖化血红蛋白(GHb)。结果:共收集文献1963篇,其中符合meta-分析要求的文献59篇,Jaded评分>3分的高质量文献仅1篇;研究总有效率的文献52篇、神经功能缺损评分18篇、空腹血糖14篇、糖化血红蛋白6篇、血脂11篇、血液流变学18篇;34篇文献使用了中药汤剂,中药使用频次在10次以上者依次为黄芪(28)、地龙(27)、丹参(21)、川芎(20)、生地黄(19)、当归(18)、水蛭(15)、麦冬(13)、葛根(12)、桃仁(12)、赤芍(11)、石菖蒲(10);中西医结合治疗临床总有效率为92.17%,单纯西医治疗组为74.44%,两组差异显著(Z=14.88,P<0.01);两组NDS加权均数差(WMD)为-4.60分,95%可信区间为(-5.47,-3.73)分,差异有统计学意义(Z=10.41,P<0.01);两组FBG加权均数差为-0.93mmol/L,95%可信区间为(-1.57,-0.28)mmol/L,差异有显著性(Z=2.82,P<0.01);两组GHb加权均数差为-0.60%,95%可信区间为(-1.69,0.49)%,差异无统计学意义。结论:中西医结合治疗糖尿病性脑梗死的临床研究较多,但大多没有采取随机对照和双盲试验,文献质量普遍偏低;有限证据显示中西医结合治疗糖尿病性脑梗死在临床总有效率、改善神经功能缺损评分和空腹血糖等方面明显优于单纯西医治疗组,而在改善糖化血红蛋白方面两组作用基本一致。受纳入研究的数量和质量限制,中西医结合治疗对糖尿病性脑梗死血糖的影响需要更多高质量的随机双盲对照试验加以证实。

滋阴活血解毒超微中药方对脑缺血大鼠凝血酶原和蛋白酶激活受体-1 mRNA表达的影响

目的:观察滋阴活血解毒超微中药方对大鼠局灶性脑缺血后脑组织凝血酶原mRNA和蛋白酶激活受体-1(PAR-1)mRNA表达的影响。方法:24只大鼠随机分为假手术组、模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组,每组又分1、3d两个观察时相。用线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测脑组织中凝血酶原mRNA及PAR-1 mRNA表达水平。结果:假手术组可见凝血酶原和PAR-1 mRNA微量表达;模型组、滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显增强,与假手术组比较有显著性差异(P<0.01);但与模型组比较,滋阴活血解毒超微中药方组和阿加曲班组脑组织中凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显下降(P<0.01);治疗第1天后滋阴活血解毒超微中药方组凝血酶原和PAR-1 mRNA表达明显高于阿加曲班组(P<0.05),但第3d后PAR-1 mRNA表达两组无显著性差异。结论:滋阴活血解毒超微中药方和凝血酶抑制剂阿加曲班均能下调脑缺血模型大鼠脑内凝血酶原和PAR-1 mRNA的表达,减轻凝血酶的毒性损伤可能是滋阴活血解毒超微中药方发挥脑保护作用的机制之一。