转基因动物技术的研究进展

转基因动物是其基因组内稳定整合了所导入的外源基因的动物。目前转基因实验动物体系的研究 ,主要集中在导入方法和提高整合和表达效率两个方面。本文对这两个方面的进展作一综述。

人类不成熟卵母细胞体外成熟影响的因素初探

为研究在自然月经周期中获得的人类不成熟卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体体外成熟培养条件 ,作者从手术切除的卵巢组织获取不成熟卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体 ,分别置于 90 % Ham' F-1 0 + 1 0 %灭活人血清 + FSH+ h CG(模拟卵泡液 )与 5 0 %Ham' F-1 0 + 5 0 %人类成熟卵泡液中培养 48h。结果显示 ,卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体在两种体外成熟培养基中培养 48h后 ,成熟率分别为 41 .8%和 2 1 .1 % ,两者之间存在统计学差异 (P<0 .0 5 )。作者还比较了在前一种培养基中卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体和裸卵的体外成熟率 ,分别为 41 .8%和 7.6% ,两者间存在统计学差异 (P<0 .0 0 5 )。将获取的不成熟卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体按供者年龄分成 2 5～ 3 5岁组和 3 6～46岁组 ,比较此两组卵母细胞在前一种培养基中成熟率 ,分别为 5 7.1 %和 2 5 .0 % ,两者间在统计学上有显著性差异 (P<0 .0 1 )。结果提示 :不成熟卵母细胞 -放射冠 -卵丘细胞复合体可在模拟卵泡液中培养成熟 ,优于 5 0 % Ham' F-1 0 + 5 0 %人类成熟卵泡液 ;卵丘细胞包裹对于卵母细胞体外成熟有重要作用 ;供卵者年龄可影响卵母细胞的体外成熟率。

小鼠体外培养囊胚辅助孵化的初步研究

目的 :探索体外培养和辅助孵化技术对体外发育小鼠囊胚孵出率的影响。方法 :将昆明白种小鼠的 2～ 4-细胞胚于体外培养到囊胚 ,观察比较 :(1 )体外培养囊胚与体内发育囊胚的自然孵化率 ;(2 )体外培养囊胚经辅助孵化后与未行辅助孵化 (对照组 )的体外孵化率。结果 :(1 )体外培养囊胚与体内发育囊胚的自然孵化率分别为 75.4%和 96 .2 % ;有显著差异 (P<0 .0 0 1 )。 (2 )辅助孵化与对照组的体外孵化率分别为 97.7%和 74.0 % ,有明显差异 (P<0 .0 5)。结论 :体外培养对囊胚的孵化有不利影响 ;

显微注射法制备转基因小鼠模型的研究

将外源基因ＭＴＬＭＰ，ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（Ｘ１）ＬＭＰ及ＨＬＡＤＲα分别注入昆明小鼠受精卵雄原核中，结果得到有这三种外源基因整合的三个转基因小鼠系，导入基因的整合率分别为８％，８０％及６６７％，它们的子一代（Ｆ１）及子二代（Ｆ２）基因组中也均有外源基因整合，并且导入ｐＺｉｐＮｅｏＳＶ（Ｘ１）ＬＭＰ基因后经反转录聚合酶链式反应（ＲＴＰＣＲ），检测ｍＲＮＡ发现有该基因的表达，说明本法制备转基因小鼠是可行的。应用荧光原位杂交技术（ＦＩＳＨ），对子四代（Ｆ４）部分小鼠进行了整合定位研究，结果发现外源基因在体内为随机整合。本文对以上结果进行了讨论。

FISH在人类未受精卵染色体异常分析中的应用

分子细胞遗传学的主要技术代表———荧光原位杂交 (FISH)是用荧光标记的依靠探针杂交原理在细胞核中或染色体上显示某一特定核酸序列的位置 ,并可进行相对定量分析 .它广泛应用于遗传病的诊断、产前诊断、肿瘤遗传学、进化遗传学研究和基因定位等领域 ,随着辅助生殖技术的进展 ,将在植入前胚胎遗传学诊断 (PGD)、生殖细胞 (卵母细胞和精子 )染色体异常的研究方面发挥更大的用途 .它是联系分子遗传学和细胞遗传学之间的桥梁 .

氯丙嗪及氯氮平对小鼠生殖细胞的诱变效应

用氯丙嗪１０ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ，氯氮平６．６７ｍｇ／ｋｇ、、３．３３ｍｇ／ｋｇ、１．６７ｍｇ／ｋｇ分别对小鼠生殖细胞进行亚急性毒性实验。结果显示：连续给药５天后第１周，两药各剂量组的精子头部畸形率均明显高于阴性对照组，且氯丙嗪的作用强于氯氮平。连续给药５天后第４周，两药各剂量组的精子头部畸形率与阴性对照组无差异，表示停药４周后氯丙嗪及氯氮平对精子的致畸作用已基本消除。睾丸细胞染色体结构畸变率在给药后第１周、第４周检查，均与阴性对照组无差异。提示氯丙嗪及氯氮平对小鼠睾丸生殖细胞染色体结构无明显损伤。

人胚胎干细胞建系和分化研究进展

在建立人ES细胞系和发现人ES细胞能被诱导分化为特定细胞后 ,ES细胞的临床应用前景就更为广阔。

一种提高RAPD技术扩增效率的有效方法

RAPD技术是由Williams等于1990年首先创立的一种DNA分子标记技术。但是由于低的退火温度和短的引物序列等原因 ,常常使得RAPD技术的分辨率和可重复性低。本文介绍一种通过延长从退火到延伸的ramp时间 ,提高RAPD产物的分辨率和产量 ,由此提高RAPD技术的扩增效率的有效方法。

应用荧光原位杂交检测EB病毒BNLF-1基因在转基因小鼠子代染色体上的整合及其定位

应用荧光原位杂交技术研究了EB病毒潜伏膜蛋白基因(BNLF-1)在转基因小鼠子二代染色体上的整合及其定位。结果在两只子二代转基因小鼠中,分别观察80个和60个分裂相,出现杂交信号的核型分别为27和18个,检出率为33.8％和30％。转基因分别整合在14号染色体和10号染色体上。提示转基因BNLF-1已稳定整合到转基因小鼠的染色体上,并通过生殖细胞遗传给子代;推测转基因原代鼠的转基因整合可能是随机的多位点整合。

367例不育男性的染色体分析

为了研究染色体因素对男性不育症的影响 ,为辅助生殖技术提供指导 ,我们应用染色体 G显带、C显带技术 ,分析了 3 67例男性不育症患者的染色体。结果发现 79例染色体异常 ,异常率为 2 1 .5 %。染色体异常是男性不育症的重要原因 。

小鼠胚胎核移植实验的初步报告

小鼠胚胎核移植实验的初步报告陆长富①卢光卢惠霖（湖南医科大学人类生殖工程研究室，长沙４１００７８）ＲｅｐｏｒｔｏｎｔｈｅＥｍｂｒｙｏｎｉｃＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎＭｏｕｓｅＬｕＣｈａｎｇｆｕＬｕＧｕａｎｇｘｉｕＬｕＨｕｉｌｉ...

应用染色体涂染技术分析两例染色体结构异常

为了确定两例细胞遗传学提示染色体结构异常的核型 ,应用通过显微切割技术构建的人类18号和7号染色体探针池 ,分别对这两例病例的中期分裂相进行染色体涂染 ,结合显带染色体 ,确定两者核型分别为46,XY,t(3;18)(q12;q21)和46,XX,dirins(1;7)(p3104;q34q36)。染色体涂染技术是染色体显带技术的重要补充和发展 ,为染色体结构异常提供了一种直观、准确的检测手段 ,在遗传咨询和产前诊断方面有重要作用。

精子核碱性蛋白转化与精子畸形及不明原因流产关系初探

本文探讨了精子核碱性蛋白转化与精子畸形及不明原因流产的关系。对８例有二次以上不明原因早期流产妇女的配偶（流产组）及１０个正常生育力的男性（对照组）作精子形态学检查，抽提精子核碱性蛋白，在酸－尿素聚丙烯酰胺凝胶（ａｃｉｄ－ｕｒｅａＰＡＧＥ）中电泳，测定组蛋白（Ｈ），中间型碱性蛋白（ＩＢＰ）及鱼精蛋白（ＨＰ１～３）各区带的相对含量，以（ＨＰ１～３）占总碱性蛋白（ＴＢＰ）的百分比表示碱性蛋白转化率。实验结果为：（１）碱性蛋白转化率与精子畸形率成直线负相关关系（ｒ＝－０．７５９Ｐ＜０．０１）；（２）流产组精子核碱性蛋白转化率低于对照组（Ｐ＜０．０５），ＩＢＰ／ＴＢＰ则高于对照组（Ｐ＜０．０５）。提示精子核碱性蛋白转化障碍致中间型碱性蛋白（ＩＢＰ）及组蛋白（Ｈ）在精子染色质中残留过多，是引起精子头部畸形的原因之一，且与不明原因流产有关。

哺乳动物的核移植

哺乳动物的核移植陆长富卢光（湖南医科大学人类生殖工程研究室，长沙４１００７８）ＮｕｃｌｅａｒＴｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎｉｎＭａｍｍａｌｉａｎＬＵＣｈａｎｇｆｕＬＵＧｕａｎｇｘｉｕ（ＨｕｍａｎＲｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅＥｎｇｉｎｅｒｉｎｇＬａｂｏｒ...

经阴道超声诊断子宫内膜异位囊肿

目的:探讨阴道超声下子宫内膜异位囊肿的声像图特征及其对于诊断的价值。方法:采用阴道内超声检查了73例确诊为盆腔子宫内膜异位巧克力囊肿患者。结果:子宫内膜异位巧克力囊肿主要表现为两种声像图特征:低回声型,无回声型。上述病例均经B超引导下囊肿穿刺术证实,诊断正确率83.6%(61/73)。结论:阴道B超扫描是诊断子宫内膜异位囊肿的首选方法。

孕妇外周血胎儿细胞的分离及其在产前诊断中的应用

孕妇外周血中存在一定数量的胎儿细胞已为许多学者证实,为非侵入性产前诊断提供了一个有广泛应用前景的途径。本文对孕妇外周血胎儿细胞的种类以及胎儿有核红细胞的特点、分离纯化的方法及其在产前诊断中的应用作了简要介绍,并对其中存在的问题进行了探讨。

单精子胞浆内显微注射及其影响因素

胞浆内精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)是90年代发展起来的一种有效治疗严重男性生育缺陷包括无精子症的显微操作方法。本文简要回顾了ICSI技术的发展,并对其基本操作程序及影响其成功的各种因素进行综述。