新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和分子流行病学研究

目的 观察新肝炎病毒 TTV在各类高危人群中的感染状况、基因分型及其在肝病发生和发展过程中的作用。方法 在日本株 TTV ORF1 保守区设计了两对套式引物 ,采用巢式聚合酶链反应扩增血清 TTV DNA,并对产物进行分子克隆和部分基因序列分析。结果 在非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBs A g阳性的肝炎病人、正常献血员、肝炎肝硬化病人、原发性肝癌病人、静脉内吸毒者和女性与男性性乱者中 ,血清 TTV DNA 阳性率分别为 43.2 % (16 /37)、2 8.8% (15 /5 2 )、9.3% (4/4 3)、5 1.9% (14/2 7)、38.5 % (5 /13)、35 .0 % (14/4 0 )、17.3% (8/4 5 )和 18.8% (3/16 )。其中非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBSAg阳性肝炎病人的 AL T平均为 (472± 2 76 ) u· L- 1 和 (385± 2 18) u· L- 1 ;肝炎肝硬化病人 TTV DNA阳性率显著高于 HBSAg阳性肝炎病人。同时 ,从非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清 HBSAg阳性肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中 ,分别获得 6份 TTV DNA ORF1 克隆 ,其基因序列与日本株TTV ORF1 部分基因核苷酸序列同源性为 97%～ 99% ,均属于 TTV 1a型。结论 TTV感染和 AL T升高存在一定的关系 ;我国各类高危人群感染 TTV以 1a型为主 。

慢性粒细胞性白血病急变的相关分子研究进展

慢性粒细胞性白血病（ＣＭＬ）是由ｔ（９，２２）（ｑ３４，ｑ１１）易位引起的一种血液系统恶性疾病。该易位重排形成的ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因及其所编码的Ｐ２１０蛋白在ＣＭＬ发生中的作用已被确认。近年研究表明ｂｃｒ／ａｂｌ融合基因、抑瘤基因（如ｐ５３，Ｒｂ，ｐ１６等）及其它分子（如ＥＶＩ１，ｃｍｙｃ等）均与ＣＭＬ急变有关。分析这些相关分子对ＣＭＬ急变的直接或间接影响，对ＣＭＬ的分子病理学及其治疗研究均具指导意义。

新肝炎病毒TTV在各类高危人群中分子流行病学研究

为观察新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和基因分型 ,在日本株TTVORF1保守区合成了特异性引物 ,采用巢式聚合酶链反应 (nPCR)两次扩增血清TTVDNA ,对各类人群中TTVDNA分别进行了分子克隆和部分基因测序 ,并与日本报道的TTVDNA基因序列比较。结果显示 :从非甲 戊型和非庚型肝炎病人、血清HBsAg阳性的肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中 ,分别获得的 6份TTVDNA克隆 ,其基因序列与日本株TTVORF1部分基因核苷酸序列同源性为 97%～ 99% ,均属于TTVla型。提示 :我国各类高危人群感染TTV以la型为主 ;TTV基因型与疾病发生和传播方式关系不大。

人干细胞因子基因5′旁侧序列的克隆和功能研究

人干细胞因子 ( human stem cell factor,h SCF)在多种哺乳动物干细胞的增殖、分化和移居中发挥重要作用 .利用改进的 PCR体系 ,从人类基因组 DNA中扩增出自 h SCF基因编码起始位点( + 1 81 )至 5′旁侧 - 1 1 90位点共 1 372 bp的片段 ,将其克隆至 p GEM- T载体中 ,经序列分析证明无误 .为探寻此片段中对转录调控起作用的具体区域 ,用基因缺失技术从 - 1 62 ( Bst X )位点向上游分别延伸至 - 2 73( Pst )、- 339( Sma )、- 381 ( Sac )、- 44 0 ( Eco R )、- 570 ( H inc )、-853( Bgl )及 - 1 1 90 ( Xho )等位点 ,共获 7个不同长度的 h SCF基因 5′旁侧序列片段 ,随后将这7个片段分别克隆入荧光素酶 ( luc)报告基因载体 p GL2 - Promoter.经阳离子脂质体包埋技术介导转染 He La细胞 ,培养 48h后检测 Luc活性 .结果表明 :h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域对luc表达有明显的增强作用 ,而 - 339～ - 2 73区域则显示有抑制作用 .分别以包含这两个区域的片段为探针进行竞争性凝胶阻滞实验 ,结果均出现一个或多个特异性滞留区带 ,说明这两个区域存在转录因子的结合位点 .实验结果表明 ,h SCF基因 5′旁侧 - 1 1 90～ - 853区域富含 AT,是一典型基质结合区 ,而 - 339～ - 2 73区域为一新的沉默子 。

血管紧张素转换酶基因多态性与冠心病关系的研究

目的 :研究血管紧张素转换酶 (ACE)基因多态性与冠心病的关系。方法 :应用聚合酶链式反应 (PCR)检测ACE基因第 16内含子I/D多态性 ,并计算基因型和等位基因频率。结果 :在 5 1例冠心病组中ACE基因DD基因型和D等位基因频率分别是 35 %和 6 1% ,83例正常对照组中的ACE基因DD基因型和D等位基因频率分别是 16 %和 45 % ,两者相比具有显著性差异。结论 :ACE基因DD基因型可能是冠心病发生发展过程中重要的危险因素之一。

吉林地区正常汉族人群载脂蛋白E基因多态性分布状态的研究

研究载脂蛋白 (Apo)E基因多态性在吉林地区正常汉族人群中的分布状态。方法 :应用聚合酶链反应———限制性片段长度多态性 (PCR -RFLP)方法先扩增出ApoE基因第 4外显子内的 2 2 7bp片段 ,继以限制性切酶Cfol酶解消化 ,8%聚丙烯酰胺凝胶电泳 ,最后银染显带判定基因型 ,并计算等位基因频率。结果 :本实验共检测分析了 2 0 6例吉林地区正常汉族人的ApoE基因型及等位基因频率。结果表明纯合子ε3 /3 基因型频率及ε3 等位基因频率最高。ε2 高于ε4。且ε2 随年龄增长有增加趋势。结论 :该方法快速、准确 ,分辨率高。ApoE基因多态性分布的研究为ApoE生理功能的研究及进一步临床应用打下基础。

用5-Fu治疗MT/p210^(bcr-abl)转基因小鼠的研究

以５－氟脲嘧啶（５－ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ，５－Ｆｕ）腹腔注射治疗了１２只携有金属硫蛋白（Ｍｅｔａｌｏｔｈｉｏｎｅｉｎ，ＭＴ）启动子和增强子序列、ｂｃｒ－ａｂｌｃＤＮＡ（ｐ２１０）序列及ＳＶ４０剪切和Ｐｏｌｙ（Ａ）信号序列的转基因慢粒白血病（ｃｈｒｏｎｉｃｍｙｅｌｏｉｄｌｅｕｋｅｍｉ－ａ，ＣＭＬ）ＭＴ／ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ小鼠，于治疗的第５ｄ及第１０ｄ从不同脏器提取总ＲＮＡ、ＤＮＡ及蛋白质，分别进行ＰＣＲ分析、ＲＴ－ＰＣＲ检测被转移基因的表达水平及免疫沉淀法分析ｐ２１０ｂｃｒ－ａｂｌ转基因产物的激酶活性．结果表明，被转移基因在脾脏和骨髓中表达水平较高，胸腺和肾脏中呈低水平表达．５－Ｆｕ活体治疗１０ｄ后。

生命科学的进展与生物信息网络

近代生命科学迅猛发展,特别是作为生命科学的前沿——分子生物学的发展,已从根本上改变了它在自然科学中的地位和作用.有识之士都公认生命科学将在21世纪发挥推动科学进步的关键作用,21世纪也将成为公认的“生命科学世纪”.因此,加强发展以生命科学为核心的科技情报信息研究和服务,已成为推动科学技术发展,实施“科教兴国”的先导.最近,在剑桥成立的“欧洲生物信息研究所”(EU- ropean Bioinformatics Institute,EBT),是第一个跨国信息研究所,是欧洲分子生物学实验室数据中心的延伸.该研究所与环球网(World Wide Web,WWW)

HOX基因转录调节机制的研究进展

细胞的增殖、分化过程受同源盒基因表达模式的影响,而PcG类蛋白及TrxG类蛋白则调控细胞各发育阶段的不同同源盒基因表达。如果这些同源盒基因转录调节蛋白的功能改变,则可通过改变同源盒基因的表达模式而致细胞增殖、分化异常,呈现出某些特殊病理学表型,例如白血病、个体发育畸形等。

BCR-ABL嵌合蛋白质信号转导研究进展

p210(BCR-ABL)和p190(BCR-ABL)分别是慢性粒细胞白血病(CML)及部分急性淋巴细胞白血病(ALL)的特征性BCR-ABL嵌合基因的表达产物,与正常C-ABL蛋白质比较,它们具有极强的蛋白质酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性,通过自身磷酸化和使其它胞浆蛋白质磷酸化而干扰控制造血干细胞或造血祖细胞发育的信号转导过程,是相关白血病病理发生的主要原因和标志。本文综述BCR-ABL嵌合蛋白质信号转导的近期研究进展。

干扰素-α信号转导研究进展

干扰素-α(interferon-α,IFN-α)是细胞因子超家族中IFN家族的成员,具有抗病毒、抗肿瘤及免疫调节等多种生物学功能,已作为生物治疗剂而被广泛应用于人类疾病的临床治疗。IFN-α在其效应细胞内多种信号转导途径的交互作用导致了其生物学功能的复杂性和多样性。近年研究表明,IFN-α主要经JAK-STAT、IRF途径转导信号。明确各种信号转导途径及其信号转导分子之间复杂的网络联系,已成为探讨IFN-α的分子作用机制和拓宽其应用范围的重要研究领域。

AFLP法构建人参、西洋参基因组DNA指纹图谱

目的 采用扩增片段长度多态性DNA(AFLP)分子遗传标志技术 ,分析人参、西洋参基因组DNA多态性。方法 人参、西洋参干燥根基因组DNA ,经EcoRI/MseI酶切并与其相应的人工接头连接后 ,使用选择性引物进行PCR扩增。结果 经变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,成功构建出多态性丰富和重复性好的人参、西洋参DNA指纹图谱。结论 AFLP法有望成为一种独立的切实可行的手段 ,将在人参、西洋参等药用植物的鉴定、生物进化、系统发育研究及指导道地性药材的科学栽培等方面发挥重要作用。

Hu联合GM-CSF对K562细胞生长-凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨羟基脲（hydroxyurea，Hu）及Hu联合粒系-巨噬系集落刺激因子（granulocyticmacrophagecolony－stimulatingfactor，GM－CSF）对慢性粒细胞白血病（chronicmyelogenousleukemia，CML）细胞株K562细胞生长及凋亡相关基因表达的调节效应。方法：以Hu及Hu联合GM-CSF培养K562细胞，采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）来分析培养48小时后bcr-abl、bax、c－myc基因表达水平。结果：Hu显著抑制bcr－abl基因表达，促进bax基因表达，但对c－myc基因表达无影响。GM－CSF可部分桔抗Hu对bcr－abl、bax基因表达的调节效应，显著上调c－myc基因表达水平。结论：除直接细胞毒作用外，Hu可通过下调bcr－abl和上调bax基因表达水平而诱导细胞死亡或凋亡。由于GM-CSF有部分持抗化疗药物的效应，故临床上在采用Hu治疗CML患者的同时，宜慎重使用GM－CSF。

重组人干细胞因子在大肠杆菌中的表达及活性鉴定

采用ＰＣＲ方法从重组载体ｐＫＫＳＣＦ扩增出人干细胞因子（ＳＣＦ）基因ｃＤＮＡ片段，经亚克隆构建成表达载体ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ，经限制性酶谱分析鉴定证实．继用ＩＰＴＧ诱导重组ｐＥＴ１１ｄＳＣＦ在大肠杆菌ＨＭＳ１７４（ＤＥ３）中表达，经初步纯化获得重组人ＳＣＦ蛋白质，经检测具有生理活性，对脐带血ＣＦＵ－ＣＭ和ＨＰＰ－ＣＦＣ增殖有明显刺激作用，为进一步的生物工程研究奠定了基础．

定量RTPCR中人干细胞因子的RNACRS的构建

一种适用于定量RT PCR、用ExonucleaseⅢ部分酶切剔除技术 ,构建人干细胞因子 (hSCF)基因的RNA竞争性参考标准 (RNA CRS)的新方法 :用RT PCR技术 ,从HepG2细胞中扩增出全长人hSCFcDNA ,并克隆入质粒pGEM T获重组的pGEMSCF载体 ,经ExonucleaseⅢ和S1核酸酶适当处理 ,以导致hSCFcDNA中一小片段缺失 ,由此获得重组 pGEMSCF模拟体 (mimic) ,经体外转录得到hSCFRNA CRS .测序表明 :该RNA CRS与hSCFmRNA比较 ,缺失了从第 4 99位至 60 8位共 110个核苷酸 ,但二者RT PCR反应可用同一对扩增引物 ,反应动力学极为相似 .这种hSCFRNA CRS可作为一种较理想的竞争性参考标准 ,适用于定量RT PCR中 ,以对重组hSCF在真核细胞中的表达水平进行准确的定量分析 .此方法亦可推广应用于其他真核基因的表达水平及

PCR-SSCP分析线粒体DNA突变的方法学改进

在采用PCR -SSCP(PolymeraseChainReaction -SingleStrandConformationPolymorphism ,聚合酶链式反应 -单链构象多态性 )分析技术对 8例骨关节病患者软骨细胞线粒体DNA进行突变分析的过程中 ,针对区带多而杂乱的情况 ,改变变性剂成份和电泳电压 ,从而有效提高了检出灵敏度 ,同时极大地节省了时间。

骨关节病关节软骨细胞线粒体DNA突变检测

目的 :探讨线粒体DNA突变在退行性疾病骨关节病发病中的意义。方法 :采用PCR -SSCP技术 ,结合线粒体DNA测序方法 ,检测了 8例骨关节病和 3例正常人的关节软骨细胞线粒体DNA在一个特点区域 (np:80 0 0— 90 0 0 )内的突变改变。结果 :在 8例骨关节病例中 ,有 4例出现了线粒体DNA突变 (不包含中性突变 ) ,其中单有点突变并导致氨基酸发生改变的有 2例 ,单有缺失突变的有 1例 ,既有点突变又有缺失突变的有 1例 ;此外 ,发现中性突变 (不改变氨基酸 )的有 4例 ;1例正常标本发现有线粒体DNA点突变存在 ;所有进行了DNA测序检测的标本均发现线粒体DNA886 0位点AG的突变。结论 :骨关节病与线粒体DNA突变有密切关系 ,但其因果关系尚待进一步研究。

HL-60细胞内同源盒HOXA1、cDNA基因的克隆

目的：研究同源盒ＨＯＸ基因的表达在ＡＴＲＡ诱导白血病细胞分化中的作用。方法：利用我们建立的一种高效、简单的ｃＤＮＡ克隆方法－ＨＯＸ家庭基因指纹图技术，克隆ＨＬ－６０细胞内的ＨＯＸｃＤＮＡ基因。采用半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术初步探讨ＡＴＲＡ对所克隆的ＨＯＸ基因表达的影响。结果：筛选出一个在ＨＬ－６０细胞内有表达的同源盒基因一ＨＯＸＡＩ基因ｃＤＮＡ片段，初步研究证实，此基因的ｍＲＮＡ水平在ＡＴＲＡ的作用下被上调。结论：ＡＴＲＡ可诱导ＨＬ－６０细胞内ＨＯＸＡ１基因表达增强。提示在ＡＴＲＡ诱导细胞分化而治疗恶性肿瘤的分子机制中，包括上调ＨＯＸＡ１基因表达而致白血病细胞分化成熟。