新肝炎病毒TTV在各类高危人群中的感染状况和分子流行病学研究

目的 观察新肝炎病毒 TTV在各类高危人群中的感染状况、基因分型及其在肝病发生和发展过程中的作用。方法 在日本株 TTV ORF1 保守区设计了两对套式引物 ,采用巢式聚合酶链反应扩增血清 TTV DNA,并对产物进行分子克隆和部分基因序列分析。结果 在非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBs A g阳性的肝炎病人、正常献血员、肝炎肝硬化病人、原发性肝癌病人、静脉内吸毒者和女性与男性性乱者中 ,血清 TTV DNA 阳性率分别为 43.2 % (16 /37)、2 8.8% (15 /5 2 )、9.3% (4/4 3)、5 1.9% (14/2 7)、38.5 % (5 /13)、35 .0 % (14/4 0 )、17.3% (8/4 5 )和 18.8% (3/16 )。其中非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清HBSAg阳性肝炎病人的 AL T平均为 (472± 2 76 ) u· L- 1 和 (385± 2 18) u· L- 1 ;肝炎肝硬化病人 TTV DNA阳性率显著高于 HBSAg阳性肝炎病人。同时 ,从非甲 -戊型和非庚型肝炎病人、血清 HBSAg阳性肝炎病人、正常献血员、静脉内吸毒者和女性性乱者中 ,分别获得 6份 TTV DNA ORF1 克隆 ,其基因序列与日本株TTV ORF1 部分基因核苷酸序列同源性为 97%～ 99% ,均属于 TTV 1a型。结论 TTV感染和 AL T升高存在一定的关系 ;我国各类高危人群感染 TTV以 1a型为主 。

两种质粒转化方法的比较

本文对一种快速质粒转化方法与传统质粒转化方法进行比较，发现前者每微克超螺旋质粒ＤＮＡ能获得１．３４×１０４～２．３６×１０５个转化子，且整个过程快速简便稳定，能满足一般的质粒克隆转化要求。

静脉及心脑血栓性疾病抗活化的蛋白C的研究

为探讨抗活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣＲ）及其基因型在中国人血栓性疾病的发病情况，用活化的部分凝血活酶时间（ＡＰＴＴ）以加和不加活化的蛋白Ｃ（ＡＰＣ）的比值（ＡＰＣ－ＳＲ）检测ＡＰＣＲ；用多聚酶链反应扩增因子Ⅴ第１０外显子（包含５０６位密码子）的２２０ｂｐ片段，再用限制性内切酶ＭｎｌⅠ消化检测其基因型。共检测了４６例静脉血栓和下肢动脉血栓，５８例心、脑梗塞，７４例冠心病及４０名正常人的ＡＰＣＲ及其基因型。结果表明血栓性疾病患者与正常人的ＡＰＣＲ无明显差异，亦没有发现与ＡＰＣＲ相关的基因型。

先天性尿道下裂与SRY基因关系的探讨

目的 探讨尿道下裂与SRY基因的关系及意义。 方法 采用PCR方法对 42例先天性尿道下裂患者外周血白细胞进行SRY基因检测。 结果 发现 2例染色体核型为 46 ,XY患者SRY基因缺失 ,DNA样品加入EF3、ER3引物及新Taq酶后 ,PCR反应结果可见 332bp的Sox9基因片段 ,对照 46 ,XY正常成年男性基因组DNA扩增产生 436bpSRY基因片段。 结论 (1)SRY基因不是性别决定的唯一基因 ,SRY基因缺失或突变可能导致性发育的一系列异常改变 ,尿道下裂的发生与SRY的缺失、变异有关。 (2 )先天性尿道下裂是一种性别发育异常 ,尿道缺失是性腺发育不全表现。 (3)对尿道下裂患者进行SRY基因检测有一定的临床意义。

蛋白C基因新突变His134Asn所致Ⅰ型蛋白C缺乏症

目的：研究一家族性血栓病相关病因的表型及基因型。方法：先证者、其母、二兄分别在３５，１９，３３岁起无明显诱因患反复性下肢深静脉血栓（ＤＶＴ）。对其四代１３个家庭成员的抗凝血酶Ⅲ、蛋白Ｃ（ＰＣ）、蛋白Ｓ（ＰＳ）、纤溶酶原的抗原和活性及活化的ＰＣ抗性等进行检测。结果：该家族５个成员患有Ⅰ型杂合子ＰＣ缺乏症（ＰＣ抗原和活性降低５０％左右）。ＰＣ基因各外显子及外显子、内含子连接区聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）未发现明显的异常带；亚克隆后测序发现ＰＣ的第Ⅵ外显子３４４４Ｃ→Ａ导致１３４Ｈｉｓ→Ａｓｎ变异，这是国外尚未报道的新突变，被命名为ＰＣ长沙。此突变使限制性内切酶ＨｐｈⅠ位点丧失，用ＰＣＲ／ＨｐｈⅠ进行家系分析，证实了６个家系成员（包括５个ＰＣ缺乏者）具有同样的突变。结论：Ｈｉｓ１３４Ａｓｎ是此家族ＰＣ缺乏所致ＤＶＴ的密切相关病理基因型。

蛋白C基因多态性在正常人和血栓病人的分布频率

目的探讨蛋白Ｃ基因多态性在中国正常人和血栓病人的分布情况。方法用聚合酶链式反应－单链构型多态性银染法分析了蛋白Ｃ（ＰＣ）的第一、六外显子的两个多态性：ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ，检测了９０名汉族正常人和１０５例血栓病人。结果ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ的基因分布频率在正常人为０．８６７／０．１３３，与西方人群（０．４／０．６）明显不同（Ｐ＜０．００５），而ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ的分布频率在中西方人非常接近，分别为０．６０／０．４０和０．５９／０．４１；两多态性基因频率分布符合Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡定律，且连锁不平衡。ＰＣ－１４７６Ａ／Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｔ／Ｇ的少见等位基因ＰＣ－１４７６Ｔ和ＰＣ－３３４２Ｇ在血栓病人的分布频率分别为０．２１和０．４６，高于在正常人群的分布频率（０．１３和０．４０）。结论此两ＰＣ基因多态性可能是动静脉血栓的遗传性相关因素。

先天性尿道下裂患者SRY基因的检测

对４２ 例先天性尿道下裂患者外周血白细胞，采取 Ｐ Ｃ Ｒ 方法，进行 Ｓ Ｒ Ｙ 基因的检测。结果发现２ 例先天性尿道下裂患者 Ｓ Ｒ Ｙ 基因缺失。我们认为先天性尿道下裂是一种性别发育异常综合症，尿道的缺失只是其性腺发育不全的表现之一； Ｓ Ｒ Ｙ 基因不是决定性别的唯一基因， Ｓ Ｒ Ｙ 基因的缺失或突变可能导致性发育一系列异常改变， Ｓ Ｒ Ｙ 基因是性别决定的主导基因；尿道下裂发生可能与 Ｓ Ｒ Ｙ 基因缺乏，突变有关，故对尿道下裂等泌尿生殖系畸形患者进行 Ｓ Ｒ Ｙ 基因检测，对计划生育及优生优育具有十分重要的意义。