基于巯基自组装单层膜的日本血吸虫石英晶体微天平免疫传感器

应用自组装膜技术在压电石英晶振金电极表面自组装一带羧基的巯基丙酸单层膜 ,通过盐酸 1 -乙基 -3 -(3 -二甲基氨基丙基 )碳二亚胺及 N -羟基琥珀酰亚胺共价固定 3 2 KD的日本血吸虫分子抗原 (Sj Ag3 2 ) ,设计了石英晶振微天平免疫传感器 ,用于测定日本血吸虫抗体 .比较了巯基自组装单层膜与 HEMA-MMA共聚物涂层修饰的石英晶振在溶液中的振荡行为 ,发现巯基自组装单层膜修饰的石英晶振稳定快 ,且稳定性好 .在优化条件下 ,测得 IRS(4 9-2 0 0 0 )的滴度为 1∶ 1 50 0 .此外 ,对不同程度血吸虫感染的兔血清进行了测试 ,结果表明 。

日本血吸虫31／32kDa抗原纯化及诊断应用的研究(英文)

采用超凝胶柱层析结合超滤、透析、沉淀等方法分离纯化了日本血吸虫成虫３１／３２ｋＤａ抗原。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、银染和免疫印迹分析，证明免疫及生化纯度。银染及ＰＡＳ证实此抗原是一种不含糖的多肽类组分。用于ＥＬＩＳＡ和ＩＨＡ诊断日本血吸虫病，与ＳＥＡ同样敏感，而特异性明显较优。

日本血吸虫31kDa组织蛋白酶B DNA疫苗保护性免疫效果观察

目的 观察日本血吸虫 31k Da组织蛋白酶 B DNA疫苗 (Sj31B1 N)在小鼠体内的保护性免疫效果。方法 用 Sj31B1 N和 Sj31B1 N +p UC DNA疫苗肌注免疫 BAL B/ C小鼠 ,用空白质粒载体VR10 12做对照 ,在 0、4、8周共免疫 3次 ,每次免疫前及末次免疫后 4周从尾静脉采血收集血清 ,经EL ISA法检测小鼠血清抗体升高时 ,用日本血吸虫尾蚴攻击感染小鼠。结果 Sj31B1 N和 Sj31B1 N+p U C减虫率分别为 2 4.2 %和 2 2 .0 % ;肝卵减少率分别为 34 .9%和 39.5 % ,每雌肝卵减少率分别为 30 .4%和 35 .3%。结论 小鼠接种 Sj31B1 N后对日本血吸虫感染有减虫、减卵作用及抗雌虫生殖的作用。加质粒佐剂 p

日本血吸虫未成熟虫卵67kDa分子抗原诊断血吸虫病的研究

本文通过SDS－PAGE和电渗方法，从日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（SIEA）中分离纯化出67kDa蛋白分子，以该分子包被微板进行ELISA，检测了急、慢性日本血吸虫病人血清，其阳性检出率达100％和94．6％，与60例正常人血清、30例肝吸虫和31例肺吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，慢性血吸虫病人治疗后3个月、半年和1年的阴转率分别为58．1％，75．4％和84．6％。提示SIEA67kDa分子抗原具有较好的疗效考核价值和现场应用前景。

旋毛虫肌蚴抗原诱导小鼠抗日本血吸虫保护性免疫的研究

目的：探讨旋毛虫幼虫抗原免疫小鼠对日本血吸虫攻击感染的交叉保护作用。方法：用４种不同的旋毛虫幼虫抗原制剂经颈部皮下多点免疫小鼠，然后用日本血吸虫尾蚴３０条或１００条攻击感染，攻击后４５ｄ剖杀小鼠，收集成虫、肝组织和粪便中的虫卵，并计数。结果：４种不同制剂均可诱导不同程度的保护性免疫效应，以旋毛虫幼虫匀浆上清可溶性抗原（ＴｓＳＡ）效果较好，减虫率为２１．３％，加用福氏佐剂时，其减虫率为２９．３％，肝组织和粪便中的虫卵减少率分别达４８％和５８．５％，平均每鼠肝组织和粪便中的虫卵ＥＰＧ减少率分别为４１．７％和４８．９％；当抗原剂量为１００００条旋毛虫并加用福氏佐剂时，其减虫率达３９．６％。

日本血吸虫铁蛋白基因的筛选、克隆与表达

采用Ｓｊ未成熟虫卵抗原超免疫兔血清（ＲＡＳｊＩＥＡ）对Ｓｊ成虫ｃＤＮＡ文库进行筛选，并对可能具有抗日本血吸虫生殖／卵胚发育潜能的抗原分子进行克隆、表达。常规法免疫筛选Ｓｊ成虫文库，获得单个阳性克隆，ＰＣＲ扩增后琼脂糖电泳测定基因大小，ＤＮＡ测序，基因库搜索，找出同源基因。共鉴定出６个不同的基因克隆。选择其中的铁蛋白（ＳｊＦｅｒ）基因亚克隆于ｐＧＭＣ载体。重组蛋白以ＧＭＣＳＦ（粒细胞巨噬细胞集落刺激因子）－ＳｊＦｅｒ融合蛋白的形式在细菌中高效表达。表达产物仅溶于８Ｍ尿素溶液中，分子量为４０ｋＤ。

日本血吸虫成虫31/32kD抗原诱导小鼠产生抗卵免疫的初步研究

本文采用超凝胶柱层析法分离纯化日本血吸虫31/32kD抗原.免疫小鼠诱导保护性免疫力.结果表明,这种保护性免疫力仅有抗卵效果,无抗成虫作用.31/32kD免疫小鼠后可使小鼠粪卵减少63.8%—78.3%;雌虫子宫内虫卵降低53.2%;肝、肠中死卵量明显增加,说明31/32kD抗原可诱导小鼠产生抗卵免疫干扰虫卵形成,加速虫卵死亡,提示它可能是一种有希望的抗血吸虫病理疫苗的候选抗原.

日本血吸虫组织蛋白酶BDNA疫苗抗生殖免疫的研究

目的 探讨日本血吸虫组织蛋白酶ＢＤＮＡ疫苗的保护。方法 分别用Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫昆明鼠和ＢＡＬＢ／ｃ 小鼠，攻击感染后６ｗ 计数成虫负荷及粪便和组织内虫卵数。结果 用构建的Ｓｊ３１ＢＩＮ免疫小鼠可影响成虫发育，肝组织减卵率为５９－３％～６５－０％ ，肠组织减卵率为５７－６％ ～６２－１％ ，粪便减卵率为８６－５％ 。结论 Ｓｊ３１ＢＩＮ 可诱导小鼠产生抑制雌虫生殖的免疫力。

赫坎按蚊种团内各亲缘种间基因组重复DNA的限制酶切长度差异

本研究首次报道了赫坎按蚊种团内亲缘种间基因组中重复DNA限制酶切长度差异。研究的蚊种包括中华按蚊、嗜人按蚊、凉山按蚊、克劳按蚊和小宽按蚊等5个亲缘种。制备每种蚊的基因组DNA,分别以BglⅡ、HaeⅡ和PstⅠ等3种限制性核酸内切酶消化,琼脂糖电泳分离,比较重复序列DNA的带型.结果显示5个亲缘种的重复DNA的限制酶切片段的带型有明显的差异.该法敏感可靠,可作为亲缘种间鉴别的一个方法。

4种抗原检测日本血吸虫病人血清中特异性IgG和IgG_4考核疗效的比较研究

目的探讨ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及疗效考核价值。方法采用ＥＬＩＳＡ法，用ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２及ＳＥＡ检测治疗前及治疗后不同时期血吸虫病人血清中的特异性ＩｇＧ、ＩｇＧ４及正常人和肺吸虫、肝吸虫、囊虫病人血清中的非特异抗体。结果ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２的敏感性和特异性与ＳＥＡ比较差异均无显著性（均Ｐ＞０．０５）；用ＳｊＭＡｇ和ＫＬＨ分别检测治疗后１２个月血清中ＩｇＧ和ＩｇＧ４的阴转率均显著高于ＳＥＡ（Ｐ＜０．０１）、检测治疗后２４个月血清中ＩｇＧ４的阴转率均达９７．６％。结论ＳｊＭＡｇ、ＫＬＨ及ｒＳｊ３２具有与ＳＥＡ相似的诊断价值和较高的疗效考核价值；特异性ＩｇＧ４可能系一种疗效敏感抗体，可望成为疗效考核评价指标。

日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间相似抗原的研究

目的 :分析日本血吸虫虫卵与旋毛虫肌蚴间共同抗原的相似程度。方法 :应用 EITB和 ELISA技术对此 2种寄生虫可溶性抗原进行了血清学交叉反应分析。结果 :EITB显示 :在Ts ML A中 ,4 4、 53、 60、 64、 66/ 70 k Da和约 10 0 k Da的抗原为 Sj IRS识别 ,而 31、 4 2、 4 6、 51/53和 58/ 60 k Da成分为 α- Sj EARS识别 ;在 Sj EA中 ,4 6、58和 64k Da抗原为 Ts IRS识别 ,58、60、64和 70 k Da成分为α- Ts MLARS识别。EL ISA显示 :在 Sj IRS中抗 Ts抗体滴度显著高于在Ts IRS中所含抗血吸虫卵的抗体滴度。结论 :日本血吸虫卵与旋毛虫肌蚴间存有较多的共同抗原决定簇 ,但两者间的相似程度有明显差异。

日本血吸虫31/32kDa分子抗原快速诊断试剂盒的研制与现场应用

目的基于纯化的日本血吸虫31／32kDa分子抗原，建立一种敏感、特异、简便、快速诊断血吸虫病的试剂盒。方法采用Chappell方法分离纯化Sj31／32kDa抗原并建立快速ELISA，检测急、慢性血吸虫病人，并以肺吸虫病人、肝吸虫病人及正常人血清作为平行对照。结果血吸虫病人457例，阳性检出率为94．3％，67例肺吸虫病人及76例肝吸虫病人血清均未出现明显交叉反应，正常人群假阳性率为1％。结论提示采用纯化的优势诊断抗原分子建立的快速诊断试剂盒有较好的现场应用潜能，且具有简便、快速、无需特殊设备等优点，值得推广应用。

日本血吸虫成虫表膜抗原的诊断效果及疗效考核价值

[目的 ]探讨日本血吸虫成虫表膜抗原 (Sj MAg)检测日本血吸虫病患者的特异性和敏感性及考核疗效价值。 [方法 ]采用 Sj MAg- EL ISA检测治疗前、后不同时期血吸虫病患者血清中特异性 Ig G、 Ig G4及健康人、并殖吸虫、华支睾吸虫及囊尾蚴病患者血清中的交叉抗体。 [结果 ]Sj MAg的敏感性和特异性与可溶性虫卵抗原(Sj SEA)比较 ,无显著性差异 (P>0 .0 5 ) ;用 Sj MAg- EL ISA检测治疗后 12个月患者血清中 Ig G的阴转率为80 .0 % ,显著高于 SEA- EL ISA的 43.3% ,而检测 Ig G4的阴转率为 93.3% ,显著高于 Sj SEA- EL ISA的 6 0 % ,检测治疗后 2 4个月患者血清中 Ig G和 Ig G4的阴转率分别达 92 .9%和 97.6 %。 [结论 ]Sj MAg- EL ISA检测日本血吸虫病具有与 Sj SEA- EL ISA相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。

日本血吸虫病患者血清对噬菌体随机7肽库的免疫筛选

目的从噬菌体随机多肽文库中 ,筛选出能与慢性血吸虫病患者血清特异性结合的短肽分子。方法采用慢性血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Ig)作为配基 ,免疫筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体M13外壳蛋白III表达的随机7肽文库。按吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,经3轮免疫淘筛后 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ,并用斑点ELISA分析其诊断血吸虫病的价值。结果经3轮免疫淘筛后 ,特异性结合的噬菌体富集增加近100倍。用ELISA检测第3轮筛选后随机挑取的30个噬菌体克隆 ,有26个克隆能与慢性血吸虫病患者的血清Ig产生特异性反应 ,其中A值最高的2个克隆具有诊断血吸虫病的潜在价值。结论噬菌体随机肽库技术 ,可应用于分析、鉴定血吸虫抗原表位 ,继而为获得亚单位表位水平的诊断试剂和抗血吸虫病的短肽疫苗提供依据。

重组日本吸虫成虫32kDa抗原用于疗效考核的研究

目的探讨重组日本血吸虫成虫３２ＫＤ抗原（ｒｓｊ３２）检测日本血吸虫病人的特异性和敏感性及考核疗效的价值。方法采用ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ法检测治前及治后不同时期血吸虫病人血清中特异性ＩｇＧ及正常人、肺吸虫、肝吸虫和囊虫病人血清中交叉抗体。结果ｒＳｊ３２在敏感性和特异性方面与ＳＥＡ比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）；用ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ检测治后１２个月血清ＩｇＧ的阴性率为７６．７％，显著高于ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ的４３．３％，检测治后２４个月血清ＩｇＧ的阴性率达９０．５％。结论ｒＳｊ３２－ＥＬＩＳＡ检测日本血吸虫病具有与ＳＥＡ－ＥＬＩＳＡ相同的诊断价值和较高的考核疗效价值。

重组日本血吸虫铁蛋白诱导小鼠保护性免疫的研究

目的用重组日本血吸虫铁蛋白免疫小鼠，观察抗血吸虫的免疫保护作用。方法用重组的日本血吸虫铁蛋白（ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ）免疫小鼠，经皮下免疫 ３次，在第 ３次免疫后 ４周，经腹部感染日本血吸虫尾蚴４０条或５０条，４５ｄ后杀鼠，观察减虫效果。结果用ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ、ＩＬ－１２＋ ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｉｎ和 ＦＣＡ＋ ＧＭ－ＣＳＦ－ＳｊＦｅｒｒｉｔｌｎ免疫小鼠分别获得 ２２． ８６％、 ２５． ６３％和３９ ８１％的减虫率。结论本研究首次证明铁蛋白能诱导抗血吸虫病保护性免疫。

不同环境温度、低温保存及衰老对间日疟原虫子孢子发育为红外期的影响

观察了蚊体内间日疟原虫子孢子进腺后，在不同温度的环境中继续生活5d，或将全蚊保存于－70℃或液氮中24h或5d，再取其子孢子接种HepG2－A16细胞，培养7d后，通过免疫酶染色观察红外期裂殖体与休眠体的发育情况。结果表明，30±1℃组及13±1℃组的子孢子发育率（0．33％。及0．35％。）均显著低于26±1℃组（0．75‰）；13±1℃组休眠体占红外期总数的比例显著高于另2组，分别为62．5％及40．1％或42．7％，提示较低的环境温度首先影响速发型子孢子的活力或影响其表现型，使休眠体的比例升高，与流行病学资料高纬度地区长潜伏期间日疟比例较大相一致。短时间的低温保存使子孢子发育为休眠体的比例上升：－70℃组为87．4％，液氮组为82．4％，但并不能使速发型子孢子全部灭活。子孢子日龄的增加使其在宿主细胞内的发育率显著下降并使红外期裂殖体发育迟缓，两者是负相关的线性关系，但休眠体的比例未见升高而明显下降。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原的初步分析

采用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和ＥＬＩＢ技术分析了日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ），并与可溶性成熟卵抗原（ＳＥＡ）进行比较，二者主要蛋白区带存在明显差异。同时，ＥＬＩＢ结果表明，ＳＩＥＡ中感染血清和免疫血清所识别的６７ｋＤａ、６２ｋＤａ、５４ｋＤａ、５０ｋＤａ、２８ｋＤａ和２６ｋＤａ等抗原组分不出现于ＳＥＡ，推测其在ＳＩＥＡ诱导宿主产生抗雌虫生殖及抗卵胚发育免疫应答方面起作用。

日本血吸虫未成熟卵可溶性抗原诱导抗卵免疫的初步研究

采用日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原（ＳＩＥＡ）及成熟虫卵可溶性抗原（ＳＥＡ）分别免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，发现ＳＩＥＡ诱导小鼠产生显著的抗生殖及抗卵胚发育的免疫力；与对照组比较，ＳＩＥＡ免疫鼠在攻击感染后４６天，肝、肠组织内总虫卵数明显下降，成熟虫卵数和粪卵数分别降低了５９．９８％，６６．８６％和６６．９７％；粪卵下降程度与肝、肠组织中成熟虫卵的减少相一致，ＳＥＡ免疫后未呈现上述效应。