人胎心肌原癌基因c-myc和jun表达的原位杂交研究

应用地高辛配体(digoxigenin)标记探针的原位杂交技术,检测了原癌基因 c-myc 和 jun在12例不同发育阶段的人胎心肌中的表达。根据胎龄,将其中9例分成三组,胎龄分别是16—17、23—24和27—28周,每组各3例。另外有32和36周及足月的大胎龄标本各例。杂交信号用图象分析仪(MIAS 300)分析处理。结果显示:c-myc mRNA 或 jun mRNA 的表达水平在3组心肌样本中的任意2组间的变化有差异显著性(P<0.01)结果表明,在胎儿早期,c-myc 和 jun 的表达都较高,随着胎龄的增加,其表达水平逐渐下降,在足月胎儿表达水平很低。结果提示,在人胎心肌的发育过程中,这两种原癌基因的表达均是一种下行调节方式,反应了 c-myc 和 jun 在心肌细胞的发育过程中与心肌细胞的生长密切相关。可能在心肌细胞的增殖与分化中起着重要调控作用。本研究也表明,地高辛配体标记探针的原位杂交技术具有灵敏度高,分辨力好和实验周期短等优点。对在体正常心肌发育的原癌基因表达的研究,有助于对正常心肌生长以及对心肌肥大发生的分子机制的了解。

诱发心肌细胞肥大过程中p53和c－myc基因表达的原位杂交研究

利用血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ）诱发下培养的ＳＤ乳鼠心肌细胞（ＭＣ）肥大的模型，采用地高辛配体（ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ）标记探针的原位分子杂交方法，研究了ｐ５３和ｃ－ｍｙｃ基因在血管紧张素Ⅱ促培养乳鼠心肌细胞肥大中的表达变化。实验分成二组：根据ＡｎｇⅡ持续作用心肌细胞时间，实验组分别于第一天，第三天和第七天终止培养；对照组是相同时期不加血管紧张素培养的心肌细胞。杂交信号用图象分析仪（ＭＩＡＳ３００）进行分析处理，统计结果显示：实验组ｐ５３ｍＲＮＡ的表达水平明显低于对照组，且表达水平与用药时间呈负相关。而ｃ－ｍｙｃ的ｍＲＮＡ在加药促肥大早期（第１天），表达增高，然后逐渐衰减。结果提示：野生型ｐ５３及ｃ－ｍｙｃ基因均可能参与心肌肥大的病理过程，而ｃ－ｍｙｃ基因在心肌肥大过程中可能是一个始动因素。

大鼠甲状腺毒症心肌肥大的细胞内钙离子分布的研究

采用人工大鼠腹腔注射Ｌ－甲状腺素３周、４周不等，发现实验组大鼠心肌细胞线粒体内有大量Ｃａ２＋沉淀物积聚，多呈弥漫性散在分布，亦可沿线粒体嵴呈线样排列。结果提示：细胞内Ｃａ２＋积聚和异常分布与细胞损害程度密切相关。

c－Fos在培养的心肌细胞肥大过程中表达的免疫组织化学研究

实验选用ＳＤ乳鼠，取心尖作心肌细胞培养。实验组加血管紧张素Ⅱ（ＡｕｇⅡ），对照组加等量生理盐水，加液后于２小时、１天、３天和第７天终止培养。利用ｃ－Ｆｏｓ的免疫组织化学技术检测Ｆｏｓ蛋白在两组中的表达强度。结果表明：①加液后２小时，加ＡｕｇⅡ组和加生理盐水组心肌细胞均呈阳性表达。②加液后１天、３天，实验组弱阳性表达，对照组未见表达。③加液持续作用７天后，加ＡｕｇⅡ组心肌细胞肥大已形成，可见胞体很大的心肌细胞呈强阳性表达，而加生理盐水组无表达、结果提示：ｃ－Ｆｏｓ基因可能参与心肌肥大的病理过程。

豚鼠心内皮细胞超微结构特征

电镜观察豚鼠心内膜内皮细胞的超微结构及其细胞间的连接,并对心内皮细胞、细胞核进行形态学计量分析。结果显示,心内膜内皮细胞内有高度发达的高尔基复合体,大量的胞浆颗粒,还有众多的胞膜套叠内折,相邻内皮细胞的侧面存在着较多的缝隙连接及紧密连接。上述结构特征可能是心内膜内皮细胞具有发挥理化屏障、跨膜转运和释放活性物质等生理功能的物质基础.

一种从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的简单电洗脱装置

我们设计了一种简单电洗脱装置，从琼脂糖胶中回收ＤＮＡ。该装置由两个带旋盖的小管、两块透析膜和一个凝胶屏障组成。在电场作用下，ＤＮＡ从凝胶中迁移出来，通过凝胶屏障进入由凝胶屏障和透析膜组成的回收小仓。用微量吸样器收集ＤＮＡ，乙醇沉淀和清洗。该法ＤＮＡ的回收率约８５％；回收的ＤＮＡ可用于基因工程常规实验。

原代培养的成人心肌细胞及非肌细胞中心体的免疫荧光染色观察

用免疫荧光染色法显示原代培养的成人心肌细胞及非肌细胞的中心体。结果表明:已用或者不曾用 ARA-C 处理的心肌细胞均无分裂活动,中心体形态正常。非肌细胞中,绝大多数成纤维细胞的分裂敏 ARA-C 抑制,上皮细胞则无例外地不再分裂。所有非肌细胞的中心体均无异常。提示成人心肌细胞不分裂与中心体无直接联系。

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞C-myc原癌基因的表达

用地高辛配体标记探针的细胞原位杂交技术对31例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)C-myc原癌基因mRNA表达进行了检测,并在此基础上观察其与疾病活动性及ANA、抗dsDNA抗体、IgG、补体C_3等免疫指标的关系。结果显示:SLE患者C-myc mRNA水平较正常人显著增高,并与疾病活动性一致;SLE患者C-myc基因mRNA表达水平与ANA、抗dsDNA抗体、IgG、C_3均有相关关系。上述结果提示:C-myc基因在SLE发病过程中具有重要意义,C-myc基因与SLE关系的研究,有助于从分子水平上探讨SLE的发病机制。