晚妊人胎脊髓内一氧化氮合酶阳性神经元和阳性纤维的分布及其生物学意义

取７例人胎脊髓标本，用还原型辅酶Ⅱ（β－ＮＡＤＰＨ）组织化学方法对人胎脊髓内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性神经元和阳性纤维的分布进行了观察。ＮＯＳ阳性神经元在妊娠３２周至３９周胎龄人胎脊髓内的分布和细胞形态无明显差异，主要位于后角深层（Ⅲ、Ⅳ层）、中央管周围灰质和中间带外侧核（ＩＭＬ）；前角内可见少数散在的ＮＯＳ阳性神经元；在脊髓白质内有密集的ＮＯＳ阳性的胶质样细胞分布。ＮＯＳ阳性纤维主要见于后角浅层（Ⅰ、Ⅱ层）和中间带。脊髓内ＮＯＮ阳性神经元和阳性纤维的分布，提示脊髓内ＮＯＳ可能与内脏活动的调节和躯体感觉传入的调制有关；ＮＯＳ阳性的胶质样细胞可能参与白质内神经纤维的髓化过程。

周围神经端侧吻合再生纤维来源的实验研究

目的 :探索周围神经端—侧吻合后再生纤维 (侧芽 )的来源。方法 :将Wistar大鼠左侧腓总神经切断后端—侧吻合到外膜开窗的胫神经干上。术后 1 5周对胫神经和腓总神经分别用快兰和核黄作神经干注射标记 ,取背根神经节 (DRG)荧光显微镜下观察被标记细胞 ;取吻合口附近的胫、腓神经段经锇酸染色后在光镜下观察腓总神经内轴突与胫神经轴突的关系。结果 :实验组背根节内未发现双标细胞。光镜下 ,可清晰地见到左侧腓总神经内的再生纤维从胫神经近侧端下行而至。结论 :周围神经端—侧吻合腓总神经内的再生纤维来自于胫神经的侧芽缺乏依据 ,因无法排除来自腓总神经近端生长锥和受损胫神经纤维生长锥的可能。

经上丘逆行标记法视网膜神经节细胞定量的实验研究

目的 建立一种视网膜神经节细胞 (RGCs)定性及定量的研究方法 ,并了解大鼠RGCs密度分布情况。方法 暴露大鼠双上丘后将饱含 3 0 %辣根过氧化物酶 (HRP)溶液的明胶海绵片贴附于双上丘表面 ,大鼠存活 2 4h后 ,取出视网膜行HRP组织化学反应 ,计算机图像分析系统对RGCs进行分类及计数。结果 左右眼RGCs密度分别为 14 66±3 76/mm2 及 14 5 7± 40 4/mm2 ,左眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 90± 3 71/mm2 及 14 4 2± 3 82 /mm2 ,右眼鼻、颞侧RGCs密度分别为 14 67± 410 /mm2 及 14 4 6± 40 0 /mm2 。结论 成功地建立了直接上丘HRP逆行标记RGCs定量计数法 ,正常大鼠双眼RGCs密度基本相同 ,颞侧及鼻侧RGCs密度基本相同。

大鼠外侧膝状体中继神经元HRP示踪结合谷氨酸免疫组织化学研究

采用 HRP逆行追踪结合谷氨酸免疫组织化学方法观察大鼠外侧膝状体背侧核 (d L GN)中继神经元的化学递质。光镜下 HRP标记细胞与谷氨酸免疫阳性细胞清晰可辩。HRP单标记细胞位于外侧膝状体背侧核内 ,胞浆及树突基部充满棕色颗粒。免疫金银法 (IGSS)单标记的谷氨酸免疫阳性神经元分布于外侧膝状体背侧核与腹侧核 ,胞体内充满黑色银颗粒。在外侧膝状体背侧核内可见 HRP和谷氨酸双标记细胞 ,其数目占 HRP标记细胞总数的 70 .9± 6 .4%。本文提示 ,谷氨酸可能是外侧膝状体背侧核投射至视皮质的中继神经元的神经递质之一。

猫外侧膝状体神经元HRP示踪结合生长抑素的免疫组织化学研究

本文采用 HRP逆行示踪的方法 ,在猫视皮质的 1 7区多点微量注射 30 % HRP,逆行标记外侧膝状体核(L GN)至视皮质的中继神经元 ,继用免疫金银法作生长抑素 (SS)免疫组织化学 ,试图双标记 L GN的中继神经元。结果显示 :光镜下 HRP标记细胞与 SS免疫阳性细胞清晰可辨 ,HRP标记细胞内为较粗的棕色颗粒 ,分布于胞浆和树突基部 ;而 SS免疫阳性细胞内的颗粒为银染黑色颗粒 ;HRP和 SS双标记神经元内 ,上述两种颗粒共存。猫 L GN的 A、 A1 和 C板层均有SS免疫阳性神经元的分布 ;HRP标记细胞分布于 A和 A1 板层 ;双标记神经元位于 A和 A1板层 ;C板层未见。本文结合以前的研究认为 ,SS在 L GN至视皮质传导通路中的作用 ,可能与视觉信息的传递和调制有关。

猫外侧膝状体神经元HRP示踪结合Calbindin的免疫组织化学研究

目的 HRP示踪结合Calbindin双标猫外侧膝状体核(LGN)至视皮质的中继神经元.方法 在猫视皮质的17区多点微量注射30%HRP,逆行标记LGN至视皮质的中继神经元,先以金标抗HRP-抗孵育切片,用免疫金银法将HRP颗粒转化黑色银颗粒.然后用ABC法作Calbindin(CB)的免疫组化,试图双标记LGN的中继神经元.结果 HRP标记细胞与CB免疫阳性细胞清晰可辨,HRP标记细胞内为银染黑色颗粒,而CB免疫阳性细胞为染色均匀的棕色.猫LGN的A、A_1和C板层均有CB免疫阳性神经元的分布;HRP标记细胞分布于A和A_1板层.LGN内未见HRP和CB的双标记神经元.结论 LGN内含CB神经元可能不参与视觉信息的传导,而是与局部视觉信息的整合有关.

大鼠异体神经移植后再生神经的荧光逆行标记

用Wistar大鼠作为实验模型,切除1cm坐骨神经,再用同系Wistar大鼠坐骨神经行异体桥接,修复坐骨神经的缺损.用Fluoro-Gold或Fast Blue两种荧光标记物,进行示踪检验,证实Wistar鼠异体神经桥接能修复周围神经的缺损.

局部皮质内注射海人酸对皮质和海马一氧化氮合酶阳性神经元的影响

本实验用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶组织化学方法结合ＧＦＡＰ免疫组化方法，对微量海人酸皮质内注射后的一氧化氮合酶阳性神经元和胶质细胞等的变化进行了研究．结果发现：注射区内的一氧化氮合欧阳性神经元很快消失；注射侧皮质和海马的旧阳性神经元和神经末梢溃变；至注射海人酸后８ｈ，这些变化波及到对侧皮质和海马．随着皮质内一氧化氮合酶阳性神经元的溃变，在注射侧皮质和海马内的一些神经元、星形胶质细胞出现新的一氧化氮合酶活性，这些新的酶活性可能是诱导型的一氧化氮合酶．这些结果表明：表达一氧化氮合酶的皮质和海马神经元对海人酸的毒性很敏感，神经细胞和非神经细胞中出现的诱导型的一氧化氮合酶可能是海人酸引起脑损伤时机体的适应性反应．

维拉帕米对缺血后大鼠视网膜NOS阳性神经元的影响

实验用 β- NADPH脱氢酶组织化学染色研究维拉帕米对缺血后大鼠视网膜 NOS阳性神经元的影响。结扎双侧颈总动脉使视网膜缺血 ,3小时后松结复流。分别于缺血前 15分钟和再灌流前 1分钟腹腔注射维拉帕米 (5 m g/kg/次 ) ,对照组腹腔注射等量生理盐水。动物存活 3天后取视网膜进行 β- NADPH组化反应。结果表明 :视网膜缺血后 NOS阳性神经元减少 ,并出现 i NOS阳性细胞。在缺血前后应用维拉帕米可使视网膜内 NOS神经元较对照组显著减少 (P<0 .0 1) ,NOS神经元形态良好。说明维拉帕米减少大鼠视网膜缺血后 NOS阳性神经元 ,其相应 NO量减少 ,推测维拉帕米对大鼠缺血后视网膜功能具有保护作用。

大鼠视皮质—外侧膝状体HRP示踪结合谷氨酸及GABA免疫组化研究

采用HRP逆行追踪观察了大鼠视皮质锥体细胞至外侧膝状体背核的投射,结合谷氨酸及GABA免疫组化方法探测了该类细胞的化学递质。光镜下HRP标记细胞与谷氨酸和GABA免疫阳性细胞清晰可辨。谷氨酸免疫阳性神经元主要分布在视皮质第Ⅱ～Ⅵ层。在第Ⅵ层可见HRP和谷氨酸双标记的锥体细胞,双标细胞的数量约占HRP标记细胞总数的42.7％。GABA免疫阳性神经元分布在皮质各层。但未见有GABA和HRP的双标记神经元。因而有充分理由推测:谷氨酸可能是视皮质投射至外侧膝状体背核的锥体细胞的神经递质之一。

胎儿视皮质皮质下层含─氧化氮合酶神经元的发育

本文用出生前１７周至３６周胎儿标本１０个，死后４小时内作常规灌注固定，取脑后作视皮质冰冻切片（３０ｕｍ），用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）组织化学法孵育切片２～４小时，在视皮质皮质下层（ＳＰ）可见ＮＯＳ强阳性神经元。这些神经元胞体大小不一、形态各异、突起显示呈高尔基染色外观，部分神经纤维含有膨体和生长锥。２０周以后，从ＳＰ层有ＮＯＳ阳性神经纤维伸入皮质板或白质。随着胎龄增长，ＮＯＳ阳性神经元密度增加，胞体切面积增大，神经元由幼稚趋向成熟。本研究还观察到胎儿ＳＰ内ＮＯＳ阳性神经元可从形态上明显地划分为两个阶段，并推测ＮＯＳ合成的一氧化氮（ＮＯ）在突触建立和修饰、突触间信息传递、传入纤维对靶器官的识别和脑组织局部血流调节等过程中起着重要作用。

人胎视网膜含NOS神经元的发育

本文用一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的组织化学方法对胎龄１５周至３６周的人胎视网膜含ＮＯＳ神经元的发育进行了研究。胚胎１５周视网膜颞侧半少部分神经元即有ＮＯＳ的表达，２０周视网膜含ＮＯＳ神经元数密度达峰值。大部分含ＮＯＳ神经元胞体位于内核层内带，只少部分位于节细胞层，其突起均分布于内同层，形成内同层的１、３、５亚层。含ＮＯＳ神经元的形态各异，依据其突起的多少分Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ等三种类型，其中Ⅱ、Ⅲ型含ＮＯＳ神经元在２８周以后才开始出现，且愈近晚期胎龄，它们所占含ＮＯＳ神经元的数量比呈上升趋势。随视网膜发育成熟，含ＮＯＳ神经元胞体均面积呈不断增大的变化。本文结果显示：人胎视网膜内核层含ＮＯＳ神经元为无长突细胞，节细胞层的Ⅰ型含ＮＯＳ神经元为移位无长突细胞，推测它们在视网膜的发育过程中对内网层突触的形成与修饰可能起有重要作用。

异体神经移植后再生神经的荧光逆行标记

本文用WISTAR大鼠作为实验模型,切除1cm坐骨神经,再用同系WISTAR大鼠坐骨神经行异体桥接,修复坐骨神经的缺损。用FLURO—GOLD(F.G)或FAST BLUE(F.B)两种荧光标记物,进行示踪检验,证实WISTAR鼠异体神经桥接能修复周围神经的缺损。

异体神经移植后再生神经的荧光逆行标记

本文用WI ST AR大鼠作为实验模型,切除1cm坐骨神经,再用同系WI ST AR大鼠坐骨神经行异体桥接,修复坐骨神经的缺损。用FLURO—GO LD(F、G)或FAST、BLUE(F、B)两种荧光标记物,进行示踪检验,证实WISTAR鼠异体神经桥接能修复周围神经的缺损。

大鼠顶叶内胎脑皮质移植物微循环重建的形态学研究

在７８只成年Ｗｉｓｔａｒ大鼠顶叶预制的脑腔内，植入妊娠１５ｄ胎鼠大脑皮质全层约１ｍｍ３的小块。移植后２４ｈ移植物与宿主脑之间已建立起血运关系，３ｄ后移植物内可见完整的毛细血管，３０ｄ后移植物内毛细血管呈网状；毛细血管内皮细胞间形成紧密连接，血管基膜连续而完整。结果表明：移植物与宿主脑之间成功地建立了微循环，移植物内的毛细血管具备血脑屏障的某些基本结构。

周围神经Waller变性时的信息传递方式

为了检测 Waller变性时损伤部远侧段的溃变过程是同时发生还是自切断处逐渐向远侧离心式传递 ,本实验切断大鼠坐骨神经 ,将整个远侧段分为连续的 A、B、C三段 ,A段为最靠近切断处的部位。用 c-fos免疫组化方法和 EA50 组化方法 ,比较了三段之间的形态变化和阳性细胞数。结果显示 ,神经切断后 2 d,A、B、C三段间 c-fos阳性细胞数量有显著差异。至第 5天 ,这种差别消失 ,各段间阳性细胞数量表达无显著差异。实验结果说明 ,周围神经切断后 ,信息传递是由近至远地发生 ,也说明 Waller变性是由近至远地发生。至于神经切断后 ,引起

人胎视皮质皮质下层NPY－IR神经元的发育

本文用免疫组化方法研究了１６周至足月人胎视皮质皮质下层ＮＰＹ－ＩＲ神经元的发育。各胎龄视皮质ＳＰ层内均有ＮＰＹ－ＩＲ神经元分布。从１６周至２６周，ＮＰＹ－ＩＲ神经元密度逐渐增高并于２６周达高峰；３２周以后阳性神经元密度随胎龄增长而下降。人胎视皮质ＳＰ层ＮＰＹ－ＩＲ神经元形态也随胎龄而变化；２０周以前，ＮＰＹ－ＩＲ神经元大多是胞体较小，突起短而少的未分化神经元、ＳＰ层内ＮＰＹ－ＩＲ纤维少。２０周以后，ＮＰＹ－ＩＲ神经元胞体增大，突起增多、变长；多极和双极、双簇神经元随胎龄增长而增多；ＳＰ层内的ＮＰＹ－ＩＲ纤维大量增加，部分纤维穿入皮质板。３２周以后，多极ＮＰＹ－ＩＲ神经元逐渐减少，双极双簇神经元所占比例相对增高。ＮＰＹ免疫组化结合ＮＡＤＰＨ－ｄ组化显示人胎视皮质ＳＰ层大多数ＮＰＹ－ＩＲ神经元同时呈ＮＯＳ阳性。本研究观察到人胎视皮质ＳＰ层内ＮＰＹ－ＩＲ神经元发育可分为发生、成熟和退化三个阶段。

急性人工高眼压对大鼠视网膜节细胞琥珀酸脱氢酶活性的影响

本实验向大鼠眼前房加压灌注生理盐水并维持使视网膜电图b波消失的临界眼内压90分钟。高压眼与对照眼视网膜铺片同时进行琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学反应。光镜下可见高压眼视网膜的节细胞SDH反应较对照眼的浅淡,且高压眼视网膜的视神经纤维较少显色.用图像分析仪对样本进行组织水平与节细胞水平的灰度值测定,显示在两个水平上高压眼视网膜的SDH活性都明显下降.本文就高眼压下节细胞SDH活性下降的原因进行了讨论.

Ca^(2+)与视网膜缺血损害

近年许多研究发现,组织细胞缺血时,存在严重Ca2+内流,大量Ca2+蓄积在神经组织内产生严重的毒性作用,诱发一系列病理生理反应,促发和加剧继发性神经元损害,是神经元死亡的“最后共同通路”[1-3]。本文就Ca2+在视网膜缺血损害中的作用及Ca2+阻滞剂的治疗意义作一综述。1 神...