医学检验形态学检验系列课程融合的教学改革和探索

以岗位胜任能力培养的教育模式已经成为21世纪普通高等教育人才培养的基本模式。医学检验普通高等教育主要是为医疗卫生单位培养从事检验工作技能型、应用型医疗卫生专业技术人才。医学检验专业基本岗位胜任能力包括两大模块,其一是常规检验技术操作能力,其二是形态学的辨认能力,随着现代医学的发展,医学检验技术的进步,常规的检验工作绝大部分都由自动化的仪器来完成,形态学检验的金标准是人眼显微镜下观察,是检验仪器无法替代的,因此敏锐的形态学辨认和诊断能力已成为医学检验专业的核心能力。为提高医学检验专业学生的形态学检验的岗位胜任能力，笔者对医学检验形态学检验系列课程进行融合，对教学方法和方式、实验考核体系进行改革，并且建立了形态学检验的课程网站，通过改革和探索取得了满意的教学效果。

混合式翻转课堂在《临床血液学检验》教学中应用与实践

《临床血液学检验》是医学检验专业的专业主干课程,教学任务是培养学生具备血液系统疾病的临床检验能力和素质。该课程内容繁多,理论和实践结合紧密,特别是血细胞形态内容复杂多变,传统课堂教学存在教学资源有限,教学形式单一、学生参与度不高,教学效果差的诸多问题。课程团队大力进行了在线课程、虚拟形态学资源和实验项目的建设,按照课程教学内容的特点在理论和实验教学中进行了线上线下、虚拟和现实相结合的混合式翻转课堂教学,以提高课程教学效果,培养医学检验专业学生细胞形态辨识和血液病的诊断等岗位胜任能力。

医学微生物实验室四种菌种保存方法的比较

目的:探索一种经济、方便、长期的常用微生物菌种的保存方法。方法:将21种细菌分别用半固体、甘油、脱脂牛奶、微孔珠进行保存及复苏鉴定,比较4种菌种保存方法的保存效果。结果:通过2年的实验证明用甘油、脱脂牛奶、微孔珠保存法保存时间长,且未发生形态结构、生物学特性的变异。结论:甘油、脱脂牛奶、微孔珠保存法操作简便易行,长期保存的存活率高,菌种的变异率低,适用于一般微生物学实验室菌种的保存工作。

临床医学实习生存在的心理健康问题及对策

目的了解临床医学实习生心理健康状况,为开展心理健康教育提供依据。方法采用症状自评量表(SCL-90)和自制的犯错和违纪情况表对我院2017年临床医学实习生98例(对照组)和2018年临床医学实习生102例(实验组)进行问卷调查,并对实验组实施干预。结果临床医学所有实习生SCL-90症状自测评分除了躯体化、精神疾病2个因子得分与全国医学生常模比较,差异无统计学意义(P>0.05)外,其他因子得分比较,差异有统计学意义(P<0.05);实验组焦虑、抑郁、强迫、恐怖、人际关系敏感与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),其余因子得分比较,差异无统计学意义(P>0.05);实验组的心理健康问题阳性检出率较对照组显著下降(χ2=4.046,P<0.05),犯错率也明显降低(χ2=5.356,P<0.05)。结论临床医学实习生心理健康问题不容忽视,必须加强实习前培训及带教老师素质培养,并随时开展心理健康教育或心理咨询。

高校预防医学实验教学改革中微课的应用

微课作为一种典型的泛在式网络学习资源形式,以其短而精的授课方式,受到越来越多的人喜爱和关注。同时,随着我国医学科技的进步和卫生体制的不断完善,预防医学在我国医学中的作用越来越明显,社会对兼备疾病和健康整体思维、防治结合的全科医学人才也迫切需要。作为预防医学的重要组成部分的预防医学实验教学的改进绝对不宜轻视,所以我们只有在实验教学过程中不断改革、探讨,提高实验教学效果,才能从根本上提高预防医学的整体教学质量。然而,预防医学与其他相关医学学科的脱节,教学方法落后、方式单调,学生学习的积极性和成绩难以提高,而微课改变了传统预防医学的学习模式,为预防医学的实验教学改革带来了新的契机。

概念图应用于医学生物化学的实证研究

以临床专业2个班60名学生为研究对象,分别采用常规教学与概念图进行教学。通过比较两种教学法教学结果的差异,分析学生对概念图态度的问卷调查,发现概念图在生物化学教学中的合理利用能有效推动学生对生物化学知识的建构,提高教学效果,促进学生自主学习及学习能力的提升。

六价铬激活mTOR蛋白诱导大鼠急性肾损伤

目的探讨哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在六价铬[Cr(Ⅵ)]所致大鼠急性肾损伤(AKI)中的作用。方法42只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(单次ip给予生理盐水)、不同剂量Cr(Ⅵ)处理组〔单次ip给予Cr(Ⅵ)5或10 mg·kg-1〕、雷帕霉素(Rap)干预组〔隔日1次(共4次)ip给予Rap 2 mg·kg-1,而后ip给予Cr(Ⅵ)5或10 mg·kg-1〕和NAC干预组〔连续3 d,每日1次ip NAC 300 mg·kg-1,而后ip给予Cr(Ⅵ)5或10 mg·kg-1〕。Cr(Ⅵ)处理48 h后,分别称取大鼠体质量和肾质量,计算肾系数;HE染色后,在显微镜下采用AutoCAD软件计算肾小管损伤面积百分比;ELISA法检测血清肌酐(Scr)和尿中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)水平;紫外分光光度法检测肾组织中谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平;Western印迹法检测肾组织中磷酸化mTOR(p-mTOR)、磷酸化p70核糖体蛋白S6激酶(p-p70S6K)和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,Cr(Ⅵ)10 mg·kg-1组大鼠肾质量和肾系数明显增加(P<0.05);Cr(VI)5和10 mg·kg-1组Scr、尿NGAL水平、肾小管损伤平均面积百分比和MDA含量明显升高(P<0.05),肾组织中p-mTOR、p-p70S6K和活化胱天蛋白酶3蛋白表达水平明显上调(P<0.05),GSH含量明显降低(P<0.05)。与同剂量Cr(Ⅵ)处理组相比,Rap或NAC干预组Scr、肾小管损伤面积百分比、肾组织p-mTOR、p-p70S6K和活化的胱天蛋白酶3表达水平均明显下调(P<0.05)。与NAC干预组比较,Rap干预组Scr、肾小管损伤平均面积百分比和活化的胱天蛋白酶3表达水平明显降低(P<0.05),而氧化应激标志物MDA水平无明显差异。结论Cr(Ⅵ)可诱导mTOR磷酸化激活导致AKI,mTOR抑制剂Rap可有效拮抗Cr(Ⅵ)引起的AKI。

Neu-P11在胰岛素抵抗脂肪细胞模型中对胰岛素受体后信号通路的影响

2型糖尿病为影响人类生存质量的主要病因之一,在过去十年里,2型糖尿病在全球范围的发病率显著增加[1]。其主要特征是胰岛素相对不足和存在胰岛素抵抗。2型糖尿病的胰岛素抵抗作用和人体肝脏、骨骼肌及脂肪组织中的胰岛素信号转导通路紊乱关系密切[2]。经典的胰岛素信号转导有胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate 1,IRS-1）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, PI3K）和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）两条途径,但主要是通过胰岛素受体后IRS-1/PI3K途径来调节其代谢.

重组腺病毒AdE-SH2-Caspase8对耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响

目的:研究表达融合蛋白SH2-Caspase 8的重组腺病毒Ad E-SH2-Caspase 8-HA-GFP(SC)对BCR/ABL阳性的耐伊马替尼的K562/G01细胞凋亡的影响。方法:K562/G01细胞经重组的腺病毒SC感染后,分别设突变Ad E-SH2m-Caspase 8-HA-GFP(Sm C)组、病毒空载Ad EGFP(CM V)组和PBS对照组。荧光显微镜和流式细胞仪(FCM)检测病毒感染效率,Western blot检测融合蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达水平,光学显微镜观察经瑞氏染色后的细胞形态,FCM和DNA梯度电泳检测细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Caspase3和PARP的表达水平。结果:重组腺病毒在K562/G01细胞中的感染效率较高;Western blot能检测到目的蛋白SH2-Caspase 8-HA的表达;与对照组比较,瑞氏染色后SC组出现明显的凋亡形态改变,FCM检测结果表明SC组早前凋亡细胞明显增高(P<0.05),DNA梯度电泳检测结果发现SC组出现明显细胞凋亡特异性的梯度条带,Western blot结果表明SC组凋亡相关蛋白Caspase 3、PARP活化片段的表达水平升高。结论:重组腺病毒SC表达的SH2-Caspase 8融合蛋白能明显诱导K562/G01细胞的凋亡。

儿童急性下呼吸道感染非典型病原体病原学分析

目的调查分析儿童急性下呼吸道感染非典型病原体的流行情况,为临床合理用药提供病原学依据。方法采集1 759例急性下呼吸道感染患儿的血清标本,采用间接免疫荧光法进行呼吸道九联检的检测,得出病原体分布情况,并对其结果进行分析。结果在1 759例儿童急性下呼吸道感染患者中,总阳性率为38.7%,其中检出率最高的是肺炎支原体,占19.6%,其次为嗜肺军团菌12.3%,呼吸道合胞病毒4.1%,未检出Q热立克次体和肺炎衣原体。共发现混合感染患者47例,混合感染率达6.9%。结论本地区儿童急性下呼吸道感染的非典型病原体以肺炎支原体和嗜肺军团菌较常见,亦存在其他病原体感染,不同地区的病原菌分布存在着一定的差异,在临床用药中应根据病原体的不同选择用药。

慢性粒细胞白血病急变基因机制的研究进展

目前,慢性粒细胞白血病（CML）的治疗方法有传统的放、化疗,异基因造血干细胞移植和通过分子设计合成的低分子拮抗剂甲磺酸伊马替尼为代表的直接抑制BCR/ABL酪氨酸激酶活性（TKI）的靶向治疗。传统的放、化疗疗效差且不良反应多,异体造血干细胞移植供者有限及受患者年龄等条件的影响,限制了临床开展和实施。

某市散装食用菜籽油砷、铅和镉污染状况调查分析

抽样调查了某市55个散装食用菜籽油样品的砷、铅和镉污染状况。结果发现:铅含量超标率为38.2%(21/55),其中加工作坊样品铅含量超标率高达48.0%(12/25),明显高于市场销售样品的30%(9/30);砷含量超标率为10.9%(6/55),其中塑料容器盛放样品砷含量超标率为18.8%(3/16),高于金属容器盛放样品的7.7%(3/39);镉检出率为41.8%(23/55),最高值为0.32 mg/kg,加工作坊样品镉含量高于市场销售样品,差异有统计学意义(P<0.05),普通碳素钢设备生产样品镉含量高于不锈钢设备生产样品,差异也有统计学意义(P<0.05)。

湘西民族地区中小学卫生保健服务现况及其对策

目的了解湘西民族地区中小学校卫生保健服务工作现况。方法调查湘西地区2个少数民族自治县和1个非少数民族自治县的中小学,内容包括保健教师配备、保健教师基本情况、医务室配置与装备、医疗工作与健康教育工作开展情况。结果共调查73所学校,98.6%的学校配有保健教师,但专职保健教师仅占30.6%,农村学校为16.7%,低于县城学校的61.9%(P<0.05)。69.9%的学校配有医务室,但地处农村学校的比例只有57.7%,低于县城学校的88.6%(P<0.01);民族地区学校(56.2%)低于非民族地区学校(96.0%)(P<0.01)。90.2%的学校医务室能开展业务工作,但28.3%的学校医务室仅提供常用药服务。93.2%的学校开展健康教育工作,健康教育形式主要为课堂讲授。农村学校学生体检频率低于县城学校(P<0.05)。有17所学校没有业务费,仅有2所学校的业务费来自财政拨款。结论应强化民族地区和农村中小学医务室和卫生保健教师队伍的建设,提高其卫生保健服务能力。

结核分枝杆菌诱导的人肺泡巨噬细胞对IFN-γ反应性的改变及机制研究

目的:研究结核分枝杆菌诱导的人肺泡巨噬细胞对IFN-γ反应性的改变及其机制。方法:平板计数法评价人肺泡巨噬细胞杀结核菌效应;RT-PCR检测Lc3BmRNA的表达水平;ELISA测定TNF-α浓度;Griess法测定NO的含量。结果:结核患者肺泡巨噬细胞对IFN-γ的反应性明显降低,在IFN-γ刺激后,其NO、TNF-α和Lc3B的水平均低于健康对照。用结核分枝杆菌分泌的蛋白成分(TB-PPD和ESAT-6)诱导后,人肺泡巨噬细胞对IFN-γ的反应性无明显改变。但用结核分枝杆菌细胞壁上的TLR2和NOD2配体(HKMT和MDP)诱导后,人肺泡巨噬细胞对IFN-γ的反应性降低。结论:结核分枝杆菌可能通过细胞壁上的TLR2和NOD2配体而非分泌的蛋白参与了其诱导的人巨噬细胞对IFN-γ反应性的降低。

茯苓多糖抑制甲醛诱导小鼠血清DNA加合物的实验研究

目的:观察茯苓多糖灌胃对甲醛诱导小鼠体内DNA加合物含量的影响,探讨茯苓多糖的抗遗传毒性效应。方法:40只成年昆明种雄性小鼠随机分成阳性对照组(甲醛染毒)、茯苓多糖低剂量组、中剂量组和高剂量组,每组10只。阳性对照组灌注0. 4 ml浓度为0. 5 g/L的甲醛溶液,茯苓多糖组小鼠除了灌胃0. 2 ml浓度为1. 0 g/L的甲醛溶液外,还灌胃0. 2 ml不同浓度的茯苓多糖溶液(低剂量组2. 0 g/L,中剂量组4. 0 g/L和高剂量组8. 0 g/L)。1周后摘眼球取血,用ELISA法测定各组小鼠血清DNA加合物含量。结果:4组间DNA加合物浓度差异有统计学意义(P<0. 01),茯苓多糖中剂量组和高剂量组DNA加合物浓度均低于阳性对照组(P<0. 01)。茯苓多糖剂量越高,DNA加合物浓度越低,呈现明显的剂量-效应关系(rs=-0. 869,P<0. 01)。结论:茯苓多糖小鼠灌胃可抑制DNA加合物的形成,且存在剂量-效应关系,作用随茯苓多糖剂量的提高而增强。

HPV感染对宫颈免疫微环境的影响

目的比较高危型和低危型人乳头瘤病毒(HPV)感染后宫颈局部细胞因子和阴道微生态指标变化情况,分析不同HPV感染对宫颈局部免疫微环境的影响。方法收集2017年3月~2018年7月在湖南医药学院第一附属医院门诊就诊的妇女宫颈和阴道分泌物标本,用PCR-反向点杂交法检测HPV,根据检测结果将155例标本分为高危型HPV组(55例)、低危型HPV组(40例)和未感染HPV的对照组(60例),用酶联免疫吸附试验测定宫颈细胞保存液中的γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(IL-4)和IL-21含量,并按全国临床检验操作规程做真菌、阴道滴虫、线索细胞、清洁度和pH检查。结果与对照组和低危型HPV组比较,高危型HPV组的IFN-γ和IL-21含量均显著降低(P<0.01),但IL-4含量显著升高(P<0.01);与对照组比较,低危型HPV组的IFN-γ含量显著降低(P<0.01),但IL-4和IL-21含量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。经相关性分析,高危型HPV组、低危型HPV组和对照组的IL-21与IFN-γ含量均呈正相关(r=0.74,P<0.01;r=0.70,P<0.01;r=0.66,P<0.01),高危型和低危型HPV组的IL-4与IFN-γ含量均呈负相关(r=-0.33,P<0.05;r=-0.44,P<0.01);高危型HPV组的IL-21与IL-4含量呈负相关(r=-0.30,P<0.05)。此外,三组间真菌、阴道滴虫、线索细胞、清洁度和pH等微生态指标的比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论高危型HPV比低危型HPV感染后更易引起宫颈局部IL-4和IFN-γ的表达异常,可能与具有免疫促进作用的IL-21低表达有关。因此,维持宫颈局部正常免疫微环境、恢复机体的免疫调节功能对机体清除HPV、阻断HPV的持续感染非常重要。

何首乌提取物减轻大鼠脑缺血再灌注损伤和上调脑内UCP4蛋白水平

目的研究何首乌提取物对脑缺血再灌注损伤UCP4的影响,初步探讨其可能的作用机制。方法健康雄性SD大鼠采用线栓法复制局灶性脑缺血(MCAO)再灌注损伤模型,缺血2h后再灌注6h或24h,部分缺血再灌注模型大鼠分别灌胃不同浓度何首乌口服液。免疫组织化学染色和Western blot检测脑内UCP4表达,TTC染色检测脑梗死面积。结果在脑缺血再灌注6h后损伤,UCP4蛋白在海马内表达增高,再灌注24h后表达降低;何首乌提取物能浓度依赖性减少脑缺血再灌注损伤的脑梗死面积和上调UCP4表达。结论何首乌提取物能明显改善大鼠脑缺血再灌注损伤,其机制可能与脑内线粒体蛋白UCP4表达升高,保护神经元有关。

特发性肺纤维化小鼠肺内IL-11及其受体表达

目的:观察肺纤维化小鼠肺组织白细胞介素-11(interleukin-11,IL-11)及其受体的表达。方法:以C57BL/6小鼠为研究对象,随机分为对照组和博莱霉素(bleomycin,BLM)组(每组6只),BLM组采用一次性气管注射BLM复制特发性肺纤维化小鼠模型,对照组注射50μL PBS。21 d后取小鼠肺组织。采用HE染色观察小鼠肺组织形态改变,realtime PCR法检测小鼠肺组织IL-11及其受体的基因表达,Western印迹法和免疫组织化学染色检测小鼠肺组织IL-11受体表达,ELISA法检测小鼠血清IL-11的含量。在细胞实验中,分别采用real-time PCR和Western印迹法检测转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)处理后小鼠成纤维细胞中IL-11受体的基因和蛋白表达。结果:HE染色结果显示BLM注射21 d后小鼠肺组织纤维化改变明显,肺组织IL-11 mRNA表达和血清IL-11含量上调(P<0.05);肺纤维化小鼠肺内IL-11受体的基因和蛋白表达均明显上调(P<0.05)。细胞实验结果表明TGF-β1可明显升高小鼠成纤维细胞IL-11受体的基因和蛋白表达(P<0.05)。结论:肺纤维化小鼠肺内IL-11及其受体表达上调,可能是肺纤维化发生发展的重要机制之一。

下调ALK2对人乳腺癌MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响

目的:通过表达siALK2的重组腺病毒Ad-siALK2,下调人乳腺癌MDA-MB-468细胞ALK2的表达,研究其对MDA-MB-468细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法:以重组腺病毒Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞为实验组,空载病毒(RFP)作为感染对照,并设空白对照组,通过倒置荧光显微镜观察和RT-PCR检测病毒在MDA-MB-468细胞中的表达水平,通过MTT、平板集落形成、细胞划痕和Transwell侵袭实验检测细胞的增殖、集落形成、迁移及侵袭能力。结果:倒置荧光显微镜观察显示Ad-siALK2感染MDA-MB-468细胞的荧光效率高;RT-PCR证实Ad-siALK2感染的MDA-MB-468细胞ALK2的mRNA表达显著下降;MTT法、平板集落形成实验、细胞划痕实验及Transwell侵袭实验证实MDA-MB-468细胞Ad-siALK2组相比对照组细胞的增殖活力、集落形成率及划痕愈合率均显著降低(P<0.05),穿膜细胞数也明显减少(P<0.05)。结论:下调ALK2表达后可以在体外抑制人乳腺癌MDA-MB-468细胞的增殖、迁移与侵袭,为后续实验研究奠定了基础。

敲低lncRNA SNHG16对胃癌细胞凋亡的影响及其机制

目的探讨敲低长链非编码RNA(lncRNA)核内小RNA宿主基因16(SNHG16)对胃癌细胞凋亡的影响及其机制。方法取人胃癌高分化细胞株AGS(以下称AGS细胞),体外传代培养。取传3代、对数生长期、生长状态良好的AGS细胞,随机分为空白对照组、阴性对照组、si-SNHG16组。si-SNHG16组、阴性对照组分别转染si-SNHG16干扰序列、阴性对照序列,空白对照组不予转染。转染48 h,收集各组细胞,采用qRT-PCR法验证si-SNHG16干扰效率以及敲低lncRNA SNHG16后p53基因表达;采用Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术、Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡情况;采用Western blotting法检测p53、Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达;采用酶标仪检测Caspase-3酶活性。结果与空白对照组、阴性对照组比较,si-SNHG16组转染48 h lncRNA SNHG16相对表达量明显降低、p53基因相对表达量明显升高,细胞凋亡率和细胞凋亡数均明显增加,p53蛋白及凋亡相关蛋白Bax、Cleaved Caspase-3表达均明显上调,而Bcl-2表达明显下调,且Caspase-3酶活性明显增加(P均<0.05)。阴性对照组与空白对照组上述指标比较P均>0.05。结论敲低lncRNA SNHG16可促进胃癌细胞凋亡,其机制可能与激活p53信号通路下游凋亡相关蛋白表达,继而启动细胞凋亡程序有关。