多重PCR快速检测恶性疟和间日疟的研究

目的建立一种简便快速、能同时检测恶性疟和间日疟的核酸检测方法。方法针对两种疟原虫18SrRNA基因设计2对(3条引物),优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重PCR。并进行最低检测限确定和临床标本检测,以镜检法为金标准分析灵敏度和特异度等指标。结果该方法可扩增出431bp(恶性疟原虫)和341bp(间日疟原虫)基因片段,最低检测限为102copies/反应,检测临床标本的结果与镜检法无差别(P>0.05),敏感度为93.55%,特异度为70.83%,阳性预测值为89.23%,阴性预测值为80.95%。结论所建立的多重PCR方法可快速检测疟疾感染并鉴别分型,灵敏度高,值得推广。

多重巢式PCR检测恶性疟和间日疟原虫

目的建立鉴别诊断恶性疟原虫(P.f)和间日疟原虫(P.v)的多重巢式PCR法。方法针对P.f、P.v 18S rRNA基因设计外引物和内引物,优化引物浓度与退火温度,建立可扩增出两种疟原虫基因片段的多重巢式PCR,并检测54例疑似疟疾临床标本,以镜检法为金标准评价敏感性和特异性等指标。结果该方法可扩增出162 bp(P.f)和112 bp(P.v)基因片段,并能检出混合感染。该方法检测P.f,敏感性为87.50%、特异性为63.33%;检测P.v,敏感性为69.23%、特异性为68.29%。结论所建立的多重巢式PCR方法能可靠诊断疟疾并鉴别虫种,敏感性高,在混合感染的诊断方面具有优越性。

快速检测人新甲型H1N1、季节性和乙型流感病毒多重PCR方法的建立

目的建立一种可以同时检测人类新甲型H1N1、季节性H1N1和H3N2亚型流感病毒及乙型流感病毒的多重PCR方法。方法根据以上4种流感病毒的特异性基因设计4对引物,建立可同时扩增出4个流感病毒特异性片段的多重PCR的方法。用人的GAPDH基因作为内参判断标本来源和实施质量控制的依据。并进行敏感性、特异性和盲样检测评价实验。结果该方法可同时扩增出流感病毒亚型的HA基因片段长度分别为106 bp(新甲型H1N1)、135 bp(季节性H1N1)、118 bp(季节性H3N2)、170 bp(乙型流感病毒)。该实验检测新甲型H1N1(A/colifornia/07/2009)的敏感性为102copies/反应。特异性实验结果显示每对引物只检测对应的病毒,32份盲样检测结果特异性好。结论该多重PCR方法可同时检测新甲型H1N1及季节性流感病毒,敏感性、特异性强,可用于人类流感病毒的鉴别分型检测。