危重脑炎脑膜炎患儿的临床诊断与病原学检测分析

目的对脑炎脑膜炎病例进行临床诊断与实验室检测,在病原学上为临床治疗提供直接依据。方法对入院患儿进行血常规、尿常规、生化及血凝检查,采集患儿脑脊液、血液及咽拭子标本,进行脑膜炎奈瑟菌、B型流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、猪链球菌、大肠杆菌等分离培养;ELISA法检测麻疹病毒、风疹病毒IgM抗体;设计特异性引物RT-PCR法检测肠道病毒、乙脑病毒、水痘-带状疱疹病毒、单纯疱疹病毒、腮腺炎病毒,对核酸检测阳性的病原体进行基因测序、Blast比对及应用Mega 5.0构建分子进化树;根据病原体的种类及基因型别,有针对性地选择药物进行临床救治。结果脑炎脑膜炎患儿脑脊液、血液及咽拭子标本细菌培养均为阴性;咽拭子标本腮腺炎病毒PCR核酸检测阳性,琼脂糖凝胶电泳产物大小约300 bp;阳性产物测序结果与腮腺炎病毒疫苗株比较,存在部分核苷酸变异,关键的抗原位点没有发生变化;所测基因序列经分子进化分析确定为腮腺炎病毒基因F型,与目前中国流行毒株基因型别一致,患儿经对症治疗已康复出院。结论细菌学和病毒学实验室筛查,对引起脑炎脑膜炎的常见病原体具有积极的作用,早期病毒核酸测序能确诊腮腺炎病毒感染类别及基因型别。

rpoB基因突变与结核分枝杆菌利福平耐药相关性研究

目的探讨临床患者痰标本中分离的结核分枝杆菌rpoB基因突变与利福平耐药之间的关系。方法对115株结核分枝杆菌应用L-J药敏培养法,检测对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氧氟沙星的耐药情况;根据rpoB基因序列设计包含利福平耐药决定区(RRDR)的扩增引物,PCR法进行扩增,运用生物信息学方法对耐药决定区扩增产物序列进行比对分析,对耐药株与非耐药株基因突变率进行统计学分析。结果 115株结核分枝杆菌经比例法药敏试验,RIF耐药株53株,占所有菌株的46.09%;53株RIF耐药株中39株rpoB基因存在不同位点的变异,突变率为73.58%,突变位点包括531、526、522、516、513、511,最主要的突变位点集中在531位,引起氨基酸呈Ser531Gln、Ser531Leu、Ser531Trp 3种形式改变;RIF敏感株62株,其中有2株检测到rpoB基因的突变,敏感株与耐药株突变率经McNemar统计检验,差异有统计学意义(P<0.05)。结论岳阳地区rpoB基因变异与利福平耐药呈高度相关,rpoB基因最主要的突变位点位于531位和526位。