细胞周期蛋白在肝细胞癌组织中的表达及其与肿瘤细胞凋亡的关系

背景与目的:细胞周期蛋白(Cyclins)在许多肿瘤中过度表达,但其在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)的表达情况及与细胞增殖和凋亡的关系研究甚少,本研究旨在通过检测原发性HCC中细胞周期蛋白、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达和细胞凋亡的情形,探讨它们之间的相互关系。方法:应用组织芯片技术,采用SP免疫组织化学方法检测122例HCC组织中CyclinsA、B1、D1、E和PCNA表达,应用原位脱氧核糖核酸末端转移酶(in situterminal deoxyribonucleotide transferase,ISTdT)标记技术检测细胞凋亡的情况。结果:122例HCC组织中,CyclinA的阳性率为50.0%,CyclinB1为47.5%,CyclinD1为42.6%,CyclinE为35.2%;组织学分级为Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的HCC组织Cyclins表达高于Ⅰ级(P﹤0.05);HCC组织中组织学分级为Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的凋亡细胞密度均低于Ⅰ级(P﹤0.05),分化愈差,凋亡细胞密度愈低;HCC组织中组织学分级为Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的PCNA评分高于Ⅰ级(P﹤0.01),分化愈差,PCNA评分愈高;HCC组织中Cyclins蛋白表达与凋亡细胞密度呈负相关(r=-0.686,P<0.01),与PCNA评分呈正相关(r=0.599,P<0.01),HCC组织中凋亡细胞密度与PCNA评分呈负相关(r=-0.701,P<0.01)。

肝细胞肝癌组织中survivin和caspase 3、Ki67的表达及意义

目的研究survivin和caspase3、Ki67在肝细胞肝癌(HCC)及癌旁肝组织中的表达及其意义。方法利用RNA提取试剂获取新鲜肝癌组织RNA,用RT-PCR方法测定survivin基因mRNA;用免疫组化方法检测肝细胞肝癌及其癌旁组织中caspase3和Ki67蛋白的表达。结果17例新鲜HCC组织,survivin基因表达阳性13例,阳性率为76.5%,癌旁肝组织和正常肝组织survivin表达全为阴性。13例survivin表达阳性的肝癌组织其caspase3蛋白表达平均染色强度为0.98±0.35.显著低于4例survivin表达阴性的HCC组织1.36±0.47(P<0.01),而survivin表达阳性的HCC组织其Ki67表达强度平均评分为2.787±0.71,又显著高于survivin表达阴性的HCC组织1.662±0.38(P<0.01)。88例肝癌组织caspase3蛋白的阳性表达率明显低于癌旁肝组织(18.5%vs38.6%,P%0.01),caspase3蛋白的表达强度与HCC的分化程度相关,分化愈差,caspase3蛋白表达愈弱(F=8.651,P<0.01);Ki67在肝癌组织中其平均表达强度评分为2.44±1.12,在癌旁肝组织中为散在灶性表达,Ki67表达强度评分与HCC分化程度有关,分化愈差,Ki67表达强度评分愈高(F=9.121,P<0.01)。结论本文结果提示在HCC发生过程中survivin的表达或许可通过抑制caspase3而抑制细胞凋亡,促使细胞增殖,使HCC呈现无限制的生长及恶性程度不断增高。

肝癌组织HSP70和caspase 3的表达意义

目的:研究热休克蛋白70和caspase 3在肝细胞癌及癌旁肝组织中的表达及其临床意义. 方法:利用免疫组织化学检测70例肝细胞癌及其癌旁肝组织中HSP70和caspase 3蛋白的表达. 结果:HCC中HSP70的阳性率和阳性强度明显高于癌旁肝组织(68.6%VS 31.4%,P<0.01),而caspase3蛋白的阳性率和阳性强度明显低于癌旁肝组织(17.1%vs 35.7%,P<0.01). 在HCC中HSP70和caspase3蛋白的表达强度与HCC的分化程度和肿瘤的大小明显相关,分化愈差和肿瘤愈大HSP70表达愈强(分别为:F=5.219和5.421,P均<0.01)而caspase3蛋白表达愈弱(分别为F=5.944和4.571,P均<0.01). 统计学分析显示在HCC及其癌旁肝组织中HSP70和caspase 3蛋白的表达呈明显负相关(分别为:r=0.4126和-0.5237,P均<0.01). 结论:本文结果提示在HCC发生过程中HSP70的表达可能通过促进细胞的转化和增生及抑制细胞的凋亡,使HCC呈现无限制的生长及恶性程度不断增高;检测HSP70有望能成为判断HCC预后的重要指标之一.

肝细胞癌中HBx蛋白与p21蛋白表达的关系及其意义

[目的]研究HBx蛋白对细胞周期的影响及其在肝细胞癌发生中的作用。[方法]采用SP免疫组化方法分别检测HCC组织中HBx蛋白和p21蛋白表达及PCNA。[结果]HCC组织中HBx蛋白的阳性率为52.5%(21/40),阳性信号多呈核型,阳性细胞多呈区域性或簇状分布;p21蛋白阳性表达随HBx蛋白表达的增强而下降;HCC组织中HBx蛋白表达阳性病例PCNA评分高于阴性病例,p21蛋白表达的阳性病例PCNA评分低于阴性病例。[结论]在HCC的发生过程中,HBx蛋白可影响p21蛋白的表达,推进细胞周期,导致细胞增殖和促进肝细胞的恶性转化。

60例喉乳头状瘤人类乳头状瘤病毒感染分析

[目的]研究人类乳头状瘤病毒感染与喉乳头状瘤发生的关系。[方法]利用免疫组织化学、原位分子杂交及PCR检测60例喉乳头状瘤、15例喉鳞状非典型增生上皮和10例正常喉黏膜上皮中人类乳头状瘤病毒(HPV)16/18E6蛋白的表达。[结果]免疫组化显示在正常喉黏膜、非典型增生上皮及喉乳头状瘤组织中HPV16/18E6蛋白的阳性率分别为10.0%(1/10)、33.3%(5/15)和80.0%(48/60);瘤组织中HPV16/18E6蛋白的阳性率明显高于非典型增生上皮和正常喉黏膜(P<0.05),非典型增生上皮中HPV16/18E6蛋白的阳性率亦明显高于正常喉黏膜(P<0.05)。原位杂交显示在正常喉黏膜、非典型增生上皮及喉乳头状瘤组织中HPV16/18E6DNA的阳性率分别为10.0%(1/10)、40.0%(6/15)和83.3%(50/60);瘤组织中HPV16/18E6DNA的阳性率明显高于非典型增生上皮和正常喉黏膜(P<0.05),非典型增生上皮中HPV16/18E6DNA的阳性率亦明显高于正常喉黏膜(P<0.05)。PCR显示在正常喉黏膜、非典型增生上皮及喉乳头状瘤组织中HPV16的阳性率分别为10.0%(1/10)、46.7%(7/15)和86.7%(52/60);瘤组织中HPV16的阳性率明显高于非典型增生上皮和正常喉黏膜(P<0.05),非典型增生上皮中HPV16的阳性率亦明显高于正常喉黏膜(P<0.05)。[结论]高危型HPV16/18型感染可能在喉乳头状瘤的发生中起重要作用。

HBx蛋白和p53蛋白对细胞凋亡的调节及其在肝细胞癌发生中的作用

目的 :研究HBx蛋白对细胞凋亡的调节及其在肝细胞癌发生中的作用。方法 :采用SP免疫组化方法和原位脱氧核糖核酸末端转移酶标记技术分别检测HCC组织中HBx和p5 3蛋白表达及细胞凋亡。结果 :HCC和癌旁组织中的HBx蛋白的阳性率分别为 5 2 5 % (2 1 4 0 )和 6 7 5 % (2 7 4 0 ) ,在HCC中阳性信号多为呈核型 ,癌旁组织中以核浆型为主 ,阳性细胞多呈区域性或簇状分布 ;HCC中p5 3和HBx蛋白的表达具有较高的一致性 (P <0 0 1) ;p5 3和HBx表达强度均与凋亡细胞相关 ,其表达增强则凋亡细胞密度逐渐降低 (P <0 0 1)。结论 :提示HBx蛋白可能通过抑制p5 3的功能阻止细胞凋亡和促进细胞增殖 。

非小细胞肺癌中Abi1的表达及其与预后的关系

目的:探讨Abi1在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中表达的临床意义及其与肺癌转移和预后的关系。方法:采用RT-PCR检测41例肺癌及其对应癌旁组织Abi1 mRNA的表达;免疫组织化学检测112例人NSCLC石蜡切片中的表达,采用x^2检验检测其与临床病理学特征的关系,Log-rank检验Abi1表达与生存时间的关系,Cox模型作单因素和多因素预后分析。结果:41例肺癌中Abi1 mRNA的表达较癌旁肺组织高,光密度比值分别为1.9±1.0和1.0±0.6,差异有显著性;肺癌Abi1 mRNA的过表达与肺癌的分期、血管浸润、淋巴结转移有关。免疫组织化学染色证实Abi1主要表达在癌细胞胞质,Abi1阳性表达患者生存率明显低于阴性组。结论:Abi1与肺癌的侵袭转移关系密切并有可能成为新的预后指标。

紫花牡荆素对SKOV3卵巢癌干细胞样细胞FoxO3a磷酸化的影响

背景与目的:肿瘤干细胞的存在是卵巢癌高复发率和高死亡率的原因。本文研究紫花牡荆素(casticin,CAS)对SKOV3细胞系卵巢癌干细胞样细胞(ovarian cancer stem cell like cells,OCSLCs)自我更新能力的影响及其机制。方法:体外培养SKOV3细胞系细胞,干细胞培养基悬浮培养SKOV3得到和扩增卵巢癌球形成细胞,即OCSLCs。蛋白[质]印迹法(Western blot)分析FoxO3a磷酸化水平。FoxO3a特异性si RNA转染抑制FoxO3a蛋白表达,并测定肿瘤球形成率。结果:与亲本细胞相比,OCSLCs高表达磷酸化FoxO3a蛋白,具有更高的肿瘤球形成率[(3.1±0.3)%vs(34.8±6.8)%,P<0.05]。CAS显著抑制OCSLCs肿瘤球形成能力,并降低FoxO3a磷酸化水平。FoxO3a特异性si RNA转染抑制FoxO3a蛋白表达,拮抗CAS抑制OCSLCs肿瘤球形成作用。结论:降低FoxO3a磷酸化水平参与CAS抑制SKOV3细胞系OCSLCs肿瘤球形成作用。

沉默叉头盒O类转录因子-3a对卵巢癌SKOV3细胞系肿瘤球形成能力的影响

目的 探讨沉默叉头盒O类转录因子-3a（FoxO3a）活性是否影响人卵巢癌SKOV3细胞系肿瘤球形成能力.方法 干细胞条件培养基悬浮培养法得到SKOV3细胞系球形成细胞.FoxO3a特异性siRNA转染SKOV3细胞,Western blot分析FoxO3a磷酸化水平和Bmi1蛋白表达,肿瘤球形成法检测肿瘤球形成率.结果 与亲本细胞相比,SKOV3细胞系球形成细胞具有更高肿瘤球形成率并高表达磷酸化FoxO3a和Bmi1蛋白.FoxO3a特异性siRNA转染抑制FoxO3a蛋白表达,并上调Bmi1蛋白表达,增强肿瘤球形成能力.结论 沉默FoxO3a导致SKOV3细胞系肿瘤球形成能力增强.