草鱼重组瘦蛋白的制备及其对JAK2-STAT3信号通路的作用研究

瘦素(leptin)是主要由脂肪细胞分泌的蛋白质,具有调节机体食物摄入和能量代谢的功能。为了获得具有生物活性的瘦蛋白,本研究采用PCR技术从草鱼脑垂体中扩增出瘦素的cDNA开放阅读框(open reading frame,ORF)序列,用于构建pGEX4T-1-CiLEP重组质粒(带GST标签),并将重组质粒在大肠杆菌BL21中进行原核表达。经SDS-PAGE和Western-blot检测证实,在47 kD处有与预期相对分子质量相符的融合重组瘦蛋白(即含GST标签的草鱼重组瘦蛋白)。体内注射试验结果表明,与注射GST标签蛋白相比,纯化后的融合重组瘦蛋白的注射对草鱼脑垂体和肠道的瘦素受体基因及JAK2-STAT3信号通路相关基因的表达有上调作用。以上结果为进一步研究草鱼重组瘦蛋白对JAK2-STAT3信号通路相关基因表达的影响和深入了解草鱼瘦素基因的功能及其调控机制奠定了基础。