土牛膝总皂苷的提取、成分鉴定及抗炎活性研究

目的对土牛膝总皂苷进行体内外抗炎活性与分离鉴定研究,为其治疗炎症提供实验依据。方法采用十八烷基硅烷键合硅胶-AQ柱色谱法(ODS-AQ)纯化制备土牛膝总皂苷;建立氨水诱导的急性咽炎大鼠模型,灌胃给药评价粗毛牛膝提取物及总皂苷抗炎活性;采用柱层析、核磁共振谱、质谱等技术对土牛膝总皂苷中的主要化合物进行分离、纯化和结构鉴定;建立脂多糖诱导的巨噬细胞炎症模型,评价各皂苷单体化合物的抗炎活性。结果制备的粗毛牛膝总皂苷含量达到81.8%;在急性咽炎大鼠模型中,粗毛牛膝总皂苷及水煎液具有良好抗炎疗效,能显著降低血清IL-6、IL-1β、TNF-α细胞因子水平;总皂苷中鉴定出6个齐墩果烷型三萜皂苷,分别为竹节参皂苷Ⅳa(1)、竹节参皂苷Ⅳa丁酯(2)、金盏花皂苷E(3)、金盏花皂苷E丁酯(4)、竹节参皂苷I(5)、竹节参皂苷Ⅴ(6);体外炎症模型表明,分离得到的三萜皂苷类单体化合物均有不同程度的抗炎作用。结论首次系统证明了皂苷类成分是粗毛牛膝发挥抗炎活性的药效物质基础;从牛膝属植物中首次分离得到化合物2和4,并证实其具有抗炎作用。

药用植物异黄酮类化学成分及其药理作用的研究进展

异黄酮类化合物的基本母核为3-苯基色原酮,具有良好的药理作用。对2013—2022年国内外报道的新异黄酮类化合物的化学结构进行综述;归纳其氢谱核磁共振及碳谱核磁共振数据的特点,对其δH-2位进行了重新归属;并对其抗肿瘤、抗氧化、抑菌等方面的药理作用进行总结,以期为异黄酮类化合物的开发应用提供理论参考。

土牛膝的不同种质来源的差异性比较研究

目的从植物形态学、药材性状特征、薄层色谱、有效成分含量、指纹图谱等方面对3种不同种质来源的土牛膝的差异性进行比较,为土牛膝质量标准提升及合理应用提供科学依据。方法在植物分类学鉴定的基础上,对采集的样本进行植物形态学观察;采用传统药材性状鉴别方法对药材性状特征进行比较;通过TLC法比较不同药材粉末薄层色谱图;采用HPLC法测定药材中β-蜕皮甾酮的含量;通过指纹图谱比较不同来源土牛膝药材相似度差异。结果3种不同种质来源土牛膝的植物形态、药材性状特征、薄层色谱图均存在一定差别;土牛膝指纹图谱标定了11个共有峰,不同来源土牛膝药材中β-蜕皮甾酮含量及指纹图谱存在显著差异。结论3种不同种质来源土牛膝在植物形态学、药材性状特征、薄层色谱、有效成分含量及指纹图谱方面均存在较大差异,应加以甄别利用。

基于网络药理学及实验验证探讨喉咽清治疗咽炎的作用机制

目的运用网络药理学并结合动物实验探究喉咽清治疗咽炎的物质基础及作用机制。方法通过中药系统药理学分析平台(TCMSP)数据库检索喉咽清的化学成分,并通过文献检索补充潜在活性成分,再经TCMSP及Swiss Target Prediction数据库预测成分作用靶点,建立靶点数据;通过Gene Cards数据库筛选出抗炎相关靶点;用Cytoscape 3.9.0软件构建“化合物-靶点(基因)”网络可视化关系图;采用STRING数据库对靶点进行蛋白质-蛋白质相互作用(PPI)网络分析,使用Cytoscape 3.9.0软件中的Cyto NCA插件对STRING数据库导出的PPI网络进行degree值算法分析,将degree值排名前30的网络靶点作为喉咽清的抗炎核心靶点,并构建“核心靶点-活性成分”网络图;通过DAVID分析平台进行基因本体(GO)分析和基于京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,探讨喉咽清抗炎的潜在生物过程及其通路;利用Autodock软件进行半柔性分子对接反向验证。在动物实验中,以15%的浓氨水诱导咽炎大鼠模型,经喉咽清灌胃处理后,ELISA法检测大鼠血清一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素1-beta(IL-1β)的表达,HE染色观察大鼠咽部组织病理学变化。结果从喉咽清中共筛选得到65个活性成分,关键靶点涉及PTGS2、AKT1、MAPK3、STAT3、IL-6、TNF、NFKBIA等。KEGG通路富集结果显示喉咽清主要作用于Pathways in cancer、Hepatitis B、TNF signaling pathway等信号通路。分子对接结果显示β-蜕皮甾酮、齐墩果酸、山奈酚、竹节参皂苷IVa等核心化合物与关键靶点同时满足空间匹配与能量匹配。动物实验表明,与正常对照组相比,模型对照组大鼠咽部炎性改变明显,血清IL-6、IL-1β水平升高;与模型组相比,地塞米松5 mg·kg^(-1)组、喉咽清1.34 g·kg^(-1)、2.67 g·kg^(-1)组大鼠咽部炎症减轻,地塞米松5 mg·kg^(-1)组、喉咽清1.34 g·kg^(-1)、2.67 g·kg^(-1)组血清IL-6含有量降低(P<0.05)。结论喉咽清可能是通过调控肿瘤合成途径、乙型肝炎、肿瘤坏死因子等信号通路,对细胞代谢的多个过程产生影响,抑制炎症因子的表达,发挥抗炎作用。初步推测并验证了喉咽清治疗咽炎的主要靶蛋白与通路,为后续进一步验证喉咽清靶向抗炎提供新思路。

天然Nrf2激活剂研究进展及其抗呼吸道病毒意义

Nrf2是氧化应激和炎症反应的重要调节因子,可调节白细胞介素(IL)家族细胞因子和氧化应激信号通路。研究证实Nrf2的激活对治疗呼吸道病毒感染具有重要意义,众多天然Nrf2激动剂可作为免疫疗法治疗呼吸道病毒感染。基于Nrf2在呼吸道感染的重要调节作用,本文对众多天然Nrf2激动剂抗人类呼吸道病毒的最新研究进展进行综述,以期为天然药物治疗呼吸道病毒的研发提供参考。

高效液相色谱-飞行时间-串联质谱和随机森林算法的蜜炙百合与生百合指纹图谱研究

采用指纹图谱结合化学计量学对不同产地蜜炙百合与生百合质量进行评价。收集23批不同来源的蜜百合与生百合进行高效液相色谱(HPLC)分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004药典版)建立两类百合对照指纹图谱,采用随机森林算法对其进行判别分析,筛选其主要差异性组分;并利用HPLC-飞行时间-串联质谱(TOF-MS/MS)法对差异峰进行鉴别。结果显示23批不同来源蜜炙百合与生百合共获得13个共有峰;利用随机森林算法准确地分辨了蜜炙百合与生百合,发现王百合苷D和王百合苷B对分辨两类百合具有重要贡献。

喉咽清提取物对流感病毒感染肺炎小鼠模型的保护作用

目的研究中药复方喉咽清对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺炎模型的治疗作用。方法采用ICR小鼠随机分为正常组,模型组,喉咽清高、中、低剂量组(15.60,7.80,3.90 g·kg-1),阳性对照药磷酸奥司他韦胶囊组(0.04 g·kg-1),采用滴鼻感染甲型H1N1流感病毒FM1株建立小鼠流感病毒肺炎模型,给药5 d,感染第6日测定小鼠体重、肺指数值以及14 d内小鼠存活时间、死亡率,感染第3、6、9日采用Real time PCR方法检测小鼠肺组织中病毒载量表达。结果与模型组比较,喉咽清高剂量组小鼠肺指数值、死亡率明显降低,喉咽清高、中、低剂量组体重明显增加,喉咽清高、中剂量组存活时间明显延长,感染第6、9日喉咽清高剂量组肺组织病毒载量明显降低。结论喉咽清对甲型流感病毒性肺炎具有治疗作用,其可能是通过降低小鼠肺组织中流感病毒载量发挥作用,该作用值得进一步研究。

膜分离技术应用于喉咽清口服液纯化工艺的研究

目的探讨膜分离技术应用于喉咽清口服液制备,解决喉咽清口服液生产周期长、澄明度较差、放置时间长易出现浑浊等口服液共性技术难题。方法采用不同截留分子的膜单元,对不同工艺环节中的药液进行膜分离,以齐墩果酸量、药液澄明度、成品得率为指标,考察不同膜单元对不同工艺环节中的药液膜分离效果的影响。结果通过中试放大,选择型号为24126号膜单元和22557号膜单元组合,具有较好的膜分离效果;控制药液温度10~40℃、压力0.1~0.35 MPa、一级膜滤出料体积流量1.4 L/min,二级膜滤出料体积流量13.6 L/min操作参数,得到澄清透亮红棕色液体,主要有效成分齐墩果酸损失约14%,成品得率提高了12.6%;经抗炎、抑菌主要药效学试验比较,两者疗效无显著性差异（P〉0.05）。结论膜分离技术应用于喉咽清口服液纯化工艺基本可行。

喉咽清口服液抗炎活性成分的筛选

目的筛选喉咽清口服液(土牛膝、马兰草、天名精、车前草)中的抗炎活性成分。方法ODS⁃AQ反相柱分离喉咽清浸膏后,分别用水、10%甲醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、90%甲醇、甲醇、异丙醇进行洗脱。构建LPS(1μg/mL)诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症模型,以NO释放量为指标来评价浸膏及其洗脱组分的抗炎活性。LC⁃MS法鉴定相关成分结构,RP⁃HPLC法测定其含量。结果70%甲醇洗脱组分的体外抑制NO作用最强,IC50为35.25μg/mL,其主要活性成分为竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳa,其中后者含量更高,活性更好。竹节参皂苷Ⅳa在0.15~3.0μg范围内线性关系良好(R2=0.9996),平均加样回收率为104.22%,RSD为1.61%,3批样品中其含量均高于0.2 mg/mL。结论竹节参皂苷Ⅳa为喉咽清口服液的主要抗炎活性成分。

喉咽清口服液防治放射性口腔溃疡及咽炎的疗效研究

目的观察喉咽清口服液对放射性口腔溃疡及咽炎的防治效果。方法将60例头颈部肿瘤初次放射治疗的患者随机分为观察组及对照组,每组30例,观察组含漱并口服喉咽清口服液,对照组含漱并口服康复新液。观察两组从放疗前3天至放疗结束的放射性黏膜损伤发生时的累积辐射剂量、口腔及咽部黏膜损伤程度、黏膜损伤高峰出现与持续时间、黏膜损伤愈合时间、局部疼痛程度视觉模拟评分(visal analogue scale,VAS)评分。结果观察组患者开始出现放射性口腔溃疡及咽炎时的累积辐射剂量明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);观察组患者黏膜损伤程度、黏膜损伤高峰持续时间、黏膜损伤愈合时间、局部疼痛程度VAS评分均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论头颈肿瘤患者放疗期间配合喉咽清口服液含漱与口服能有效延缓放射性口腔溃疡及咽炎的发生,并缩短黏膜溃疡愈合时间,有效减轻临床不适症状,值得临床推广应用。

HPLC法测定喉咽清口服液中齐墩果酸的含量

目的建立HPLC-UV法测定酸水解后喉咽清口服液中的齐墩果酸的含量。方法以盐酸-乙醇溶液为水解溶剂,水浴加热回流1 h,再用石油醚（60～90℃）萃取得齐墩果酸;采用高效液相色谱法,以Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm,5μm）色谱柱,乙腈-水（90∶10）作为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,检测波长为210 nm。结果齐墩果酸线性范围为2～12μg,平均回收率99.09%,RSD为1.83%。结论所建立方法操作简便、准确、可靠、重现性好,可用于喉咽清口服液中齐墩果酸的含量测定。

土牛膝抗炎成分分离、鉴定与含量测定研究

本研究建立脂多糖诱导的巨噬细胞炎症模型,结合层析法对土牛膝抗炎活性成分进行分离,并用NMR、MS以及与对照品比较,对得到的化合物进行结构鉴定。结果表明粗毛牛膝醇提取物抗炎效果最佳,其反相层析50%、70%及100%甲醇洗脱物抗炎活性高和细胞毒性低,从50%-70%甲醇洗脱物分离鉴定出9种单体化合物:β-蜕皮甾酮(1)、牛膝甾酮(2)、水龙骨甾酮B(3)、N-反式阿魏酰酪胺(4)、N-顺式阿魏酰酪胺(5)、N-顺式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(6)、N-反式阿魏酰-3-甲氧基酪胺(7)、竹节参皂苷Ⅳa(8)、5,2′-二甲氧基-6-甲氧甲基-7-羟基-异黄酮(10);100%甲醇洗脱物鉴定出主要成分竹节参皂苷Ⅰ(9)。在LPS+25μM单体浓度下,化合物抗炎活性由强到弱为4>1>5>2>6>9>10>3>7>8。反相液相色谱测定结果表明,野生牛膝和柳叶牛膝(两年生)地下根茎β-蜕皮甾酮含量在温度高季节含量高,8月份达到最高,分别为0.914±0.016和1.412±0.038 mg/g;两年生粗毛牛膝随季节变化规律不明显。具有抗炎活性的阿魏酰酪胺类生物碱首次从土牛膝中分离鉴定。

肾石通颗粒HPLC特征图谱研究

目的：建立肾石通颗粒的高效液相色谱特征图谱。方法采用Thermo Hypersil GOLD-C18色谱柱（4.6 mm×25.0 mm,5μm）,以乙腈-0.2%磷酸水溶液为洗脱剂进行梯度洗脱（0～20 min,5%→10%乙腈；20～40 min,10%→12%乙腈；40～60 min,12%→14%乙腈；60～90 min,14%→20%乙腈；90～120 min,20%→28%乙腈）,检测波长280 nm,流速1.0 mL/min,柱温30℃,分析时间120 min。结果根据10批样品建立了肾石通颗粒的高效液相色谱特征图谱,确定了27个共有峰,其中包含丹参、金钱草等6味药的特征峰。结论该法灵敏度高、稳定性和重复性良好,可用于肾石通颗粒的质量控制。

湘产土牛膝中蜕皮甾酮类化合物分离与鉴定

目的研究湘产特色药材土牛膝化学成分。方法采用乙醇提取、溶剂萃取法初步分离,硅胶、反相硅胶柱层析与溶剂重结晶进行化合物分离纯化,通过波谱数据、理化性质及文献对照对分离得到的化合物进行结构鉴定。结果从土牛膝乙醇提取物中获得7个蜕皮甾酮类化合物,分别为:β-蜕皮甾酮(1)、牛膝甾酮(2)、水龙骨甾酮B(3)、pterosterone(4)、24(28)-ecdysterone(5)、achyranthesterone A(6)、rubrosterone(7)。结论化合物4-7均为首次从该种植物中分离得到。

喉咽清口服液中齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷在大鼠体内的药代动力学研究

目的：研究喉咽清口服液膜滤前后齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷在大鼠体内的药代动力学特征。方法血浆样品经乙腈处理,采用HPLC法测定血药浓度,色谱柱：C18（250 mm×4.6 mm）,流动相：乙腈：0.4%磷酸（34：66）,流速：1.0 mL/min,检测波长：203 nm。采用DAS 2.1药代动力学软件拟合处理,计算齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷的主要药代动力学参数。结果齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷在0.0025～0.0500μg/mL范围内线性关系良好（r=0.9991）,回收率为87.72%～90.37%。喉咽清口服液膜滤前后,齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷的体内过程均符合一房室模型,Tmax分别为（1.002±0.009）、（1.002±0.006）h；Cmax分别为（0.5006±0.1080）,（0.4932±0.1210）μg/L；t1/2α分别为（2.159±0.012）,（2.312±0.009）h；A UC（0－6）分别为（1.338±0.031）,（1.312±0.046）μg/（L·h）；A UC（0－６）分别为（2.181±0.042）,（2.161±0.050）μg/（L·h）。结论喉咽清口服液膜滤前后,齐墩果酸-28-O-β-D吡喃葡萄糖苷在体内的吸收及生物利用度无显著性变化。

高效液相色谱法测定喉咽清口服液中蜕皮甾酮含量

目的建立喉咽清口服液中蜕皮甾酮的含量测定方法。方法色谱柱为Aglient TC-C18（250 mm×4.6mm,5μm）;乙腈-水（15：85）为流动相;流速为1.0 mL·min^-1;检测波长为248 nm。结果蜕皮甾酮在54-810 ng（r^2=0.999 8）线性关系良好,低、中、高浓度平均回收率分别为100.2%、99.5%、102.5%,RSD分别为0.25%、0.84%、1.2%。结论该方法简便、快速、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为喉咽清口服液中蜕皮甾酮的含量测定方法。

天名精全草挥发油化学成分的SPME-GC/MS分析

目的:采用固相微萃取(SPME)-GC/MS联用技术分析天名精全草挥发油化学成分。方法:通过4个不同的SPME萃取头(DVB/PDMS、CAR/PDMS、PDMS和PA),在最佳条件下,对挥发油进行了化学成分研究。结果:总共检测出135个挥发油化学成分,DVB/PDMS、CAR/PDMS、PDMS和PA 4种萃取头分别检测出88、77、56和42个挥发性成分。其中,酯类和倍半萜类化合物是天名精挥发油中主要的化学成分类型。结论:SPME-GC/MS技术可快速分析天名精全草挥发油化合物的类型以及相对含量,对天名精的进一步研究具有一定指导意义。

小儿扶脾颗粒对小儿功能性消化不良的实验研究

目的:探究小儿扶脾颗粒对功能性消化不良、胃肠运动、免疫功能的影响。方法:采用饥饱失常和左旋精氨酸致幼鼠功能性消化不良模型,测定炭末推进率、血清中胃泌素和胃动素水平;采用正常幼鼠和阿托品致胃肠运动抑制幼鼠模型,测定炭末推进率;采用环磷酰胺致免疫功能低下幼鼠模型,测定廓清指数K值;采用大黄灌胃造成幼鼠脾虚模型,测定小鼠游泳时间和自主活动次数。结果:功能性消化不良模型组小鼠炭末推进率、血清中胃泌素和胃动素水平低于正常组(P<0.01),小儿扶脾颗粒高、中剂量组小鼠炭末推进率、血清中胃泌素和胃动素水平明显高于模型组(P<0.01)。正常小鼠小儿扶脾颗粒中、低剂量组炭末推进率明显高于正常组(P<0.05或P<0.01)。阿托品致胃肠运动抑制模型组小鼠炭末推进率明显低于正常组(P<0.01),小儿扶脾颗粒高、中剂量组小鼠炭末推进率明显高于模型组(P<0.01)。环磷酰胺致免疫功能低下模型组小鼠K值和α值均明显低于正常组(P<0.05),小儿扶脾颗粒低剂量组小鼠廓清指数K值明显高于模型组(P<0.05),小儿扶脾颗粒各剂量组小鼠α值与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。大黄致脾虚模型组小鼠游泳时间低于正常组(P<0.05),小儿扶脾颗粒高、低剂量组小鼠游泳时间明显高于模型组(P<0.05),小儿扶脾颗粒各剂量组小鼠自主活动次数与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:小儿扶脾颗粒对小儿功能性消化不良具有治疗作用,可促进胃肠运动和胃肠激素分泌,提高网状内皮系统吞噬功能,改善脾虚症状,缓解体力疲劳。

便可通片高效液相指纹图谱研究及多指标成分定量分析

目的建立便可通片高效液相(HPLC)指纹图谱,同时对其中的松果菊苷、柚皮苷、新橙皮苷、芦荟苷进行含量测定。方法采用InertSustain C_(18)(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-0.1%冰醋酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1 mL·min^(-1);柱温:25℃;检测波长:300 nm;进样量:10μL。结果HPLC指纹图谱共确定16个共有峰,并指认出5个共有成分,指纹图谱相似度均在0.950以上;10批样品中松果菊苷、柚皮苷、新橙皮苷、芦荟苷的平均含量分别为:0.40%、1.61%、1.75%、1.63%。结论该研究建立的方法简单、重复性好,为提高便可通片的质量控制水平提供了依据。

牛膝中皂苷和甾酮类物质基础及药理活性研究进展

中药牛膝分为怀牛膝、川牛膝和土牛膝,其化学成分和药理作用复杂且存在差异。皂苷和甾酮类化合物是牛膝的主要成分,其研究得到了广泛关注。对牛膝的皂苷类及甾酮类化合物进行了归属,并对相关药理活性及含量测定的研究进行综述,以期为牛膝的进一步研发提供参考。