雪貂在抗感染药物非临床研究中的应用

雪貂应用于抗感染药物评价的优势在于病原微生物(尤其是病毒株)能不经宿主适应直接进行感染和传播,且动物感染后的临床症状与人极为相似。虽然雪貂在抗病毒药物的研发中起到了极为重要的作用,但其应用范围仍有一定的局限性,可能与雪貂缺少相应的实验动物饲养和应用的国家级标准,缺乏特异性的诊断和检测试剂等因素有关。本文对雪貂作为感染疾病模型的特点进行总结,并汇总分析了雪貂在抗感染药物研究中的应用方向,旨在促进雪貂作为实验动物的标准化应用。

基于Plackett-Burman和响应面中心组合设计优选夏枯草多糖制备工艺及其活性研究

目的研究夏枯草多糖制备工艺,初步探讨其体外抗氧化、抗炎活性。方法利用超声波辅助酶法提取技术,以夏枯草多糖得率为指标,采用Plackett-Burman试验、爬坡试验和响应面分析法筛选最优提取组合。通过ABTS+自由基、DPPH自由基清除能力及Fe2+还原能力研究夏枯草多糖抗氧化能力;检测夏枯草多糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7模型炎症因子的影响。结果夏枯草多糖的最佳制备工艺为:纤维素酶浓度为5.0%,酶解时间为150min,酶解温度为60℃,液料比为45∶1。验证试验最优值为5.48%,与预测值(5.36%)非常接近。夏枯草多糖具有显著的DPPH自由基、ABTS+自由基清除作用及Fe2+还原能力;对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW246.7炎症因子分泌具有一定的抑制作用。结论超声波辅助酶法提取夏枯草多糖得率较高,纯度较好;夏枯草多糖具有明显的抗氧化、抗炎活性。

鱼油重复给药毒性试验研究

鱼油是一种从多脂鱼类中提取的油脂,具有较好的营养保健等功能,在我国属于新资源食品。作为新型膳食补充剂,鱼油在备受追捧的同时,其安全性也一直存在争议。本试验对大鼠重复给样毒性试验进行研究,对鱼油的安全性进行再评价。一、材料与仪器1.供试品。鱼油,1kg/瓶,批号:133082009001,人体推荐食用量为1.2g/日/人,山东新华制药股份有限公司提供。

口腔菌群参与槟榔提取物诱发大鼠口腔溃疡的作用研究

目的通过槟榔提取物构建大鼠口腔溃疡模型,观察口腔内菌群结构变化及多样性特征,探索口腔菌群和局部炎性因子参与槟榔提取物诱发大鼠口腔溃疡的发病作用机制研究,为临床防治口腔溃疡提供理论支持。方法将30只SD大鼠随机分为正常组、模型组、药物治疗组(桂林西瓜霜,8 mg/d,连续7 d),10只/组。大鼠口腔黏膜经皮下注射10 g/mL的槟榔提取物,复制大鼠口腔溃疡模型。通过观察溃疡面积、溃疡评分、局部组织口腔肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-2(interleukin-2,IL-2)、IL-8水平,并取口腔黏膜组织进行HE染色,观察其组织形态学的变化,采用高通量测序方法分析口腔微生物菌群结构分布及微生物群落多样性。结果与正常组比较,模型组大鼠溃疡面积显著增大,溃疡评分显著上升(P<0.01),口腔黏膜组织TNF-α、IL-2、IL-8水平均显著升高(P<0.01),大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P<0.05)、韦荣球菌属(Veillonella,P<0.001)均显著减少,模型组大鼠口腔黏膜上皮细胞增生或局灶性坏死,黏膜固有层水肿、出血,并伴有大量的中性粒细胞和单核细胞浸润;与模型组比较,药物治疗组大鼠溃疡面积显著减少(P<0.05,P<0.01),溃疡评分显著减少(P<0.05),口腔黏膜组织TNF-α(P<0.01)、IL-2(P<0.05)、IL-8(P<0.05)水平均显著降低,大鼠口腔唾液的链球菌属(Streptococcus,P<0.001)、韦荣球菌属(Veillonella,P<0.01)显著增加,葡萄球菌属(Staphylococcus,P<0.01)显著减少,口腔黏膜组织病变程度有明显改善。结论槟榔提取物可成功复制大鼠口腔溃疡模型,其发病机制可能与口腔正常菌群水平降低,潜在致病菌水平升高,破坏其口腔菌群微生物平衡,进而破坏机体免疫系统,引起局部促炎因子升高有关。

吸入药物非临床安全性评价策略

吸入给药的安全性风险主要源自药物的全身暴露和呼吸系统局部的高暴露以及持续滞留。虽然吸入制剂属于近年来发展较快的一类特殊剂型,但其安全性评价的关键点和评价标准尚未形成明确的共识,这也在一定程度上制约了吸入制剂的研发。本文对吸入给药时的关键考虑点进行了文献调研和经验总结,旨在促进吸入给药非临床安全性评价的标准化和规范化。

蓝金口服液治疗上呼吸道感染(风热表证)的作用研究

目的探讨蓝金口服液治疗上呼吸道感染(风热表证)的药效学作用。方法分别采用体内、体外实验考察蓝金口服液的抗菌和抗病毒药效作用。采用小鼠乙酸扭体实验、小鼠热板法镇痛实验、酵母致大鼠发热实验、大鼠足趾汗液分泌实验分别考察蓝金口服液的镇痛、解热和发汗作用。结果蓝金口服液对多种临床分离菌均有体外抑制作用。乙型溶血性链球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和白假丝酵母菌的MIC为25~200 mg/mL;蓝金口服液体外抑制呼吸道合胞病毒和甲型流感病毒感染细胞的IC_(50)分别为3.50、6.58 mg/mL,安全指数SI分别为194和147。体内研究显示,蓝金口服液能显著降低小鼠感染细菌(金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌)或甲型流感病毒后的死亡率,显著延长生存天数,并显著减小感染甲型流感病毒后的肺指数。蓝金口服液具有显著的镇痛、解热和发汗作用。结论蓝金口服液对上呼吸道感染(风热表证)具有显著治疗效果。

肺吸入制剂非临床药代动力学研究的一般策略

肺吸入制剂是近年来发展较快的一种新兴剂型,因其无首过效应、可降低毒副作用等特点受到青睐。肺吸入制剂的非临床药代动力学(PK)研究主要包括整体动物PK研究和体外PK研究。在进行整体动物PK研究时需对动物种属的选择、给药准确性的监测、体内暴露量的检测等多加关注;体外PK研究主要包括离体脏器、酶系、细胞试验等研究。本文就国内外对肺吸入制剂非临床PK研究评价方法进行简要综述。

茅岩莓提取物治疗放射性口腔溃疡的作用研究

目的采用X射线复制大鼠放射性口腔溃疡模型,对茅岩莓提取物治疗放射性口腔溃疡的效果进行评价。方法SD大鼠60只,雌雄各半,随机分为正常对照组,模型对照组,金因肽组(5000 IU·kg^(-1)),茅岩莓提取物低、中、高(16、32、64 mg·kg^(-1))剂量组,每组10只。各组大鼠按15 Gy剂量采用X射线照射大鼠口部及内侧口腔黏膜,复制放射性口腔溃疡模型。分别于造模后24 h进行药物干预,2次·d^(-1),连续14 d。每日对各组动物进行一般临床观察,定期监测体重、摄食量及口腔黏膜评分,末次给药后采集各组大鼠口腔黏膜,检测口腔黏膜组织中IL-6、TNF-α、IL-1β的含量,并进行组织病理学检查。结果金因肽和低、中、高剂量茅岩莓提取物均可提高动物体重增长率和摄食量;金因肽和中、高剂量茅岩莓提取物可显著降低口腔黏膜评分和IL-6表达(P<0.05,P<0.01),减轻口腔黏膜病变程度;金因肽和高剂量茅岩莓提取物可显著降低口腔黏膜组织IL-1β表达(P<0.05,P<0.01)。结论茅岩莓提取物对放射性口腔溃疡具有修复作用,其作用可能与调节口腔黏膜炎症因子的水平相关。

精制鱼油的致畸致突变性检测

目的:评价精制鱼油(DHA含量89.97%,EPA含量1.12%)是否具有致畸变和致突变作用。方法:在SD雌性大鼠妊娠期第6~15天经口灌胃分别给予不同剂量(1.2、2.3、4.6 g/kg)精制鱼油,通过检测孕鼠体质量、妊娠结局、胎仔内脏和骨骼以及胎仔的生长发育等指标,评价精制鱼油的致畸作用。检测精制鱼油在活化与非活化条件下对鼠伤寒沙门氏菌TA97a、TA98、TA100、TA102、TA1535回变菌落数及菌落形态的影响;通过检测精制鱼油对正常ICR小鼠骨髓细胞微核率,精原细胞染色体畸变率、畸变细胞率的影响,评价其致突变作用。结果:在致畸试验中,精制鱼油对孕鼠未观察到有害作用剂量(NOAEL)为4.6 g/kg;精制鱼油各剂量组(8~5 000μg/皿)在代谢活化与非代谢活化条件下Ames试验均为阴性;精制鱼油各剂量组的小鼠骨髓细胞微核率,精原细胞染色体畸变率及畸变细胞率与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05),未见明显致突变作用。结论:在本实验条件下,精制鱼油未见致畸和致突变作用。

免疫抑制介导大鼠侵袭性黑曲霉菌肺病模型的构建与评价

目的 本研究建立免疫抑制大鼠侵袭性黑曲霉菌肺病模型,为抗侵袭性肺曲霉病药物药效学评价及机制研究提供理论支持。方法 将60只SD大鼠随机分为正常对照组、环磷酰胺对照组、环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组,每组12只动物。每天进行一般临床观察,分别于造模第3、7天采用ELISA法检测血清中免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)、血清半乳甘露聚糖(GM)水平,并检测外周血CD4^(+)、CD8^(+)细胞比例及白细胞(WBC)、中性粒细胞(Neu)含量,同时观察肺泡灌洗液黑曲霉菌负荷和大鼠肺组织形态学变化。结果 环磷酰胺对照组、环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠造模后均出现自主活动减少及竖毛,且环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠伴有呼吸急促,可闻及肺部湿音;与正常对照组比较,环磷酰胺对照组大鼠血中CD4^(+)、WBC、Neu、IgG、IgM水平均显著减少,CD8^(+)比例显著增加(P<0.05,P<0.01);与环磷酰胺对照组比较,环磷酰胺+真菌感染中、高剂量组大鼠血中IgG、IgM、CD4^(+)水平均显著减少(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠血中WBC、Neu水平均显著减少(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染中、高剂量组大鼠血中CD8^(+)水平显著升高(P<0.05,P<0.01),环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠血中GM水平及肺泡灌洗液黑曲霉菌负荷均显著增加(P<0.05,P<0.01);环磷酰胺+真菌感染低、中、高剂量组大鼠肺组织出现菌丝分布和肺泡上皮破坏、肺泡内支气管上皮杯状细胞增多、炎症细胞浸润,其病变程度与造模剂量呈正相关。结论 本研究采用黑曲霉菌联合环磷酰胺免疫抑制剂构建侵袭性黑曲霉菌肺病模型,病程与菌液浓度和造模时间呈正相关,证实细胞免疫在该病发病机制方面中发挥重要作用,同时免疫球蛋白也可影响侵袭性肺曲霉病疾病的发展过程,推测侵袭性肺曲霉病发病机制可能与体液免疫中免疫球蛋白水平有关。

清热消炎宁对急性咽炎大鼠模型的抗炎作用

目的探究清热消炎宁(QRXYN)干膏粉对大鼠急性咽炎的药效作用及抗炎机制,为临床应用提供依据。方法选取SD大鼠96只,随机分为对照组,模型组,清喉利咽颗粒组(1.35 g·kg^(-1))及QRXYN低、中、高剂量组(6.08、12.15、24.30 g生药·kg^(-1))。采用2.5%氨水涂抹于咽部诱导大鼠急性咽炎模型,检测各组大鼠咳嗽潜伏期和5 min内咳嗽次数,检测咽喉组织中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、环氧化酶2(COX-2)的含量及核转录因子kappa B(NF-κB)和抑制因子κB(IκB)的蛋白表达,并进行组织病理学检查;采用二甲苯致小鼠耳郭肿胀模型,观察QRXYN对小鼠耳郭肿胀度、肿胀率和肿胀抑制率的影响。结果与急性咽炎模型组相比,QRXYN能明显延长咳嗽潜伏期,减少咳嗽次数,改善咽部组织炎症及病理变化,降低TNF-α、COX-2、IL-6的水平和NF-κB、IκB蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。与模型组相比,QRXYN能显著减轻小鼠耳郭肿胀程度,降低肿胀率(P<0.05,P<0.01)。结论QRXYN对于急性咽炎具有明显治疗作用,同时具有抗非特异性炎症作用,其作用机制可能与降低局部组织炎性因子水平和NF-κB/IκB蛋白表达有关。

不同造模方法对皮肤损伤及愈合情况的病理学评价

目的 探讨不同造模方法对皮肤损伤的影响及不同时间段创面皮肤愈合的病理学评价。方法 实验选用SD大鼠78只,雌雄各半,分为正常对照组(14只)、烧伤模型组(24只)、烫伤模型组(24只)和全切皮肤模型组(16只)。其中烫伤模型组采用台式超级控温烫伤仪烫伤皮肤组织,并于创面滴入混合菌,建立浅II度烫伤合并伤口感染模型。烧伤模型组采用自制烧伤锥形瓶烧烫伤皮肤组织,并于创面滴入混合菌,建立浅II度烧伤合并伤口感染模型。全切皮肤模型组采用无菌手术刀对皮肤进行面积为3 cm×3 cm切除,切除不伤及肌肉,建立皮肤全切模型。正常对照组分别于D1、3、4、5、7、10、14取2只动物进行解剖取材,烧伤和烫伤+细菌感染模型组分别于D1、3、5、7、10、14各取4只动物进行解剖取材,全切皮肤模型于D4、7、10、14各取4只动物进行解剖取材,对创面皮肤组织进行病理学检查。结果 大体观察发现,不同模型造模初期皮肤均出现不同程度创面损伤;中期皮肤损伤部位周围均出现红肿、水泡等局部反应;末期皮肤愈合较为完整。显微镜观察发现,各模型初中期皮肤主要表现为表皮变性坏死,角化不全,颗粒层、棘细胞层及基底细胞层缺乏,真皮不同程度炎性细胞浸润;末期皮肤表皮各层结构较为完整,真皮层可见大量新生血管,成纤维细胞聚集及少量炎症细胞浸润。结论 通过对造模不同阶段皮肤组织的病理学评价,较为全面的分析了不同造模方法对皮肤的损伤与愈合情况,为后续药物药效学研究奠定了基础。

企业成本控制与管理问题探究

随着我国社会主义市场经济发展与改革开放的持续深化,市场经营环境与经营模式不断变化与创新,使企业之间竞争日益激烈。企业为实现可持续发展,需要确立长期战略目标,选择符合企业自身发展的经营战略,提高财务管理水平。成本控制与管理是提升财务管理质量的重要手段,企业应对其给予高度重视。由于企业成本控制与管理具有专业性和复杂性,加之企业自身发展各具特色,因此企业成本控制与管理实施过程面临的问题也具有多样性的特点。本文对企业成本控制与管理存在的问题进行探究,并提出解决对策,希望能为企业决策层监管提供借鉴,使企业实现健康可持续发展。

醋五味子配方颗粒及其原料药材饮片中3个木脂素成分的含量测定

目的:建立醋五味子配方颗粒及其原料药材、饮片中五味子醇甲、五味子醇乙、当归酰基戈米辛H的含量测定方法,并分析各成分从药材、饮片至配方颗粒的变化。方法:采用高效液相色谱法(HPLC)进行含量测定。色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C_(18),流动相为乙腈-水梯度洗脱,柱温为30℃,流速为1.0 mL·min^(-1),检测波长为220 nm,进样量为10μL。结果:五味子醇甲、五味子醇乙、当归酰基戈米辛H检测的线性范围(按进样质量计)分别为0.030~0.380、0.016~0.195、0.009~0.115μg(r>0.999);精密度、稳定性(24 h)、重复性试验的RSD均小于2%;药材、饮片及配方颗粒中,各成分的加样回收率均为98%~102%且RSD均小于2%;五味子中3个成分的质量分数分别为0.44%~0.88%、0.11%~0.44%、0.07%~0.14%,醋五味子中3个成分的质量分数分别为0.48%~0.91%、0.13%~0.47%、0.09%~0.15%,醋五味子配方颗粒中3个成分的质量分数分别为0.15%~0.36%、0.02%~0.16%、0.02%~0.06%。结论:建立了同时测定醋五味子配方颗粒及原料药材、饮片中五味子醇甲、五味子醇乙、当归酰基戈米辛H含量测定方法,该方法分析时间短、专属性强、准确度高,可用于醋五味子配方颗粒从原料到成品的质量评价。

超高效液相色谱-串联质谱法同时检测肉鸡组织中4种异喹啉类生物碱

【目的】试验旨在建立一种同时测定肉鸡组织中原阿片碱、别隐品碱、白屈菜红碱和血根碱含量的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,以便更好地监测博落回散和博普总碱散活性成分在肉鸡组织中的分布与残留情况。【方法】对肉鸡组织进行前处理方法优化,以0.1%甲酸水和乙腈为流动相,在Agilent Zorbax SB-C18上梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,柱温为35℃,进样量为1μL,在正离子模式下通过多反应监测模式采集数据,采用内标校正和外标法测定生物碱含量,并对方法线性、检测限与定量限、基质效应、回收率、批内与批间精密度、准确度及稳定性进行考察。【结果】白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的线性范围为0.5~200μg/L,血根碱为2~200μg/L,相关系数均≥0.999,线性关系良好;白屈菜红碱、原阿片碱和别隐品碱的检测限与定量限分别为0.2和0.5μg/L,血根碱检测限与定量限分别为1和2μg/L。4种生物碱在高、中、低浓度下方法回收率达到86.61%~111.17%,批内与批间精密度和准确度均≤14.93%,基质效应为81.73%~120.78%,稳定性的相对标准偏差均≤13.55%。【结论】本试验建立了同时检测肉鸡心脏、肝脏、肾脏、胸肌和腿肌中4种异喹啉类生物碱的超高效液相色谱-串联质谱法,方法符合各项方法学考察要求,具有专属性强、灵敏度高、方便快捷等特点,可实现对肉鸡组织中痕量生物碱的精确、快速定量。

大鼠混合细菌感染性肺炎模型的建立与评价

目的建立金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌混合细菌感染性肺炎模型,为药效评价提供动物模型支持。方法SD大鼠36只,雌雄各半,随机分为空白对照组、模型对照组、红霉素组,每组12只。各组麻醉后,模型对照组、红霉素组气管滴入1×10^(8) CFU/mL混合菌液,每只0.5 mL,空白对照组滴入等体积生理盐水。造模2 h后进行口鼻吸入给药,每天3次,每次10 min,每次间隔4 h,连续给药7 d。给药期间,观察各组大鼠一般状态;造模第3、7天检查大鼠肺功能,测定肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中白细胞数与中性粒细胞百分比,ELISA检测BALF中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),HE染色观察肺组织病理学改变,并对肺组织进行细菌培养计数。结果与空白对照组比较,模型对照组体温、白细胞(White Blood Cell,WBC)、中性粒细胞计数(Neu%)、TNF-α、IL-6显著增大,用力肺活量(forced vital capacity,FVC)、用力呼气量占用力肺活量比值(FEV_(200)/FVC)、潮气容积(V_(T))显著减小,大鼠肺泡结构被破坏,大量炎症细胞浸润、肺间质增厚;与模型对照组比较,红霉素组体温、WBC、Neu%、TNF-α、IL-6显著下降,FVC、FEV_(200)/FVC、V_(T)显著上升,大鼠肺组织病理学改变明显减轻,肺组织中金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌数目明显减少。结论本实验采用金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、大肠埃希菌的混合细菌,经气管滴入大鼠肺建立细菌感染性肺炎模型成功,可用来进行药效作用的评价。

定量口鼻吸入法建立大鼠慢性阻塞性肺病模型

目的 比较烟雾经口鼻吸入+脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)气管滴注和烟雾全身暴露+脂多糖气管滴注诱导的大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease, COPD)模型的差异,为COPD模型的构建提供新的造模方法。方法 将90只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、烟雾全身暴露组、烟雾口鼻吸入组,每组30只。烟雾全身暴露组采用“自制熏烟箱”进行烟雾的全身暴露,烟雾口鼻吸入组采用“定量吸烟装置”进行口鼻吸入烟雾,两组动物均每天进行烟雾暴露1次,每次60 min,连续8周,同时分别于造模第1、7、15、21天经气管注入LPS(1 mg/kg),以诱导建立COPD模型。分别对定量吸烟装置和自制烟熏箱生成的烟雾进行质量控制,包括烟雾颗粒的浓度稳定性和均一性验证,烟雾颗粒的粒径分布检测,并分别于造模4、6、8周通过肺功能检查、肺泡灌洗液炎症因子白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量的检测、组织病理学检查来比较两种造模方式的差异。结果 定量吸烟装置能生成浓度稳定的烟雾(浓度分别为1.1 mg/L(以颗粒计)和0.1 mg/L(以尼古丁计)),且其质量中值粒径(median mass aerodynamic diameter, MMAD)(以尼古丁计)为0.86μm,几何标准差(geometric standard deviation, GSD)为2.12,自制烟熏箱所生成的烟雾浓度稳定性和均一性偏差均明显大于定量吸烟装置;烟雾口鼻吸入组大鼠肺功能FEV_(0.2)/FVC、肺顺应性(Cdyn)指标均较烟雾全身暴露组下降更为明显,气道阻力(penh)增加更明显;烟雾口鼻吸入组大鼠肺泡灌洗液IL-6、TNF-α水平在造模后6周即可见显著增加,烟雾全身暴露组大鼠需至造模8周。烟雾口鼻吸入组和全身暴露组大鼠造模后支气管炎症病变程度基本相当,但口鼻吸入组的肺气肿病变程度更严重,且与全身暴露组(造模8周)相比,口鼻吸入组(造模6周出现)肺气肿病变出现统计学差异的时间更早;烟雾口鼻吸入组平均内衬间隔(mean linear intercept, MLI)在造模4~8周均显著增大,平均肺泡数(mean alveolar number, MAN)在造模6~8周均显著减少;烟雾全身暴露组仅造模8周可见MLI显著增大和MAN显著减少。烟雾口鼻吸入组肺功能指标(FEV_(0.2)/FVC、Cdyn、Penh)、肺泡灌洗液细胞因子水平(IL-6、TNF-α)、肺泡组织病理学变化(支气管严重和肺气肿病理评分、MLI、MAN)在造模后均可见显著的异常改变,但各指标变化的变异系数(CV%)明显小于烟雾全身暴露组的相应指标。结论 LPS(1.0 mg/kg)气管滴注联合烟雾全身暴露或烟雾口鼻吸入均能构建典型的大鼠慢性阻塞性肺病模型,其中烟雾口鼻吸入能缩短模型构建的造模周期,连续造模6周即可成模,表现为典型的慢性阻塞性肺病症状(肺通气功能障碍,支气管-肺脏慢性炎症浸润,并同时伴有肺气肿),且模型动物个体间的差异更小(烟雾口鼻暴露vs烟雾全身暴露,CV%值更小)。

大鼠真菌性中耳炎模型建立

目的建立白色念珠菌诱导的大鼠真菌性中耳炎模型,为药效评价提供动物模型支持。方法SD大鼠50只,雌雄各半,随机分为正常对照组、空白注射组、潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组,每组10只。实验开始1~3 d,潮湿组每日对大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液,免疫抑制组每日经口灌胃给予0.81 mg/kg醋酸地塞米松药液,潮湿+免疫抑制组每日对大鼠右侧耳部滴入两次0.9%氯化钠注射液的同时每日经口灌胃给予0.81 mg/kg醋酸地塞米松药液。第4天,各组麻醉后,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组将1×10^(10)CFU/mL白色念珠菌悬液经鼓膜穿刺注入到大鼠右侧中耳腔,每只50μL,空白注射组大鼠注入等体积空白培养液,正常对照组不做任何处理;每日对潮湿组、潮湿+免疫抑制组大鼠右侧耳部滴入2次0.9%氯化钠注射液。造模期间,观察各组大鼠一般症状;造模第5、10、15天采集耳道分泌物进行白色念珠菌培养和革兰氏染色计数,造模第15天ELISA检测耳道灌洗液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β),HE染色观察中耳组织病理学改变。结果与空白注射组相比,潮湿组、免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠均出现不同程度中耳炎症状,IL-6、TNF-α和IL-1β水平显著升高(P<0.05,P<0.01),中耳出现不同程度的黏膜充血、水肿及炎性细胞浸润现象,且免疫抑制组和潮湿+免疫抑制组大鼠耳道分泌物中白色念珠菌数量均显著增加(P<0.05,P<0.01)。结论本实验使用鼓膜穿刺方式注射白色念珠菌建立真菌性中耳炎大鼠模型成功,在潮湿+免疫抑制条件效果更佳,可用来进行药效学作用的评价。

基于生物活性测定的注射用丹参多酚酸质量控制方法研究

目的以注射用丹参多酚酸(SAFI)体外抗血小板聚集活性为基础,建立该制剂的生物活性测定方法,并对30批样品进行测定,从而探索一种反映其有效性的新质控方法。方法以家兔全血为试验系,一定浓度的SAFI与富血小板血浆混合后,采用光学比浊法检测二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板聚集率,通过与丹酚酸B对照品的测定结果进行比较,运用斜率比例法计算相对效价,并进行方法学考察验证。结果方法学验证结果表明,建立的体外抗血小板聚集生物活性测定法符合要求;30批次样品的相对效价均值为0.3661,RSD为9.43%。结论SAFI具有较强的抗血小板聚集活性,所建方法适用于SAFI体外抗血小板聚集活性测定,对于补充调整SAFI的全面质量控制具有重要意义。

清热消炎宁片治疗冠状病毒感染的作用及机制研究

目的 研究清热消炎宁抗冠状病毒的作用,为评价其防治冠状病毒感染提供实验依据。方法 雌雄各半的96只BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、连花清瘟胶囊(0.546 g/kg)组和清热消炎宁片低、中、高剂量(8.72、17.44、34.89g/kg)组,每组16只。采用ip环磷酰胺联合HCoV-229E冠状病毒感染BALB/c小鼠,建立冠状病毒感染模型,通过小鼠体质量、肺指数、病毒载量、血凝滴度、肺组织病理改变来评价清热消炎宁的治疗作用;通过ELISA检测肺泡灌洗液中白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-4、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ干扰素(interferon-γ,IFN-γ)和血管细胞黏附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)水平;流式细胞术检测肺组织巨噬细胞、淋巴细胞(CD3+、CD4+)及NK细胞比例;Western blotting检测肺组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MYD88)、抑制因子κB激酶-β(inhibitor kappa B kinase-β,IKK-β)、抑制因子κB(inhibitor kappa B,IκB)和p-IκB蛋白表达。结果 与模型组比较,清热消炎宁明显增加病毒感染的小鼠体质量(P<0.05、0.01),降低肺指数和血凝效价(P<0.01),改善肺脏病变(P<0.05),且能显著抑制病毒m RNA表达(P<0.01);降低肺泡灌洗液中TNF-α、IL-1β和VCAM-1水平(P<0.05、0.01),提高IFN-γ水平(P<0.05);明显降低巨噬细胞比例(P<0.05、0.01),提高淋巴细胞CD3+、CD4+和NK细胞比例(P<0.01);显著下调肺组织MYD88、TLR4、IκB、IKK-β蛋白表达水平(P<0.05、0.01)。结论 清热消炎宁片可以抑制冠状病毒体内复制,减轻炎症反应,保护肺脏组织,具有明显的体内抗冠状病毒的药效作用,其作用机制可能与调控TLR4/MyD88/IKK/IκB信号通路和提高免疫有关。