幽门螺杆菌Tipα蛋白激活NLRP3炎性小体诱导THP-1细胞分泌IL-1β和IL-18

目的以佛波酯(PMA)诱导分化的THP-1巨噬细胞为模型,探讨NLRP3炎性小体在幽门螺杆菌Tipα蛋白诱导炎性细胞因子分泌中的作用。方法采用重组纯化Tipα蛋白刺激巨噬细胞,ELISA检测其促炎细胞因子TNF-α、IL-1β和IL-18的分泌水平。分别用NF-κB通路阻断剂PDTC和ROS清除剂NAC预处理细胞,ELISA检测预处理前后Tipα诱导细胞分泌促炎细胞因子水平差异,Western Blot检测NLRP3和Caspase-1分子的表达水平差异。结果 Tipα蛋白可显著诱导巨噬细胞产生TNF-α、IL-1β和IL-18;Tipα蛋白浓度为40μg/mL时,刺激细胞6h后,TNF-α、IL-18和IL-1β表达水平接近峰值(P<0.05)。特异性阻断NF-κB信号通路后,巨噬细胞分泌的促炎细胞因子及Caspase-1和NLRP3分子的表达水平均较阻断前明显降低,ROS清除剂NAC预处理细胞后,巨噬细胞分泌的IL-18和IL-1β较处理前有明显降低(P<0.05),TNF-α无明显变化;Western Blot结果显示Caspase-1和NLRP3分子的表达水平较阻断前均有明显降低。结论 Tipα能够促进巨噬细胞产生促炎细胞因子IL-1β和IL-18;NLRP3/Caspase-1途径可能参与了Tipα诱导的IL-1β和IL-18分泌。