骨康含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成脂分化的影响

背景：研究发现骨质疏松症与骨髓间充质干细胞的分化关系密切，随着年龄的增加，骨髓间充质干细胞绝对含量下降，向成骨分化能力减弱，向成脂分化能力增强。目的：在成脂诱导条件下，观察中药骨康含药血清对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞分化特性的影响。设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2007—01／08在广州中医药大学附属骨伤科医院细胞室完成。材料：清洁级6月龄新西兰大白兔4只，SPF级2月龄SD大鼠5只，购自广州中医药大学动物实验中心。中药骨康方的主要成分为丹参、补骨脂、淫羊藿等，含生药量1．43g／mL，由广州中医药大学附属骨伤科医院制剂室提供。方法：2只兔按4．8g／kg给予生药灌胃制备含药血清，相当于临床剂量的10倍，2次／d，每次间隔5h，连续灌胃7d；另2只兔给予等体积生理盐水灌胃。分别于最后1次给药后2h行心脏采血，离心后取上清，-20℃保存备用。密度梯度离心＋贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，膑蛋白酶扩增纯化，将传至第4代的骨髓间充质千细胞按2×10^8L^-1接种，加入成脂诱导液的同时，骨康组加入上述含药血清，对照组加入空白血清，均调整浓度为10％。主要观察指标：流式细胞仪检测细胞表面标志，油红O染色观察脂滴形成情况，计数脂肪细胞转化率。结果：第2代骨髓间充质干细胞均一性〉90％，CD44呈阳性表达，CD34、CD45呈阴性表达。培养第4，7，10天后，两组细胞中均含大小不等的橙红色脂肪滴，细胞核被脂滴挤于细胞一侧，骨康组脂肪细胞转化率均明显低于空白组（F=0．025—0，037，P〈0．05）。结论：中药骨康含药血清可抑制成脂诱导剂对骨髓间充质干细胞向脂肪细胞分化的促进作用。