目的探讨醒脑静注射液对缺糖缺氧再灌注(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤诱导SH-SY5Y细胞焦亡的保护作用及机制。方法使用不同浓度醒脑静注射液预处理SH-SY5Y细胞,确定醒脑静注射液给药浓度;将SH-SY5Y细胞随...目的探讨醒脑静注射液对缺糖缺氧再灌注(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤诱导SH-SY5Y细胞焦亡的保护作用及机制。方法使用不同浓度醒脑静注射液预处理SH-SY5Y细胞,确定醒脑静注射液给药浓度;将SH-SY5Y细胞随机分为对照组、OGD/R组、醒脑静注射液+OGD/R组(10μL/mL醒脑静注射液)以及醒脑静注射液+OGD/R+核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)抑制剂组(10μL/mL醒脑静注射液+2μmol/mL ML385)共4组,每组实验进行6次(n=6),采用MTT比色法检测细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)法测定细胞上清液中白介素18(interleukin 18,IL-18)和白介素-1β(interleukin 1 beta,IL-1β)表达水平;采用Western blot检测GasderminD蛋白(GSDMD-N)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、白介素1β前体(pro-interleukin 1,pro-IL-1β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、Nrf2以及凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)表达情况;采用细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒法测定细胞内LDH表达变化情况,采用Hochest/PI染色法观察细胞凋亡情况。结果与对照组比较,OGD/R组细胞存活率[(40.16±3.39)%比(101.3±1.54)%]、Nrf2表达水平[(0.47±0.09)比(1.00±0.00)]明显降低;IL-1β[(46.55±9.59)pg/mL比(9.35±3.33)pg/mL]、IL-18[(35.39±10.63)pg/mL比(7.85±3.04)pg/mL]、LDH渗出率[(0.36±0.04)%比(0.18±0.08)%]、GSDMD-N[(2.24±0.36)比(1.00±0.00)]、NLRP3[(2.15±0.23)比(1.00±0.00)]、pro-IL-1β[(3.08±0.17)比(1.00±0.00)]、caspase-1[(2.20±0.32)比(1.00±0.00)]表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.001);与OGD/R组比较,醒脑静注射液组细胞存活率[(63.69±11.28)%比(40.16±3.39)%]、Nrf2表达水平[(0.89±0.11)比(0.47±0.09)]明显升高,LDH渗出率[(0.25±0.07)%比(0.36±0.04)%]、IL-1β[(33.30±8.60)pg/mL比(46.55±9.59)pg/mL]、IL-18[(21.72±7.50)pg/mL比(35.39±10.63)pg/mL]、GSDMD-N[(1.34±0.06)比(2.24±0.36)]、NLRP3[(1.25±0.18)比(2.15±0.23)]、pro-IL-1β[(1.65±0.30)比(3.08±0.17)]、caspase-1[(1.23±0.15)比(2.20±0.32)]表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与醒脑静组比较,醒脑静+Nrf2抑制剂组Nrf2蛋白表达水平[(0.38±0.12)比(0.89±0.11)]明显降低,LDH渗出率[(0.36±0.07)%比(0.25±0.07)%]、IL-1β[(53.28±6.37)pg/mL比(33.30±8.60)pg/mL]、IL-18[(49.56±8.87)pg/mL比(21.72±7.50)pg/mL]、GSDMD-N[(1.75±0.27)比(1.34±0.06)]、NLRP3[(2.22±0.17)比(1.25±0.18)]、pro-IL-1β[(3.54±0.50)比(1.65±0.30)]、caspase-1[(2.36±0.28)比(1.23±0.15)]蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Nrf2抑制剂可逆转醒脑静注射液对OGD/R损伤诱导SH-SY5Y细胞焦亡的保护作用;醒脑静注射液通过上调Nrf2蛋白表达,抑制OGD/R损伤诱导的SH-SY5Y细胞焦亡。展开更多
目的通过多中心临床研究,探讨新型神经电生理监测协议指导下微创入路选择性神经后根离断术(single-level laminectomy selective dorsal rhizotomy,SL-SDR)联合康复治疗对于痉挛型脑瘫儿童的近期疗效。方法回顾性分析上海市儿童医院、...目的通过多中心临床研究,探讨新型神经电生理监测协议指导下微创入路选择性神经后根离断术(single-level laminectomy selective dorsal rhizotomy,SL-SDR)联合康复治疗对于痉挛型脑瘫儿童的近期疗效。方法回顾性分析上海市儿童医院、重庆医科大学附属儿童医院及湖南省儿童医院等于2015年11月至2021年8月期间收治的所有在新型神经电生理监测协议指导下行SL-SDR联合康复治疗,并获得至少6个月随访的痉挛型脑瘫患儿临床资料。收集患儿手术前及手术后末次随访时目标肌群肌张力、肌力、关节活动度、粗大运动功能分级系统(gross motor function classification system,GMFCS)分级及粗大运动功能66项(gross motor function measure-66 items,GMFM-66)评分情况,并评估患儿手术后运动功能变化。结果共有435例符合入组标准的痉挛型脑瘫患儿纳入研究,其中男249例,女186例;手术年龄(8.2±2.3)岁(3.2~15.5岁)。术前标记目标肌群2523组,受累关节2133个。术中离断神经后根(小根)数为(9.3±3.8)枚/例,其中3849枚(3849/4059,94.8%)符合离断50%神经截面积的标准。术后83例(83/435,19.1%)出现短期下肢浅感觉异常,经对症治疗1周后症状缓解,无一例出现长期并发症。患儿均获随访,随访时间(13.1±8.3)个月,目标肌群肌张力、肌力、关节活动度、GFMCS分级及GMFM-66评分均显著改善;术前GMFCS分级为Ⅱ、Ⅲ级者术后粗大运动功能改善情况优于Ⅳ、Ⅴ级者(134/309比8/105,P<0.01);术前GMFM-66评分≥50分者术后GMFM-66评分提升值高于术前CMFM-66评分<50分者[(7.65±3.39)分比(5.01±2.18)分,P<0.01];手术时年龄小于6岁者术后GMFCS分级改善情况好于年龄大于6岁者(106/249比36/165,P<0.01);术后GMFCS分级获改善患儿的平均年龄小于术后GMFCS分级无改善患儿的平均年龄[(6.1±1.0)岁比(11.6±1.7)岁,P<0.01]。结论新型神经电生理监测协议指导下SL-SDR联合康复治疗肢体痉挛瘫痪型脑瘫安全、有效,术后近期预后良好。展开更多
文摘目的探讨醒脑静注射液对缺糖缺氧再灌注(oxygen and glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)损伤诱导SH-SY5Y细胞焦亡的保护作用及机制。方法使用不同浓度醒脑静注射液预处理SH-SY5Y细胞,确定醒脑静注射液给药浓度;将SH-SY5Y细胞随机分为对照组、OGD/R组、醒脑静注射液+OGD/R组(10μL/mL醒脑静注射液)以及醒脑静注射液+OGD/R+核因子E2相关因子2(nuclear factor-E2 related factor 2,Nrf2)抑制剂组(10μL/mL醒脑静注射液+2μmol/mL ML385)共4组,每组实验进行6次(n=6),采用MTT比色法检测细胞存活率;采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbentassay,ELISA)法测定细胞上清液中白介素18(interleukin 18,IL-18)和白介素-1β(interleukin 1 beta,IL-1β)表达水平;采用Western blot检测GasderminD蛋白(GSDMD-N)、NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)、白介素1β前体(pro-interleukin 1,pro-IL-1β)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(caspase-1)、Nrf2以及凋亡相关斑点样蛋白(apoptosis-associated speck-like protein containing a CARD,ASC)表达情况;采用细胞乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)试剂盒法测定细胞内LDH表达变化情况,采用Hochest/PI染色法观察细胞凋亡情况。结果与对照组比较,OGD/R组细胞存活率[(40.16±3.39)%比(101.3±1.54)%]、Nrf2表达水平[(0.47±0.09)比(1.00±0.00)]明显降低;IL-1β[(46.55±9.59)pg/mL比(9.35±3.33)pg/mL]、IL-18[(35.39±10.63)pg/mL比(7.85±3.04)pg/mL]、LDH渗出率[(0.36±0.04)%比(0.18±0.08)%]、GSDMD-N[(2.24±0.36)比(1.00±0.00)]、NLRP3[(2.15±0.23)比(1.00±0.00)]、pro-IL-1β[(3.08±0.17)比(1.00±0.00)]、caspase-1[(2.20±0.32)比(1.00±0.00)]表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.001);与OGD/R组比较,醒脑静注射液组细胞存活率[(63.69±11.28)%比(40.16±3.39)%]、Nrf2表达水平[(0.89±0.11)比(0.47±0.09)]明显升高,LDH渗出率[(0.25±0.07)%比(0.36±0.04)%]、IL-1β[(33.30±8.60)pg/mL比(46.55±9.59)pg/mL]、IL-18[(21.72±7.50)pg/mL比(35.39±10.63)pg/mL]、GSDMD-N[(1.34±0.06)比(2.24±0.36)]、NLRP3[(1.25±0.18)比(2.15±0.23)]、pro-IL-1β[(1.65±0.30)比(3.08±0.17)]、caspase-1[(1.23±0.15)比(2.20±0.32)]表达水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与醒脑静组比较,醒脑静+Nrf2抑制剂组Nrf2蛋白表达水平[(0.38±0.12)比(0.89±0.11)]明显降低,LDH渗出率[(0.36±0.07)%比(0.25±0.07)%]、IL-1β[(53.28±6.37)pg/mL比(33.30±8.60)pg/mL]、IL-18[(49.56±8.87)pg/mL比(21.72±7.50)pg/mL]、GSDMD-N[(1.75±0.27)比(1.34±0.06)]、NLRP3[(2.22±0.17)比(1.25±0.18)]、pro-IL-1β[(3.54±0.50)比(1.65±0.30)]、caspase-1[(2.36±0.28)比(1.23±0.15)]蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Nrf2抑制剂可逆转醒脑静注射液对OGD/R损伤诱导SH-SY5Y细胞焦亡的保护作用;醒脑静注射液通过上调Nrf2蛋白表达,抑制OGD/R损伤诱导的SH-SY5Y细胞焦亡。
文摘目的通过多中心临床研究,探讨新型神经电生理监测协议指导下微创入路选择性神经后根离断术(single-level laminectomy selective dorsal rhizotomy,SL-SDR)联合康复治疗对于痉挛型脑瘫儿童的近期疗效。方法回顾性分析上海市儿童医院、重庆医科大学附属儿童医院及湖南省儿童医院等于2015年11月至2021年8月期间收治的所有在新型神经电生理监测协议指导下行SL-SDR联合康复治疗,并获得至少6个月随访的痉挛型脑瘫患儿临床资料。收集患儿手术前及手术后末次随访时目标肌群肌张力、肌力、关节活动度、粗大运动功能分级系统(gross motor function classification system,GMFCS)分级及粗大运动功能66项(gross motor function measure-66 items,GMFM-66)评分情况,并评估患儿手术后运动功能变化。结果共有435例符合入组标准的痉挛型脑瘫患儿纳入研究,其中男249例,女186例;手术年龄(8.2±2.3)岁(3.2~15.5岁)。术前标记目标肌群2523组,受累关节2133个。术中离断神经后根(小根)数为(9.3±3.8)枚/例,其中3849枚(3849/4059,94.8%)符合离断50%神经截面积的标准。术后83例(83/435,19.1%)出现短期下肢浅感觉异常,经对症治疗1周后症状缓解,无一例出现长期并发症。患儿均获随访,随访时间(13.1±8.3)个月,目标肌群肌张力、肌力、关节活动度、GFMCS分级及GMFM-66评分均显著改善;术前GMFCS分级为Ⅱ、Ⅲ级者术后粗大运动功能改善情况优于Ⅳ、Ⅴ级者(134/309比8/105,P<0.01);术前GMFM-66评分≥50分者术后GMFM-66评分提升值高于术前CMFM-66评分<50分者[(7.65±3.39)分比(5.01±2.18)分,P<0.01];手术时年龄小于6岁者术后GMFCS分级改善情况好于年龄大于6岁者(106/249比36/165,P<0.01);术后GMFCS分级获改善患儿的平均年龄小于术后GMFCS分级无改善患儿的平均年龄[(6.1±1.0)岁比(11.6±1.7)岁,P<0.01]。结论新型神经电生理监测协议指导下SL-SDR联合康复治疗肢体痉挛瘫痪型脑瘫安全、有效,术后近期预后良好。