两种试剂盒提取大鼠容受期少量宫腔液胞外囊泡的比较

容受期宫腔液对于胚胎建立早期妊娠起着关键作用,宫腔液内含的胞外囊泡(extracellular vesicles,EVs)可能是子宫内膜与胚胎之间交流的新模式。目前为止,仍然没有一种提取方法能同时保证EVs的含量、纯度和生物活性。传统的超速梯度离心法对设备和样本量要求高,耗时长,因此寻求在少量样本中高效提取高纯度EVs的新方法十分重要。本研究对同一份大鼠容受期宫腔液样本分别采取PEG沉淀和亲和膜离心柱两款试剂盒进行EVs提取,使用透射电镜、Western-blot和动态光散射进行形态、表面蛋白质和粒径分布的鉴定,并对其内容物RNA进行了浓度和片段分布比较。结果显示,两种试剂盒都可以成功从少量的宫腔液样本中分离得到EVs,且效率较传统离心法大大提高,但均无法完全区分其亚群;亲和膜离心柱提取法得到的EVs浓度更高,RNA片段集中在20~40 nt,对于开展后续mi RNA建库测序分析具有更好效果。

血清与卵泡液25-羟维生素D水平与体外受精-胚胎移植妊娠结局的相关性研究

目的研究血清和卵泡液中25-羟维生素D[25(OH)D]水平与体外受精/卵胞质内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)妊娠结局的关系。方法2017年8月至2018年6月期间前瞻性队列研究在中南大学湘雅医院生殖中心因输卵管因素接受IVF/ICSI-ET治疗的201例不孕症患者的临床资料。血清和卵泡液25(OH)D水平的cut-off值采用最小化P值的方法确定。分析血清与卵泡液25(OH)D水平相关性;分组比较血清或卵泡液的25(OH)D水平与年龄、体质量指数(BMI)、既往IVF史、人绒毛膜促性腺激素(hCG)注射日子宫内膜厚度、促性腺激素(Gn)、孕酮、雌二醇、获卵数、MII卵数、正常受精率、第3日(D3)优质胚胎率及与胚胎着床率、临床妊娠率及早期流产率间有无关联。将妊娠结局的影响因素进行二分类logistic回归分析。结果①血清25(OH)D水平为16.4(13.1,20.2)μg/L,卵泡液25(OH)D水平为15.3(11.6,20.3)μg/L,两者比较呈显著直线相关(r=0.78,P<0.001)。②血清25(OH)D低水平组的临床妊娠率(33.87%)、胚胎着床率(25.44%)低于高水平组(52.52%,P=0.014;40.24%,P=0.006);卵泡液25(OH)D低水平组的临床妊娠率(39.39%)、胚胎着床率(30.22%)低于高水平组(53.92%,P=0.039;40.98%,P=0.032),卵泡液低水平组的早期流产率(17.95%)明显高于高水平组(7.27%,P=0.002),差异有统计学意义。③二分类logistic回归分析显示血清和卵泡液25(OH)D水平与临床妊娠结局相关(P=0.016;P=0.020)。结论血清25(OH)D水平高于卵泡液25(OH)D水平,呈显著直线相关性;血清和卵泡液25(OH)D水平与IVF/ICSI-ET妊娠结局相关。