液相芯片技术快速检测2型糖尿病患者相关降糖药物基因多态性的方法学建立

目的建立一种可同时、快速检测2型糖尿病患者降糖药相关药物基因多态性的液相芯片检测系统。方法根据7个目的基因的rs号,在Genbank中查找其靶位点附近碱基序列(目的基因包括磺脲类受体1,转录因子7类似物2,胰岛素受体底物1,过氧化物酶体增殖物激活受体γ,有机阳离子转运蛋白与多药和有毒化合物排出家族,有机阴离子转运蛋白家族成员1B1等),以PrimerPlex软件设计等位基因特异性引物,Primer6.0软件设计含检测位点的PCR引物,通过多重PCR扩增,等位基因特异性引物延伸(ASPE),MagPlex~Tag微球杂交,液相芯片系统Luminex 200检测荧光信号,确定基因型,优化反应体系并以5份代表性标本进行方法学评价。收集2019年1月~12月东莞市厚街医院新诊2型糖尿病患者血液样本115例,采用建立的系统检测上述7个靶位点,并随机选取25例与测序结果比较。结果7个目标基因经PCR扩增,产物电泳成像后清楚可见7条目标条带,无非特异性条带;经优化ASPE杂交条件,选择退火温度55℃,Biotion~dCTP浓度与dCTP浓度的比值为3∶1,37℃孵育45 min时检测效果最佳;临床样本检测结果显示:纯合子荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)比率均>0.9或<0.1,杂合子MFI比率在0.4~0.6之间。纯合子MFI比率批内批间CV在0.9%~3.3%和2.1%~4.6%,而杂合子则在2.9%~7.3%和5.2%~11.2%;DNA最低检测限为0.75ng;25例样本的检测结果与测序结果完全一致,准确度100%。结论该研究成功建立了一种新的液相芯片检测系统,高效便捷,能同时检测7个目的基因型,满足临床的需求。

医院侵袭性真菌感染的菌种分类及临床分布

目的了解医院内侵袭性真菌感染的流行病学特点,为减少真菌感染提供实验依据。方法回顾性分析2006-2009年住院患者真菌培养阳性的菌种分类、标本种类、疾病种类、科室分布等。结果 4年间共检出侵袭性真菌1 945株,总的检出率为17.0%,2006-2009年真菌的检出率分别为14.6%、15.7%、16.8%和21.2%。真菌种类以念珠菌属为主,占92.4%,以白色念珠菌居多,占60.5%;丝状菌占7.6%。检出的1 945株真菌主要分离自痰、尿和大便标本。真菌感染患者主要来自呼吸科、心血管内科、传染科、神经内科和ICU等科室。结论侵袭性真菌的检出率逐年升高,白色念珠菌仍是医院内侵袭性真菌感染的主要病原菌,非白色念珠菌和毛霉菌属引起的感染不断增加。

液相芯片技术快速检测CYP2C9、CYP2C19、CYP4F2、VKORC1及ABCB1基因多态性

目的基于液相芯片技术,建立一种可同时、快速检测细胞色素P4502C9(CytoChrome P4502C9,CYP2C 9)、CYP2C19、CYP4F2、维生素K环氧化物还原酶(vitamin K epoxide reductase,VKORCI)及ATP结合盒亚家族B成员l(ATP-binding cassette subfamily B memberl,ABCB1)等与华法林和氯吡格雷相关药物基因多态性的方法。方法方法学的建立。从Genbank中查找与华法林和氯吡格雷药物相关的8个靶位点附近基因序列,设计特异性引物和探针;通过多重PCR扩增,等位基因特异性引物延伸(allele specific primer extension,ASPE),MagPlex-Tag微球杂交,经液相芯片系统Luminex 200检测荧光信号,确定基因型;优化反应体系并进行方法学评价。收集2017年6月至2018年12月东莞市厚街医院抗血栓治疗患者血液样本,共260例,采用建立的方法检测其8个靶位点,并与测序结果比较。结果本方法检测260例样本结果显示:纯合子荧光强度中位值(median fluorescence intensity,MFI)比率均>0.9或<0.1,杂合子MFI比率均在0.3〜0.6之间;各基因型批内和批间变异系数分别低于6.4%和10.9%;所需DNA最低检测限为0.75ng;260例样本的检测结果与测序结果完全一致。结论本研究采用液相芯片技术,成功建立了快速检测华法林和氯吡格雷相关药物基因型的方法。