2009-2019年湖南省肾综合征出血热病例及宿主动物监测分析

目的掌握湖南省肾综合征出血热病例的流行特征和临床特点,为防治工作提供参考依据。方法采用描述性流行病学方法分析2009-2019年湖南省肾综合征出血热病例临床和流行病学特征以及宿主动物监测情况。结果2009-2019年湖南省共报告肾综合征出血热病例7001例,年均报告发病率为0.95/10万。患者以男性青壮年农民为主,各市州病例发病日期距离就诊日期中位数集中在3~5 d,就诊日期距离诊断日期中位数集中在0~2 d。病例症状以轻型、中型为主(82.45%)。临床症状和体征以发热(93.49%)、乏力(91.57%)、起病急(85.39%)等多见。相关暴露因素中,主要有鼠或鼠排泄物接触史。2009-2019年各监测点平均鼠密度为3.22%,室内鼠密度3.47%高于野外(1.77%,χ^(2)=648.794,P=0.000)。鼠肺标本HFRS总抗原阳性率1.75%,4个监测点HFRS的抗原阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=29.445,P=0.000),双峰县鼠病毒携带率最高,邵东县鼠病毒携带率最低。结论近年来湖南省出血热疫情出现上升趋势,汉城型和汉滩型混合分布,患者临床表现不典型,就诊不够及时,需要加强健康教育工作,提高民众自我保护和及时就诊意识。

湖南省永州市婴幼儿肠道腺病毒感染的调查

目的 了解肠道腺病毒（EAdv）在湖南省永州市腹泻患儿中的感染情况.方法 采用聚合酶链反应技术对2008年3月至2010年12月在永州市收集的324例5岁以下腹泻患儿标本进行EAdv核酸检测.结果 在324例腹泻患儿中检出腺病毒阳性标本16例,阳性率4.9%,腹泻的发病出现春季（4月）和秋季（10月）两个季节性升高现象,与非流行季的检出率相比,差异有统计学意义（P＜0.05）.腹泻患儿以24月龄内小儿多见,占患儿总数的95.4%（309/324）.EAdv感染均在24月龄以内,其中12～17月龄EAdv阳性率最高为7.6%（7/92）;男女性别比例为1.67∶1,EAdv发病男女性别间差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 EAdv感染是导致永州市腹泻患儿的重要病原之一,EAdV主要威胁的人群为24月龄以下婴幼儿,尤其12～17月龄的婴幼儿.

呼吸道感染耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌分子流行病学及临床特征

目的分析呼吸道感染耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌(CRE)主要耐药机制、分子流行病学特征及其临床特征。方法收集2018年湖南省人民医院/湖南师范大学附属第一医院非重复呼吸道感染CRE 114株,所有菌株均用VITEK2 Compact全自动微生物分析系统进行鉴定及体外药敏试验;改良碳青霉烯灭活试验进行表型试验;PCR检测碳青霉烯酶基因并进行多位点序列分型,并用χ^2检验和Logistic回归对临床数据进行统计学分析。结果114株非重复呼吸道感染CRE中肺炎克雷伯菌108株,大肠埃希菌2株,阴沟肠杆菌4株。114株CRE中85株检出产碳青霉烯酶,占74.56%;其中肺炎克雷伯菌以KPC-2型为主(73.15%);大肠埃希菌未检测出酶基因,1株阴沟肠杆菌检出NDM-1;肺炎克雷伯菌共分出6种ST型,以ST11为主要表型,其次为ST17;大肠埃希菌分出1种ST型,为ST167;4株阴沟肠杆菌为ST592。114株CRE分为产酶株与非产酶株,运用χ^2检验和Logistic回归分析显示,早期的碳青霉烯类抗菌药物使用者所占比例在产酶株与非产酶株中差异有统计学意义(P<0.05),且其是产酶株的危险因素(OR:3.722,95%CI:1.529~9.057)。结论产碳青霉烯酶为CRE耐药的主要原因,ST11为肺炎克雷伯菌的主要流行基因型,早期的碳青霉烯类抗菌药物暴露是产酶株的危险因素。

湖南省815株沙门菌血清型和耐药性分析

目的 了解湖南省815株沙门菌的血清型和耐药性,为沙门菌感染防控提供参考。方法 对从2020—2021年湖南省食源性疾病腹泻患者粪便标本和食品标本分离出的沙门菌进行血清分型,采用微量肉汤稀释法进行药敏试验。结果815株沙门菌分离出10个血清群39种血清型,646株人源性菌株中B群388株,占60.06%;血清型以鼠伤寒及变种沙门菌为主,364株占56.35%;169株食源性菌株中B群61株,占36.09%;血清型以伦敦沙门菌为主,26株占15.38%。人源性耐药株597株,耐药率为92.41%,对氨苄西林耐药率较高,为81.58%;食源性耐药株140株,耐药率为82.84%,对四环素耐药率较高,为72.78%。两种来源的沙门菌对亚胺培南均敏感。多重耐药株577株,其中人源性多重耐药株490株,食源性多重耐药株87株。结论 2020—2021年湖南省815株从食源性疾病腹泻患者粪便标本和食品标本分离出的沙门菌血清型以鼠伤寒及变种沙门菌和伦敦沙门菌为主,多重耐药情况严重。

湖南省2008—2017年手足口病病原学与流行特征分析

目的分析湖南省2008—2017年手足口病的流行特征和病原谱的构成与变化,为完善手足口病防控策略和疫苗研发提供依据。方法采用描述性流行病学方法对手足口病监测资料和病原学检测结果进行分析。使用实时荧光定量PCR方法对手足口监测病例标本进行肠道病毒核酸检测与分型。用RD和Hep-2细胞对肠道病毒核酸检测阳性标本进行病毒分离,阳性分离毒株采用RT-PCR方法对VP1编码区扩增并进行核苷酸序列测定和分析。结果湖南省2008—2017年共报告手足口病例1255530例,其中重症病例10097例,死亡394人。年均发病率为190.38/10万。报告发病率呈上升趋势,重症数和死亡数呈下降趋势。发病曲线呈一大一小的双峰分布,发患者群以5岁以下儿童的散居儿童和幼托儿童为主。肠道病毒A组71型(enterovirus A71,EV-A71)、柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CV-A16)和非EV-A71、CV-A16的其他EV阳性标本分别占实验室诊断病例的33.29%,20.04%和46.67%。结论是湖南省手足口病流行有明显季节性和人群性。重症和死亡病例中EV-A71为优势病原体。不同年份有不同优势病原体引起手足口病流行,2008—2012年主要为EV-A71和CV-A16,2013年后,非EV-A71和非CV-A16的其他肠道病毒开始成为优势病原体。

湖南省2014-2017监测年度流行性感冒哨点监测病原学结果分析

目的通过分析湖南省2014年第14周~2017年第13周流行性感冒(流感)哨点监测病原学检测结果,研究流感的流行特征和规律。方法全省14个市州的23家哨点医院,每家医院每周采集20例流感样病例的咽拭子标本,标本采用病毒分离方法检测,并采用血凝试验和血凝抑制试验进行病毒鉴定与分型,检测结果进行描述分析并使用统计学软件进行计算。结果 2014-2017年湖南省共检测流感样病例标本78 909份,分离并鉴定出流感毒株4 061株,检测阳性率为5.15%。毒株的型别分布为:H3N2亚型占有最高比例,占42.28%(1 717/4 061),其次为B型Victoria系和甲型H1N1亚型,分别占21.08%(856/4 061)和20.46%(831/4 061)。流感确诊病例年龄组构成比最多的为1~4岁组,占35.34%(1 434/4 058)。男性确诊病例多于女性,男女性别比1.27∶1(2 270∶1 788)。时间分布上一共主要有5个流行高峰出现。三年检测阳性率最高的市州分别是长沙(9.75%)、株洲(11.59%)和湘潭(8.12%)。结论湖南省2014-2017年度流感流行的季节性特征明显,每年优势毒株不同,15岁以下的少年儿童可能为流感的高发群体。

湖南省B群脑膜炎奈瑟菌药物敏感性及分型

近年来,湖南省流行性脑脊髓膜炎（简称流脑）流行以C群脑膜炎奈瑟菌（Nm）为主〔1〕,2009年2月,首次从流脑患者身上分离出B群脑膜炎奈瑟菌,2010年在健康人群流脑咽拭子中,同时分离到4株B群脑膜炎奈瑟菌。为掌握湖南省B群脑膜炎奈瑟菌的分子生物学特征,为有效的预防和控制其流行提供依据,

长沙地区淋病奈瑟菌的耐药性及耐药性质粒分型研究

目的:了解长沙地区淋病奈瑟菌对抗生素的敏感性以及耐青霉素和耐四环素性质粒的流行情况。方法:采用纸片扩散法检测80株淋病奈瑟菌对7种抗生素的敏感性;碱裂解法分析产青霉素酶的淋病奈瑟菌(PPNG)株及耐四环素的淋病奈瑟菌(TRNG)株的质粒图谱;PCR扩增tetM基因片段,并经测序分析其基因型。结果:在测定的7种抗生素中,耐药性最高的为环丙沙星,耐药率为86.25%,敏感性最高的为大观霉素,为100%;PPNG和TRNG的检出率分别为50.0%和27.5%;40株PPNG株质粒电泳后发现除1株为非洲型耐青霉素质粒外,其余均为亚洲型耐青霉素质粒;22株TRNG株的PCR产物电泳条带均在约443bp处,取典型株经DNA测序分析与荷兰型tetM基因具有96%～98%的同源性。结论:质粒介导的淋病奈瑟菌对青霉素和四环素的耐药已普遍存在,本次研究中介导的耐青霉素和耐四环素质粒分别以亚洲型和荷兰型为主。

A型流感病毒对肺巨噬细胞自噬的影响及麻杏石甘汤含药血清的干预作用

目的探讨麻杏石甘汤含药血清对A型流感病毒诱导的肺巨噬细胞自噬的干预作用。方法以A型流感病毒感染的RAW264. 7细胞为研究对象,分为麻杏石甘汤含药血清低、中、高剂量组、奥司他韦组、3-MA+流感病毒组、流感病毒组、3-MA组、雷帕霉素组、空白组,干预12 h后,分别用激光共聚焦显微镜和透射电镜技术检测细胞自噬情况;Western blot法检测自噬标志蛋白LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ表达。结果麻杏石甘汤含药血清能不同程度抑制流感病毒诱导的细胞自噬标志蛋白LC3的膜聚集,抑制细胞内自噬小体和自噬溶酶体的增加,以及LC3-Ⅱ的表达和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值,且呈现一定的量效关系。结论麻杏石甘汤可能通过抑制A型流感病毒诱导的细胞自噬,最终调控A型流感病毒的致病作用。

湖南省食源性环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药汤卜逊沙门菌分子特征研究

目的分析湖南省人源和水产动物源环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药汤卜逊沙门菌的分子流行特征。方法对湖南省食源性疾病散发病例粪便样本和水产品样本中分离的汤卜逊沙门菌进行环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药菌株的筛选与鉴定,使用肉汤稀释法对11种抗菌药进行体外药敏试验,并利用全基因组测序技术分析菌株的耐药机制以及进化关系。结果从粪便样本和水产品样本中共分离到19株汤卜逊沙门菌,其中9株菌对环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药。进一步分析发现8株菌检出IncC质粒,携带质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因qepA-qnrS1、β-内酰胺酶耐药基因bla_(CMY-2)和大环内酯类耐药基因mph(A);1株检出IncR质粒,携带qnrB4-aac(6′)-Ib-cr、bla_(OXA-10)和mph(A)耐药基因。遗传环境分析发现qnrS1、qepA、mph(A)和bla_(CMY-2)基因可能分别通过插入序列ISKra4、IS91、IS6100和ISEcp1整合到耐药菌的基因组上。基于核心基因组生成的系统发生树表明,人源和水产动物源环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药汤卜逊沙门菌属于同一进化分支,具有较近的遗传进化关系。结论湖南省人源和水产动物源样本中检出对环丙沙星-头孢噻肟-阿奇霉素共耐药汤卜逊沙门菌,提示此类多重耐药菌已在人和水产动物之间传播。

基于TLR4-MyD88-TRAF6信号通路的麻杏石甘汤抗A型流感病毒感染小鼠所致的病毒性肺损伤研究

目的探索Toll样受体4(TLR4)在A型流感病毒所致肺组织损伤中的影响,并进一步探讨麻杏石甘汤的干预作用。方法以A型流感病毒滴鼻感染WT型小鼠为研究对象,实验设麻杏石甘汤低、中、高剂量(1.4、2.8、5.6 g/kg)组、奥司他韦(21.63 mg/kg)组、模型组和对照组,ig给予相应药物5 d后,处理动物。常规法检测小鼠体质量,计算肺指数、脾指数、胸腺指数,观察肺组织病理变化,ELISA法检测肺泡灌洗液中炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-6(IL-6)的量,real-time PCR(RT-PCR)法和Western blotting法检测肺组织中TLR4、My D88、TRAF6m RNA和蛋白的表达。结果麻杏石甘汤能上调A型流感病毒感染小鼠的体质量、脾指数、胸腺指数,改善肺组织病理损伤,降低肺泡灌洗液中促炎因子水平,下调肺指数和肺组织中My D88、TRAF6 m RNA和蛋白表达量,且存在一定的量效关系。其中麻杏石甘汤中、高剂量组的疗效与奥司他韦接近。结论麻杏石甘汤作为有效的抗流感病毒中药复方,能有效地减轻肺部炎症、保护免疫器官、调节细胞因子平衡,其可能的作用机制是通过抑制TLR4-My D88-TRAF6信号通路的激活而缓解A型流感病毒感染小鼠所致的肺损伤。

2009—2021年中国九省份发热呼吸道症候群监测病例中常见病毒感染情况分析

目的了解我国九省份发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中常见病毒感染情况。方法研究资料来源于中国疾病预防控制中心"传染病监测技术平台信息管理系统"中九省份(安徽、北京、广东、河北、湖南、吉林、山东、陕西和新疆)2009年1月至2021年6月间的FRS病例监测数据,最终将具有8种病毒[人流感病毒(HIFV)、人呼吸道合胞病毒(HRSV)、人腺病毒(HAdV)、人副流感病毒(HPIV)、人鼻病毒(HRV)、人偏肺病毒(HMPV)、人冠状病毒(HCoV)以及人博卡病毒(HBoV)]核酸检测结果的8 243例FRS监测病例纳入研究。采用χ2检验/Fisher确切概率法分析不同年龄组、不同地区和不同季节病例的病毒检出率差异。结果 8 243例FRS病例年龄M(Q1,Q3)为4(1,18)岁,<5岁以下儿童占56.56%(4 662例);男性占58.1%(4 792例);病例主要来源于门、急诊病例和住院病例,其中门急诊病例数为2 043例,住院病例数为6 200例。FRS病例的病毒检出率从高到低依次为HRSV、HIFV、HPIV、HRV、HAdV、HMPV、HCoV和HBoV。有524例病例同时检出两种及两种以上病毒,占病毒检测阳性病例数的15.66%。不同年龄组中病毒检出率的差异具有统计学意义(均P<0.05),<5岁以下儿童的病毒检出率较高(49.96%)。南方任一病毒阳性检出率高于北方(P<0.001)。FRS病毒阳性病例全年均有检出,HRSV检出率在秋、冬季较高,HIFV检出率在冬季较高,HMPV检出率在冬、春季较高;而HPIV、HRV、HCoV和HBoV的检出率在夏、秋季节较高,而HAdV在不同季节检出率的差异无统计学意义。与2009—2019年相比,2020—2021年的任一病毒阳性检出率有所下降,由原来的41.37%下降至37.86%;HIFV检出率由原来的10.62%急剧下降至1.37%;HPIV检出率由原来的8.24%下降至5.88%。而HRV和HBoV的检出率则由原来的5.43%和1.79%,分别上升至9.67%和3.19%。结论 2009—2021年中国九省份FRS病例以HRSV和HIFV感染较为常见,8种常见呼吸道病毒的流行特征存在年龄、地区和季节差异。

2009年至2021年我国9省份发热呼吸道症候群病例中人偏肺病毒感染情况及流行特征分析

目的阐明我国发热呼吸道症候群(FRS)监测病例中人偏肺病毒(HMPV)感染情况及病毒流行特征,为我国HMPV引起呼吸道相关疾病的临床诊治和疾病防控提供重要基线数据。方法选取2009年1月至2021年6月在我国9省份(北京、河北、吉林、山东、陕西、新疆、安徽、广东、湖南)的FRS监测病例作为研究对象。收集病例临床、流行病学信息并采集呼吸道标本,应用实时荧光定量PCR对样本进行HMPV核酸检测。结果共11660例样本进行了HMPV检测,HMPV阳性病例数为296例,阳性检出率为2.54%。其中218例病例为单一HMPV感染,78例病例同时检出了含HMPV 2种或2种以上病毒,占HMPV阳性病例数的26.35%。<5岁儿童是HMPV主要发病人群,检出率为3.10%。在<5岁儿童中,含HMPV混合感染中肺炎病例的比例高于单一HMPV感染病例。HMPV全年均可检出,病毒流行主要以冬、春季为主,3月份是HMPV流行高峰。结论HMPV是引起儿童急性呼吸道感染的重要病原之一,病毒流行具有明显的季节性。HMPV可引起单独感染,也可与其他呼吸道病毒合并感染,合并HMPV感染可能增加儿童肺炎的风险。

Sj-UV-致弱尾蚴单链抗体库的构建及筛选

目的构建和鉴定日本血吸虫(Schistosoma japonicum,Sj)紫外线(UV)-照射致弱尾蚴单链抗体(single chain Fv,ScFv)表达文库,并以此作为高通量的库源筛选出针对有潜在保护力的Sj尾蚴66-68 kDa抗原(Schistosoma japonicum cercariae antigen 66-68kDa,SCA66-68kDa)的单链抗体。方法选择最佳紫外灯照射条件,构建UV-致弱尾蚴小鼠模型,通过其血清被动转移实验证实其是否具有抗血吸虫攻击感染的保护效果;随后提取该小鼠脾脏mRNA,利用噬菌体展示技术构建UV-照射致弱尾蚴单链抗体库,并从库容量、多样性等方面进行鉴定;运用直接菌落挖集法以SjSCA66-68kDa筛选该抗体库,获得阳性克隆进行蛋白表达,再与SCA进行反应,验证其与SjSCA66-68kDa反应的特异性。结果构建UV-致弱尾蚴动物模型中的血清转移至小鼠体内得到42.5%的减虫率,显著高于日本血吸虫感染血清转移组的减虫率(28.0%);日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库的库容量测定为1.9×108,重组率为100%;运用抗原直接菌落挖集法筛选共获得6个SCA66-68kDa阳性克隆,经SDS-PAGE、Western-blot分析结果显示可溶性ScFv获得了正确表达,且与相应抗原SjSCA66-68kDa特异性结合,证实成功获得了特异性抗SjSCA66-68kDa单链抗体。结论成功构建了高效日本血吸虫UV-致弱尾蚴单链抗体库,从该库筛选共获得6个阳性克隆,均能诱导表达SjSCA66-68kDa特异性可溶性单链抗体。

2017年中国即食食品中单核细胞增生李斯特菌的分子流行病学特征

目的分析我国即食食品中单核细胞增生李斯特菌的分子流行病学特征。方法将2017年食品安全风险监测即食食品中分离的单核细胞增生李斯特菌作为研究菌株,共239株,分离自27个省份。对菌株进行全基因组测序,分析其谱系、克隆群(CC)、序列分型(ST)和血清群;通过VFDB和BIGSdb‐Lm数据库获得其毒力基因分布;采用微量肉汤稀释法检测菌株对8种抗生素的敏感性;采用核心基因组多位点序列分型方法(cgMLST)进行分子分型。结果实验菌株分属在3个谱系,以谱系Ⅱ为主,共155株(64.9%);血清群以Ⅱa为主,共133株(55.6%);分为23个CC型,以及1个未分CC型的ST619,其中CC8、CC101和CC87为优势CC型,共占49.4%(118株);仅4.6%(11株)的菌株携带耐药基因,主要为甲氧苄啶耐药基因(7株,2.9%)。所有菌株均携带单核细胞增生李斯特菌毒力岛(LIPI)1,携带LIPI‐3和LIPI‐4的菌株分别占13.8%(33株)和14.2%(34株),ST619同时携带LIPI‐3和LIPI‐4。51.5%(123株)的菌株携带应激生存岛(SSI)1,10株CC121菌株均携带SSI‐2。核心基因组多位点序列分型方法能将不同谱系、血清群和CC型的菌株明显分开,共分为24个亚群,与CC型基本保持一致。结论我国即食食品中菌株以Ⅱa型血清群为主,CC8、CC101和CC87为优势CC型,其中,CC87为流行性高毒菌株。基于全基因组测序的分型方法cgMLST分辨力高,可用于我国食源性疾病的监测和暴发识别。

我国人副流感病毒3型HN基因的遗传变异及进化特征分析

目的基于血凝素-神经氨酸酶蛋白(hemagglutinin-neuraminidase,HN)基因分析我国流行人副流感病毒3型(human parainfluenza virus 3,HPIV3)的基因变异规律和进化特征。方法采用多重荧光PCR方法对2007—2020年5个省市(北京、浙江、安徽、河南、湖南)急性呼吸道感染病例的咽拭子标本进行常见病原体核酸筛查,对HPIV3阳性标本进行HN基因序列测定,与GenBank数据库的国外和我国10个省的HPIV3流行代表株HN基因序列进行比对,应用多种生物信息学方法开展分子进化分析。结果本研究期间从5个省市共获得49株HPIV3的HN基因序列,核苷酸同源性在96.6%~100%之间,其中48株为C3基因亚型,1株为C5基因亚型。系统进化分析显示,我国12个省市在2003—2020年间存在C1、C3和C5基因亚型的毒株共流行,毒株间核苷酸和氨基酸同源性分别为95.4%~99.8%和97.9%~100%,其中C3是我国的优势流行基因亚型,分属于C3a、C3b、C3c、C3e和C3f进化分支,以C3f的传播范围和流行时间最为广泛。对C3基因亚型的进化分析显示,其最近共同祖先形成时间(tMRCA)可追溯到1990年,有效群体规模在2002—2010年间逐渐扩张而后趋于平稳;C3各进化分支HPIV3的HN基因进化速率在3.69×10^(-4)~5.82×10^(-4)替换/位点/年之间;C3基因亚型毒株HN蛋白共享N308、N351、N485和N523潜在N-糖基化位点,选择压力以负向选择为主。结论C3基因亚型是我国的本土优势HPIV3流行型别,形成了广泛传播和持续流行态势,并在流行过程中形成多个进化分支共同循环。