辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制的实验研究

目的观察辛伐他汀对氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlow-densitylipoprotein，OX-LDL）诱导的内皮细胞氧化应激损伤的保护作用，并初步探讨其机制。方法体外分离培养人脐静脉内皮细胞后分为6组，分别是对照组、OX-LDL处理组（OX．LDL组）、辛伐他汀溶剂＋OX-LDL组（溶剂对照组），辛伐他汀0．1μmoL／L＋OX-LDL组、辛伐他汀0．5μmol／L＋OX-LDL组和辛伐他汀1．0μmol／L＋OX-LDL组。OX-LDL处理组直接给予OX-LDL（120¨μg/ml）刺激24h。辛伐他汀＋OX-LDL组分别采用不同浓度的辛伐他汀（O．1、0．5和1．0μmoL）预先孵育人脐静脉内皮细胞30min，再给予OX-LDL（120μ/m1）刺激24h。荧光分光光度法测定胞内活性氧簇（ROS）的水平。化学发光法测定胞内还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NADPH氧化酶）活性。RT-PCR测定NADPH氧化酶亚基p22pbox、gp91pbox、p47phox、和p67PhmRNA的表达水平。免疫共沉淀以及免疫印迹方法测定p47phox与p22pbox（p47phox／p22phox）的蛋白结合量。结果OX-DL组ROS水平和NADPH氧化酶活性均显著高于对照组[分别为1．507±0．048比0．442±0．021（P〈0．01）和（87．90±10．34）RLU·S。-1·mg-1比（38．52±4．20）RLU·s～·mg。（P〈0．01）]，p22phox、gp91phox、p47phox和p67ph和mRNA水平亦均显著高于对照组（P均〈0．01），p47phox／p22phox蛋白结合量亦显著高于对照组[（292±12）％比100％，P〈0．01]。辛伐他汀不同浓度＋OX-LDL各组ROS水平和NADPH氧化酶活性随着辛伐他汀浓度的增加而降低，组间差异均有统计学意义（P均〈0．05），且均低于OX-LDL组（P〈0．05或0．01）。辛伐他汀1．0p,molμmol/L＋OX-LDL组p22ph“、gp91phox、p47ph“和p67pn“mRNA水平均显著低于OX．LDL组（P均〈0．05），p47phox／p22phox蛋白结合量亦显著低于OX-LDL组[（117±9）％比（292±12）％，P〈0．01]。结论辛伐他汀可能通过降低NADPH氧化酶活性的途径保护OX-LDL诱导的内皮细胞氧化应激损伤，其机制可能与下调NADPH氧化酶亚基mRNA表达水平和抑制p47phox／p22phox蛋白结合有关。

桔梗皂苷D对人肝癌细胞株放射敏感性的影响及其相关机制

目的研究桔梗皂昔D对人肝癌细胞株HepG2与SMMC-7721细胞放射敏感性的作用，并探讨其相关作用机制。方法四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度不同处理时间桔梗皂苷D对细胞存活率的影响；预先给予细胞5ug／ml桔梗皂苷D处理24h，经过不同照射剂量的X射线照射，细胞克隆形成实验检测桔梗皂苷D对细胞的辐射增敏作用，计算准域剂量（Dq），平均致死剂量（DO），外推数（N），放射增敏比SER及不同照射剂量作用下的存活分数（SF），并依据多靶单击型模型公式SF=1-（1-e-D/D0）N拟合细胞存活曲线，流式细胞仪检测细胞周期的分布；Western blot检测细胞中磷酸化磷脂酰肌醇激酶（pPI3k）、磷酸化蛋白激酶（pAkt）、核因子（NF）-κB与磷酸化核因子抑制蛋白（pIκBα的蛋白表达变化。据资料不同分别单因素方差分析（ANOVA）、t检验或LSD检验进行统计学分析。结果桔梗皂苷D降低两种细胞存活率，且该抑制作用呈时间与剂量依赖性，HepG2细胞24h的IC50为（24．2±0．61）μg／ml，48h的IC50为（7．68±0．46）ug／ml；SMMC-7721细胞24h的IC50为（23．8±0．57）ug／ml，48h的IC50为（8．63±0．86）μg／ml；桔梗皂苷D联合放射处理后，Dq（P=0．002）、DO（P=0．002）和N值（P=0．003）均显著降低，细胞存活曲线明显左移，放射增敏比SER分别为1．347±0．04（HepG2）与1．418±0．05（SMMC-7721）；此外，桔梗皂苷D显著降低放射引起的两种细胞周期G2／M期比例的上升，以及pPI3k（P=0．002）、pAkt（P=0．003）与NF—κB（P=0．002）蛋白表达的增加，pIκBα（P=0．003）蛋白的表达降低。结论桔梗皂苷D增加人肝癌细胞株HepG2与SMMC-7721细胞的放射敏感性，其机制可能与桔梗皂苷D增强发射线对细胞生长抑制作用、抑制PI3k／Akt及NF-KB通路的激活有关。