比较盐酸羟考酮和吗啡对肝癌模型大鼠术后镇痛效应和免疫细胞的影响

目的比较盐酸羟考酮和吗啡对肝癌大鼠的术后镇痛效果及免疫细胞功能的影响。方法给予大鼠50 mg·kg^(-1)0.19%的二乙基亚硝胺(DENA)腹腔注射,每周2次,连续给药16周,直至肝癌模型构建成功。将18只模型大鼠随机分为阴性对照组(NC)、盐酸羟考酮组(OH组)及吗啡组(MO组),每组6只,进行腹腔探查术后,分别埋入装有生理盐水、盐酸羟考酮和吗啡的Alezt微量泵进行镇痛,分别于术后第1、3、7天进行糖水偏好实验、旷场实验(OFT),7天后心脏采血,流式细胞术检测外周血中NK细胞及Treg细胞百分比。结果与NC组相比,OH组和MO组大鼠糖水偏好率均显著升高(P<0.05);旷场试验中,OH组和MO组大鼠移动距离(P<0.05)及中央格持续时间明显增加(P<0.05);OH组大鼠糖水偏好率、旷场移动距离及中央格持续时间与MO组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);OH组和MO组大鼠外周血Treg细胞比例均显著低于NC组(P<0.05),且OH组表现出比MO组更低的Treg细胞比例(P<0.05);OH组NK细胞比例显著高于NC组(P<0.05),而MO组NK细胞比例显著低于NC组(P<0.05)。结论盐酸羟考酮和吗啡在术后镇痛方面表现出类似效果,而盐酸羟考酮可显著抑制Treg细胞、增加NK细胞,从而增强机体抗肿瘤免疫功能,是更理想的围术期镇痛药物。

EP300调控肝癌细胞侵袭迁移的机制

目的 探讨组蛋白乙酰基转移酶家族成员腺病毒E1A结合蛋白P300(EP300)调控肝癌细胞侵袭、迁移的作用及机制。方法 收集我院45例肝癌患者的癌旁组织与癌组织,利用qRT-PCR检测EP300在组织中的表达。在肝细胞癌细胞系HepG2中构建EP300稳定干扰细胞系,细胞划痕实验和Transwell实验观察干扰EP300表达对HepG2细胞侵袭和转移的影响。Western blotting分析EP300对WNT通路的影响。结果 与癌旁组织相比,EP300在肝癌组织中的表达明显增加。与对照组相比,EP300低表达HepG2细胞划痕愈合更慢(P<0.05),穿膜细胞明显减少(P<0.05),SNAIL表达明显减少,E-cadherin表达明显增加。结论 EP300能够通过激活WNT通路促进肝癌细胞侵袭和迁移。

干扰lncRNA RHPN1-AS1表达通过靶向miR-339-5p对肝癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨长链非编码RNA PCNA1(lncRNA RHPN1)反义AS1(RHPN1-AS1)对肝癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法:将si-NC(lncRNA RHPN1-AS1阴性对照组)、si-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1组)、pcDNA(真核表达载体组)、pcDNA-RHPN1-AS1(沉默lncRNA RHPN1-AS1真核表达载体组)、miR-NC(微小RNA-339-5p阴性对照组)及miR-339-5p(微小RNA-339-5p组)分别转染至肝癌细胞Huh7中,记为si-NC组、si-RHPN1-AS1组、pcDNA组、pcDNA-RHPN1-AS1组、miR-NC组和miR-339-5p组;将si-RHPN1-AS1质粒分别与anti-miRNC(微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照)、anti-miR-339-5p(微小RNA-339-5p抗结剂)共转染至Huh7细胞中,记为si-RHPN1-AS1+anti-miR-NC组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂阴性对照组)、si-RHPN1-AS1+anti-miR-339-5p组(沉默lncRNA RHPN1-AS1+微小RNA-339-5p抗结剂组);转染均采用脂质体法。采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)(RT-qPCR)检测正常肝细胞(THLE-2)、肝癌细胞株(Huh7、MHCCLM3、MHCC97H)中miR-339-5p和RHPN1-AS1表达水平;双荧光素酶报告实验检测RHPN1-AS1和miR-339-5p的靶向关系;用蛋白质印迹法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白、P21蛋白、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平;用流式细胞术检测细胞凋亡情况;用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测细胞活性。结果:与正常肝细胞THLE-2相比,肝癌细胞株Huh7、MHCCLM3、MHCC97H中RHPN1-AS1高表达,miR-339-5p低表达。RHPN1-AS1靶向调控miR-339-5p的表达。干扰RHPN1-AS1表达和miR-339-5p过表达的肝癌细胞Huh7中P21蛋白、Bax蛋白表达水平显著升高,Cyclin D1、Bcl-2水平显著降低,细胞活性显著降低,细胞凋亡率显著升高。下调miR-339-5p表达逆转了干扰RHPN1-AS1表达对肝癌细胞Huh7的增殖抑制和凋亡促进作用。结论:干扰RHPN1-AS1表达可抑制肝癌细胞的增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与miR-339-5p表达有关,将可为肝癌的靶向治疗提供新靶点。