第三代与第四代HIV ELISA试剂应用效果分析

目的比较第三代与第四代HIV ELISA试剂在实际工作中的检测效果。方法对367份S/CO≥0.6的血清标本同时用第三代和第四代HIV ELISA试剂进行复检试验,复检试验阳性样本送确证实验室进行确证实验。结果第三代HIVELISA试剂检出阳性34份,经确证为阳性标本27份,阳性符合率79.41%;第四代HIV ELISA试剂检出阳性91份,经确证为阳性标本33份,阳性符合率36.26%。结论第四代HIV ELISA试剂检测的敏感性高于第三代HIV ELISA试剂,阳性符合率低于第三代HIV ELISA试剂,应根据检测需要选择检测试剂。

长沙地区1株重组柯萨奇病毒A4基因型的全基因组序列分析

目的对湖南省长沙市手足口病患儿咽拭子中分离的1株柯萨奇病毒A组4型(coxsackievirus A4,CV-A4)毒株进行全基因组序列及分子进化特征分析。为手足口病的疫情防控提供理论数据支持。方法利用人类横纹肌肉瘤(human rhabdomyosarcoma,RD)细胞对2019年6月长沙市常规监测的手足口病病例咽拭子标本进行病毒分离,提取病毒RNA序列进行逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR),并利用Illumina二代测序技术对其进行全基因组序列测定,利用MEGA 6.0构建系统进化树,用BioEdit和Simplot软件进行重组和进化分析。结果手足口病患儿的咽拭子中分离的CV-A4毒株为1株重组毒株,毒株命名为S270/Changsha/CHN/2019(简称S270),序列全长为7454 bp。基于核苷酸序列的进化树结果表明,S270毒株的结构蛋白区域(P1)属于CV-A4分支,非结构蛋白区域(P2和P3)属于CV-A2分支。S270毒株与AY421762株(简称CV-A4代表株)对比,核苷酸序列P1区的同源性为85.05%;非结构蛋白P2和P3区的同源性为83.90%。全基因组氨基酸序列与CV-A4代表株的同源性为84.7%。VP1区氨基酸序列与CV-A4代表株的同源性为83.8%,氨基酸位点出现A55T和M229T两个突变。重组位点分析发现S270毒株全基因组重组位点发生在2B非结构蛋白区域,位于基因组序列位点约3849 bp位置。结论S270分离株属于CV-A4重组毒株,基因重组位点位于2B区内,属于GI基因群的GIB亚型。

逆转录-环介导等温扩增方法检测甲型H1N1流感病毒

2009年3月墨西哥暴发“人感染猪流感”疫情，造成人员死亡。研究发现，此次疫情的病原为变异后的甲型H1N1流感病毒，甲型H1N1流感病毒属于正黏病毒科（orthomyxoviridae），甲型流感病毒属（influenza virus A）。该毒株包含有猪流感、禽流感和人流感3种流感病毒的基因片段，可以在人间传播。截至北京时间6月30日15时，

第四代HIV初筛试剂在血液筛检中的应用评价

目的对第四代HIV初筛试剂在血液筛检中的应用进行评价。方法分别用第三代和第四代HIV初筛试剂对血液中心送检的333份献血者血液标本(S/CO≥0.6)进行检测,对初筛结果阳性或可疑的标本用HIV抗体确证实验(免疫印迹法)进行确认,根据检测结果对第三代和第四代初筛试剂进行比对,评价第四代初筛试剂的应用效果。结果利用第四代初筛试剂从333份血液标本中筛检出阳性82例,阳性率为24.6%(82/333),第三代初筛试剂阳性40例,阳性率为12.0%(40/333);利用免疫印迹法从82份第四代HIV试剂筛检阳性标本中检出HIV抗体阳性26例,HIV抗体不确定18例,从40份第三代HIV试剂筛检阳性标本中检出HIV抗体阳性26例,HIV抗体不确定7例,第四代HIV试剂初筛的标本HIV抗体不确定结果多于第三代HIV初筛试剂。结论第四代HIV初筛试剂在HIV早期或近期感染中可以在一定程度上缩短"窗口期",增加HIV的检出率,建议血液中心继续利用第四代HIV初筛试剂对献血者进行血液筛查。

甲型H1N1流感死亡病例三株病毒分离株血凝素基因测序分析

目的 对长沙市3株甲型H1N1流感死亡病例病毒分离株HA基因的来源和变异情况进行研究.方法 对长沙市的3例甲型H1N1流感死亡病例的鼻/咽拭子标本进行RT-PCR检测和流感病毒分离,利用WHO推荐的测序引物和CEQTM8000 Genetic Analysis System对3株甲型H1N1流感死亡病例病毒株[A/湖南开福/SWL4142/2009（H1N1）,A/湖南长沙/SWL4346/2009（H1 N1）,A/湖南芙蓉/SWL4224/2009（H1N1）]HA基因进行测序,测序方法为末端标记循环法（Dye Terminator Cycle sequencing）,测序结果提交至GenBank,并用ClustalX和Mega4.1软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树.结果 A/湖南开福/SWL4142/2009（H1N1）,A/湖南长沙/SWL4346/2009（H1N1）和A/湖南芙蓉/SWL4224/2009（H1N1）3株病毒株HA基因序列分别与甲型H1 N1流感病毒A/NewYork/3502/2009（H1N1）,A/Shanghai/71T/2009（H1N1）和A/Chita/01/2009（H1N1）分离株高度同源,同源性为99%,与国内甲型H1N1流感病毒株A/Sichuan/1/2009（H1N1）核苷酸同源性在99.5%以上 进化树分析显示包括3株病毒株在内的甲型H1N1流感病毒与A/Swine/Indiana/P12439/00亲缘关系近,但与人季节性A流感病毒（H1N1）、禽流感亲缘关系较远.与A/Swine/Indiana/P12439/00 HA基因比较发现：3株病毒株HA基因分别有28、30、27个氨基酸发生变异,但3株病毒株在21个重要抗原位点中只有一个R53K氨基酸替换 对全球364条甲型H1N1流感病毒HA基因序列进行多重比对发现有119个非保守氨基酸位点,其中5个位于重要抗原位点.结论 3株病毒株和其他甲型H1N1流感病毒HA基因可能由北美猪流感病毒变异而来 3株病毒株HA基因与国内外甲型H1N1流感病毒高度同源,同全球绝大多数甲型H1N1流感病毒一样处于稳定状态.