染料木素拮抗对氧磷诱导的大鼠胸主动脉组织p22phox表达上调

目的探讨染料木素是否通过下调p22phox、Nox4的表达,抑制活性氧的生成而拮抗对氧磷损伤的血管内皮功能。方法取♂SD大鼠胸主动脉。1溶媒对照组:用0.1%的二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)处理大鼠胸主动脉30 min;2染料木素(genistein,GST)处理组:GST(100μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min;3对氧磷(paraoxon,PO)处理组:PO(40.5μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min;4 PO+GST处理组:PO(40.5μmol·L-1)+GST(100μmol·L-1)处理大鼠胸主动脉30 min。RT-PCR法检测各组p22phox、Nox4 mRNA表达的变化;Western blot观察p22phox和Nox4蛋白表达的变化。结果较之溶媒对照组,PO处理可使p22phox、Nox4 mRNA及蛋白表达明显增加;GST处理则使p22phox、Nox4 mRNA及蛋白表达明显减少;PO+GST共同处理组,Nox4 mRNA及蛋白表达增加。与PO单独处理组比较,PO+GST共同处理组p22phox mRNA及蛋白表达明显减少。结论对氧磷可通过上调血管组织p22phox、Nox4 mRNA和蛋白的表达,导致血管内皮氧化损伤;染料木素可下调二者的表达,保护血管内皮。

14-3-3参与apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖ERK1/2信号途径研究(英文)

本室以前已经报道了G蛋白偶联受体APJ的内源性配体多肽,apelin-13,通过激活ERK1/2促进大鼠血管平滑肌细胞增殖.本文研究14-3-3信号蛋白是否参与apelin-13促进大鼠血管平滑肌细胞增殖ERK1/2信号途径,探讨apelin/APJ系统的细胞信号转导机制.组织贴块法培养大鼠胸主动脉VSMCs;Western blotting方法检测14-3-3、pRaf-1、Raf-1、pERK1/2、ERK1/2、cyclinD1、cyclinE的表达;MTT方法观察14-3-3抑制剂Difopein对VSMCs的增殖作用;免疫共沉淀方法检测14-3-3和Raf-1蛋白复合物的形成.Western blotting方法结果显示,apelin-13(0、0.5、1、2、4μmol/L)浓度依赖性刺激大鼠VSMCs 14-3-3表达、Raf-1和ERK1/2磷酸化,以2μmol/L最为明显;2μmol/L apelin-13时间依赖性刺激大鼠VSMCs 14-3-3表达、Raf-1和ERK1/2磷酸化,在4 h增加最为显著;14-3-3蛋白抑制剂Difopein明显抑制apelin-13诱导的Raf-1磷酸化、ERK1/2磷酸化、cyclinD1及cyclinE表达;免疫共沉淀方法发现apelin-13诱导14-3-3与Raf-1结合增加,而Difopein明显抑制两者结合;MTT法显示Difopein明显抑制apelin-13诱导的血管平滑肌细胞增殖.上述结果表明,Apelin-13通过14-3-3/Raf-1复合物-ERK1/2信号转导通路促进大鼠血管平滑肌细胞增殖.

PI3K信号通路介导apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附的研究(英文)

本室以前已经报道G蛋白偶联受体APJ的内源性配体多肽apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附,本文研究PI3K信号途径是否参与apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附,探讨apelin/APJ系统的细胞信号转导机制.MPO方法检测细胞黏附;Western blot方法检测PI3K、VCAM-1的表达.Western blot方法结果显示,apelin-13(0、0.5、1、2、4μmol/L)浓度依赖性刺激血管内皮细胞PI3K磷酸化,以1μmol/L最为明显;1μmol/L apelin-13时间依赖性促进血管内皮细胞PI3K磷酸化,在30 min增加最为显著;PI3K抑制剂LY294002明显抑制apelin-13诱导的VCAM-1表达和单核细胞-血管内皮细胞黏附.上述结果表明,PI3K信号途径介导apelin-13促进单核细胞-血管内皮细胞黏附.

染料木素对大鼠食饵性高脂血症PON1及CRP的影响

目的探讨染料木素(genistein,Gen)对大鼠食饵性高脂血症对氧磷酶(paraoxonase,PON1)活性及C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)的影响。方法健康SD大鼠40只,♀♂各半,随机分为以下5组:①普食组;②高脂血症模型组;③低剂量Gen(0.5 mg.kg-1.d-1)组;④高剂量Gen(5 mg.kg-1.d-1)组;⑤辛伐他汀(5 mg.kg-1.d-1)阳性药物对照组;除普食组给以普通饲料喂养外,其他组均饲以高脂饲料喂养加敌百虫(10 mg.kg-1.d-1)腹腔注射,建立食饵性高脂血症模型。各组大鼠连续喂养及同时用药8周,每2周测1次体重,根据体重调整用药量;定期取血检测胆碱酯酶(acetylcholine esterase,AChE)、血脂、丙二醛(ma-lonaldehyde,MDA)、PON1和CRP的含量,用苏木精/伊红(hematoxylin/eosin,HE)染色检测大鼠肝脏及主动脉弓病理形态变化。结果与模型组相比,高剂量Gen组与辛伐他汀组大鼠总胆固醇(total cholesterol,TC)、低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)及动脉粥样硬化指数(atherosclerotic index,AI)明显降低,高密度脂蛋白胆固醇(high density lipoprotein cholesterol/total cholesterol,HDL-C)与TC比值(HDL-C/TC)明显升高,血清MDA含量也明显降低,同时还能明显降低高脂饲料喂养加低剂量敌百虫腹腔注射致高脂血症大鼠血清CRP含量,提高PON1活性,改善大鼠肝与主动脉弓形态变化。结论Gen可以减轻高脂饲料喂养加敌百虫诱发的大鼠高脂血症;其作用机制可能与逆转血脂障碍,抑制过氧化脂质作用抗氧化,降低炎症因子CRP抗炎及通过PON1酶的调节有关。

白杨素衍生物dFMAChR体外抗乳腺癌作用及其可能机制

目的:研究白杨素衍生物6,8-二-三氟甲基-5-羟基-7-乙酰氧基白杨素(dFMAChR)对体外培养人乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的影响,并对其体外抗乳腺癌作用机制进行初步探讨。方法:MTT法测定dFMAChR对MCF-7细胞增殖活性的影响;Hochest染色观察dFMAChR诱导MCF-7细胞凋亡的形态学改变;进一步DNA凝胶电泳证实dFMAChR确有诱导MCF-7细胞凋亡作用;Western Blot检测凋亡相关蛋白PPARγ、PTEN、p-Akt、Caspase-3的表达水平。结果:dFMAChR可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞的增殖,IC50值为8.51μmol/L;3.0、10.0、30.0μmol/L dFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后Hochest染色镜下可见核浓缩的凋亡细胞,10.0、30.0μmol/L dFMAChR处理人乳腺癌细胞48 h后DNA凝胶电泳显示"梯形"条带,说明dFMAChR可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡;Western Blot结果表明不同浓度的dFMAChR可浓度依赖性上调PPARγ、PTEN、Caspase-3蛋白表达,下调p-Akt的表达。结论:dFMAChR具有体外抗乳腺癌作用,其诱导凋亡机制与激活PPARγ/PTEN信号通路,最终增加Caspase-3蛋白表达有关。

APJ受体作为心肌细胞压力感受器诱导心肌肥厚的形成

美国桑福德-伯纳姆医学研究所和斯坦福大学医学院的研究人员Pilar Ruiz-Lozano博士等于2012年8月16日在《自然》杂志（Nature）上发表了一篇关于APJ与心肌肥厚的关系及其机制研究的论文,发现在主动脉缩窄术构建的压力负荷大鼠模型中,APJ基因敲除的大鼠和apelin基因敲除的大鼠表现出不同的心肌肥厚和心力衰竭进程[1].

P13K-Akt信号通路介导apelin-13促进大鼠心肌细胞肥大

目的：研究G蛋白偶联受体及内源性配体apelin／APJ系统是否参与大鼠心肌肥厚形成，探讨P13K-Akt信号途径参与apelin-13促心肌细胞肥大作用分子机制；方法：腹主动脉环扎缩窄术建立左室肥厚（LVH）SD大鼠动物模型，培养大鼠H9c2心肌细胞系，westernblot方法检测P13K等信号转导蛋白分子表达；