血栓弹力图与常规凝血检测评估早期复发性流产患者凝血功能及指导抗凝治疗的预后比较

目的探讨血栓弹力图(TEG)与常规凝血检测在评估复发性流产(RSA)患者孕早期凝血功能及指导抗凝治疗的临床价值,并探讨两种检测方法的相关性和一致性。方法选取2018年5月至2021年2月就诊于湘潭市中心医院生殖遗传中心和妇产科行抗凝治疗的孕早期RSA患者为研究对象,根据抗凝指导方法不同分为常规组(常规凝血功能检测指导组,64例)和TEG联合组(TEG联合常规凝血功能检测指导组,64例),比较两组患者的妊娠结局以及两种检测方法的相关性和一致性。结果TEG联合组患者妊娠成功率显著高于常规组(85.94%vs.64.06%,P<0.05),而早产率显著低于常规组(10.91%vs.29.27%,P<0.05)。相关性分析显示,TEG检测R值与常规检测PT、APTT正相关;K值与APTT正相关,与FIB负相关;Angle值与APTT负相关,与FIB正相关;MA值与FIB、PLT正相关,与APTT、TT负相关;CI值与APTT负相关,与FIB正相关;上述相关性的r值水平为0.250~0.442(P<0.05)。一致性分析仅显示TEG检测R值与PT以及MA值与PLT间存在一定一致性,Kappa值分别为0.116和0.285(P<0.05)。TEG诊断出血液高凝状态的阳性率显著高于常规凝血功能检测(70.31%vs.25.00%,P<0.001)。结论早孕RSA患者TEG与常规凝血功能检测结果存在低度相关性,但一致性较差;TEG诊断出血液高凝状态的阳性率较常规凝血功能检测更高,更适用于早孕RSA患者的血栓前状态筛查,且联合检测可进一步提高筛查阳性率;TEG联合常规凝血功能检测对优化抗凝治疗方案的指导作用更佳,可显著提高RSA患者的妊娠成功率并降低早产率。

人、大鼠和猪诱导多能干细胞染色体制备方法的建立和关键影响因素的分析

随着诱导多能干细胞技术的建立和发展,不同物种的诱导多能干细胞被相继报道。诱导多能干细胞的核型鉴定方法对于日常监控染色体突变显得日益重要。本文建立了人、大鼠和猪诱导多能干细胞的核型鉴定方法,同时分析了秋水仙素浓度、作用时间和低渗处理时间三个关键因素对诱导多能干细胞染色体核型分析成功的影响。结果显示低渗时间和秋水仙素的浓度不是核型分析成功的决定因素,关键因素是秋水仙素的作用时间,不同物种的诱导多能干细胞需要不同的处理时间。这为进一步建立其它新物种的诱导多能干细胞核型分析方法打下了基础。

DC-CIK与间充质干细胞在肿瘤治疗中的研究进展

恶性肿瘤是目前病死率最高的疾病之一,而生物免疫疗法作为恶性肿瘤三大常规治疗后的重要辅助治疗,在临床上表现出很好的抗肿瘤特性及重建与增强肿瘤患者的免疫系统的能力。间充质干细胞是一群具有多向分化及自我更新能力的多能干细胞,并具有抑制移植物抗宿主反应的作用,同时也具备直接抑制肿瘤生长的作用。生物免疫疗法与干细胞联合应用因具有其独特的优势而越来越受关注,但两者联合的同时存在相互抑制作用。对于两者如何联合来发挥各自的最大优势,并进行肿瘤的治疗仍处于不成熟阶段,故需大量的基础试验来探索两者的最佳联合方式,并为临床的应用提供依据。

温肾活血法改善不孕症患者子宫内膜容受性的前瞻性队列研究

目的:评价温肾活血法改善不孕症患者子宫内膜容受性的疗效。方法:选取2015年3月—2016年1月在本院门诊就诊的子宫内膜容受性不足的不孕症患者100例,采用前瞻性队列研究的方法,根据是否接受中医温肾活血疗法将纳入的患者分为治疗组(52例)及对照组(48例),治疗组接受温肾活血法治疗及西医基础治疗,对照组只接受西医基础治疗。通过问卷调查,门诊复查,电话询问等方式进行随访,以子宫内膜厚度、类型、子宫动脉PI值及RI值、血清E2、P水平及妊娠率为观察指标,观察两组子宫内膜容受性改善的效果。结果:HCG日及黄体中期治疗组子宫内膜厚度明显高于对照组(P<0.05),治疗组A型内膜多于对照组(P<0.05)。治疗后两组子宫动脉PI值及RI值均明显降低(P<0.05),但治疗组下降幅度优于对照组(P<0.05);两组血清E2、P水平较治疗前均升高(P<0.05),组间比较E2、P水平差异有显著性(P<0.05)。治疗结束后治疗组妊娠率则显著高于对照组(P<0.05)。结论:温肾活血法能有效改善不孕症患者子宫内膜容受性,提高不孕症患者的妊娠率。

新改良短方案在卵巢储备功能低下高龄患者中的应用

目的探讨新改良短方案在高龄且卵巢储备功能低下患者中行IVF/ICSI-ET助孕的治疗效果。方法回顾性分析2016年1~12月于我中心就诊的高龄(≥35岁)且卵巢储备功能低下(窦卵泡≤8个)的178例患者的IVF/ICSI-ET周期,按促排卵方案分为新改良短方案组(A组,n=99)和改良超长方案组(B组,n=79),再以年龄分3个亚组(35~38岁,39~42岁及≥43岁),分别比较不同年龄段两种促排卵方案的治疗效果、种植率、临床妊娠率及活产率。结果 (1)与B组相比,A组的Gn用量显著下降[(2 660.9±643.2)U vs.(3 225.3±760.4)U]、HCG日LH水平显著升高[(2.4±2.7)U/L vs.(1.0±0.5)U/L](P<0.05);两组间Gn使用天数、HCG日P水平、获卵数、未受精率、2PN率、可移植胚胎数、种植率、临床妊娠率、活产率、流产率比较均无统计差异(P>0.05)。(2)按年龄分层分析,在35~38岁患者中,A组患者的活产率较B组有所改善(53.8%vs.38.7%),在39~42岁患者中,A组患者的临床妊娠率高于B组(63.2%vs.46.7%),但差异均无统计学意义(P>0.05)。结论新改良短方案可缩短取卵周期,减少GnRH-a及Gn用量,临床妊娠率及活产率有所改善;对于高龄且卵巢储备功能低下的患者,新改良短方案可能是一个经济有效的治疗选择。

血栓弹力图预测早期流产及指导抗凝治疗的临床价值

目的探讨血栓弹力图对早期流产的预测作用,并分析其对抗凝治疗的指导作用。方法选取2018年4月至2019年2月湖南省湘潭市中心医院妇产科诊治的162例有反复流产史/胚胎停育史的孕妇资料进行回顾性分析。均定期接受血栓弹力图检测,追踪至孕16周,记为研究组;另回顾同时间段的565例正常健康孕妇资料,记为对照组。统计流产发生率,对比两组孕妇血栓弹力图指标;对比不同时刻流产者和未流产者血栓弹力图指标,分析其对早期流产的预测效能。对比监测期间出现高凝状态的孕妇接受治疗前后血栓弹力图指标变化。结果研究组孕妇孕8周~12周、孕12周~16周、>孕16周流产发生率和总发生率均高于对照组(均P<0.05);研究组孕妇基线R值、K值均低于对照组(均P<0.05),Angel角、MA值、CI值均高于对照组(均P<0.05);研究组流产者基线R值、K值均短于未流产者(均P<0.05),Angel角、MA值、CI值均高于未流产者(均P<0.05);基线血栓弹力图指标联合预测早期流产的灵敏度、特异度、AUC分别为96.30%、96.30%、0.913,均高于各项指标单独预测,且R值、K值、Angel角、MA值、CI值预测早期流产的最佳截断点分别为5.95min、1.05min、83.15°、71.50mm、4.35;研究组孕妇中出现高凝状态者治疗后R值、K值均升高,Angel角、MA值、CI值均降低(均P<0.05)。结论有反复流产史/胚胎停育史的孕妇早期流产风险高,血栓弹力图指标有异常,且流产者均有明显异常,血栓弹力图指标对流产的预测效能高,还可指导抗凝治疗。

卵巢高反应患者人绒毛膜促性腺激素扳机剂量的探讨

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中,何种人绒毛膜促性腺激素(h CG)扳机剂量为卵巢高反应患者的合适选择。方法选择2013年1月-2014年5月在湘潭市中心医院生殖遗传中心行IVF-ET的卵巢高反应患者465例,根据扳机日h CG的注射剂量分h CG 2 000 IU组(A组)、3 000 IU组(B组)、4 000IU组(C组)、5 000 IU组(D组)。比较各组间的中、重度卵巢过度刺激综合征(OHSS)发生情况、获卵率、卵子成熟率、受精率、2PN受精率、可利用胚胎率、优胚率及新鲜周期移植后妊娠结局。结果 A组获卵率明显低于其他各组,D组获卵率明显高于其他各组,差异有统计学意义(78.5%vs 87.2%,87.8%vs 92.3%)。A组和B组卵子成熟率及2PN受精率较C组和D组低,差异有统计学意义。A组受精率明显低于其他各组,差异有统计学意义(84.3%vs 88.3%,90.6%,90.2%)。C组可利用胚胎率显著高于A组和B组,也显著低于D组(67.9%,66.2%vs 76.2%vs 80.3%)。D组优胚率显著高于其他各组(46.0%,45.1%,49.5%vs 59.2%)。A组、B组、C组的中、重度早发型OHSS发生率无差异,均显著低于D组(0.9%,1.9%,1.8%vs 5.9%)。4组均无中、重度晚发型OHSS发生。各组间新鲜周期生化妊娠率、临床妊娠率无差异。结论在卵巢高反应患者中,h CG扳机剂量降低至4 000 IU,既能有效的降低OHSS的发生,同时又能保证较好的IVF-ET结局。而h CG扳机剂量降低至2 000 IU,虽然OHSS发生率降低,但获卵率、卵子成熟率、受精率、2PN受精率、可利用胚胎率及优胚率等体外受精(IVF)结局也随之受影响。4 000 IU h CG是IVF-ET中卵巢高反应患者比较合适的扳机剂量。

反复自然流产患者宫腔镜检查结果分析

目的分析实施反复自然流产患者宫腔镜检查结果。方法回顾我院2008年1月至2011年12月间反复自然流产行官腔镜检查病人184例的临床资料，分析宫腔镜检查结果，对发现的宫腔病变进行治疗，观察再次妊娠的结局。结果184例中127例（69．02％）存在官腔病变，其中官腔粘连70例（38．04％），子宫内膜息肉26例（14．13％），子宫内膜炎22例（11．96％），黏膜下子宫肌瘤3例（1．63％），部分性子宫纵隔6例3．26％）。122例（96．06％）获得临床妊娠。127例病人经治疗后再次妊娠，122例（96．06％）获得临床妊娠。宫外孕2例（1．57％）;再次早孕自然流产3例（2．36％），早产8例（6．30％）足月分娩111例（87．40％）。结论反复自然流产时应将宫腔镜检查列为必要的检查，对宫腔异常病人治疗后可以改善妊娠结局。

黄体期泌乳素水平变化与体外受精-胚胎移植结局的关系

目的:探讨黄体期泌乳素(PRL)水平变化与体外受精-胚胎移植(In Vitro Fertilizationembryo transfer,IVF-ET)结局的关系。方法:本研究收集了2010年1月至2010年6月就诊我中心228例进行IVF-ET患者移植后监测血清泌乳素,并对其体外受精-胚胎移植结局的关系进行分析。结果:228例行IVF-ET的患者在移植当日,血清PRL平均值681.6±253.4 uIU/mL,与基础血清PRL相比,明显升高,两者比较具显著统计学差异,P<0.01;228例患者中妊娠110例,未妊娠118例,总妊娠率48.2%;妊娠组与未妊娠组在移植0、2、4、6d血清PRL浓度比较P>0.05;在第8天两者比较具显著统计学差异,P<0.01。控制良好组妊娠率53.1%,比控制过度组、欠佳组的妊娠率明显增高,具显著统计学差异,P<0.01。结论:黄体期血清PRL水平变化与IVF-ET结局有一定的关系,黄体期血PRL浓度较高时用溴隐亭控制在一定浓度时有利于提高妊娠率。

“短时取样法”用于非侵入性胚胎植入前遗传学检测效能的前瞻性研究

目的探讨"短时取样法"在非侵入性胚胎植入前遗传学检测(non-invasive preimplantation genetic testing,ni-PGT)中的检测效能。方法采用前瞻性研究分析方法,对2021年3月至2022年6月期间就诊于湘潭市中心医院生殖中心行胚胎植入前非整倍体遗传学检测(preimplantation genetic testing for aneuploidy,PGT-A)患者的囊胚进行外滋养层细胞(trophectoderm,TE)活检,同时收集囊胚培养液(spent culture medium,SCM)。根据SCM收集方法的不同,分为直接收集法与"短时取样法",分析比较两种取样方法ni-PGT的检测结果与PGT-A结果的符合率。结果本研究收集36对夫妇的108个囊胚,均行TE活检及收集SCM,其中直接收集法59例、"短时取样法"49例。直接收集法诊断胚胎倍性的曲线下面积(area under curve,AUC,0.628)小于"短时取样法"(0.785)。结论"短时取样法"诊断胚胎倍性的效能相较于直接收集法更优。

生长激素改善冻融胚胎移植周期结局的研究

目的探讨重组人生长激素(GH)对冻融胚胎移植(FET)患者子宫内膜容受性的影响。方法将2010年3月至12月湘潭市中心医院114例既往因内膜原因取消移植周期拟采用人工周期准备内膜行FET的患者随机分为两组,加用GH及阿司匹林的62例患者为观察组,仅加用阿司匹林的52例患者为对照组。移植前日应用彩色多普勒超声观察子宫及内膜情况,比较两组子宫内膜Salle评分、周期取消率和移植结局。结果观察组子宫内膜Salle评分为15.17±2.29,对照组为13.99±2.65;两组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。其中内膜厚度、舒张早期切迹存在率、内膜血流存在率两组比较差异有统计学意义(P<0.05);而子宫动脉搏动指数(PI)值、子宫内膜形态多层率、子宫肌层回声均匀率、舒张末期血流存在率两组间差异无统计学意义(P>0.05)。观察组周期取消率、着床率、妊娠率分别为9.68%、27.71%、50.00%,而对照组分别为16.50%、15.80%、28.57%,两两比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GH可以增加内膜厚度,改善子宫内膜血流,提高子宫内膜容受性,降低部分内膜条件欠佳患者的冻融胚胎周期取消率,改善患者FET的结局。

不同微刺激方案在卵巢功能减退患者的结局比较

目的探讨人工黄体期促排方案和两种克罗米芬促排卵微刺激周期体外培养（IVF）／单精子卵胞浆内注射（ICSI）在卵巢功能减退患者中治疗后的临床参数（卯母细胞早排率、获卵率、受精率、优质胚胎率，累计妊娠率），为临床治疗提供依据。方法选取2013年1月至2016年5月本中心数据库中卵巢功能减退患者共180治疗周期，在月经第3天B超监测窦卵泡数目、直径，检查基础促卵泡生成素（FSH）、促黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）值。当窦卵泡直径〈8mm，FSH〈15IU／L，E2〈280pmol／L时，随机选择促排卵方案，其中A组：克罗米芬（cc）早期使用5d组60例，患者从月经第3天开始，克罗米芬50mg／d，口服5d，同时予以人绝经期促性腺激素（HMG）促排卵；B组：克罗米芬持续使用组60例，患者从月经第3天开始，克罗米芬50mg／d，口服至扳机日；同时予以HMG促排卵；C组：人工黄体期组60例，患者从月经第3天开始，予以安宫黄体酮6mg／d，口服至取卵日，同时予以HMG150U／d促排卵。当优势卵泡直径≥16mm，平均每个优势卵泡E2—1100pmol／L时，于当天20：30肌注0．1mg促性腺激素释放激素激动剂（GnRH．d）诱发排卵，34—36h后取卵。克罗米芬早期使用5d组患者扳机日子宫内膜达到8mm，予以新鲜周期移植；其中克罗米芬持续使用组、人工黄体期组因子宫内膜容受性问题，所得胚胎均予以玻璃化冷冻，待以后行解冻周期移植。结果三组基础FSH值、窦卵泡数、年龄比较差异无统计学意义（P〉0．05）。其中克罗米芬持续使用组、人工黄体期组卵母细胞早排风险、获卵数、优胚数、累积妊娠率与克罗米芬早期使用5d组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。人工黄体期组的获卵数，优胚数与克罗米芬持续使用组比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论控制性超排卵（COH）过程中持续使用克罗米芬＋HMG促排卵或采用安宫黄体酮＋HMG促排卵方案可显著减少卵母细胞早排风险，但其对子宫内膜容受性影响较大，所有患者需全胚冷冻，但能降低卵母细胞早排风险，提高优质胚胎率，从而提高累计妊娠率。

不同流产次数的复发性流产患者血栓弹力图比较研究

目的探究血栓弹力图(thrombelastograph,TEG)在不同流产次数的复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者凝血功能中的变化趋势,为早期不同流产次数RSA患者的诊断和治疗提供有效的检测指标。方法选取2018年1月至2019年1月湘潭市中心医院不孕不育科治疗的147例不同流产次数的RSA已孕患者为研究对象,设为观察组,根据不同孕周将其分为早孕组(平均妊娠6^+6周)35例,早中孕组(平均妊娠13^+6周)47例,中孕组(平均妊娠18^+6周)65例;并根据不同流产次数将流产≥4次者分为流产4组(31例),流产3次者分为流产3组(69例),流产2次者分为流产2组(47例)。从同时期于我院建立生产档案的健康孕妇中随机抽取160例为健康对照组。观察两组孕妇TEG检测5项参数变化情况,并对比不同RSA患者TEG变化情况。结果经TEG检测后,凝血指数(coagulation index,CI)均值都在3以上,观察组和对照组孕妇均呈血液高凝状态,观察组各项指标更偏向高凝状态,R值和K值缩短,α角和MA值增大,CI值升高,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。在不同孕周患者中,R、MA及CI值比较差异无统计学意义(P>0.05);K值随孕周的增加而降低,α值随孕周的增加而升高,3组比较差异有统计学意义(P<0.05);流产4组的MA值高于流产3组、流产2组(P<0.05);R、K、α角及CI值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在不同流产次数的RSA患者中应用TEG检测,可在早期准确反映出患者RSA的倾向,且患者既往流产次数越多(≥4次),TEG的参数MA增加得越明显,其主要表现为血小板聚集功能增强的凝血功能异常。

ZO-1基因的慢病毒载体构建

目的:相邻两心肌纤维的连接处称心肌闰盘,它在心肌的机电活动中扮演重要角色。目前有关闰盘相关基因Cx43的研究已被广泛关注,而在不同心肌病理状态下,其变化及功能都与另一闰盘相关基因ZO-1有极为密切的联系。目前有关ZO-1的研究比较少,此次欲将猪ZO-1基因克隆到慢病毒表达载体并进行鉴定,为进一步研究其功能奠定基础。方法:利用聚合酶链反应(PCR)扩增猪ZO-1基因,并克隆到慢病毒表达载体,通过转化、抽提质粒、双酶切和测序鉴定构建的Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1重组载体。结果:猪ZO-1基因片段重组到慢病毒载体;PCR和双酶切鉴定,电泳结果显示均能得到与理论大小相符的片段;经测序证实成功构建Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1慢病毒表达载体。结论:通过一系列实验证实Lenti-EF1α-EGFP-TRE-ZO-1慢病毒表达载体构建成功,可利用其感染相关细胞或注入动物体内,为后续的体外及在体研究奠定基础,明确其在不同心肌病理状态下所发挥的独特作用。

改良短方案与高孕激素状态下促排卵在卵巢储备功能低下的高龄患者中的应用比较

目的探讨新改良短方案与高孕激素状态下促排卵(PPOS)在高龄(年龄≥35岁)且卵巢储备功能低下(基础窦卵泡≤8个)患者中行体外受精-胚胎移植/卵胞浆内单精子显微注射技术(IVF/ICSI-ET)助孕的治疗效果。方法回顾性分析2016年1月至2017年9月于湘潭市中心医院生殖中心就诊的高龄且卵巢储备功能低下患者340个IVF/ICSI-ET周期,按促排卵方案分为改良短方案组(175个取卵周期)和PPOS方案组(165个取卵周期),统计2组患者促排卵结局和临床结局,采用t检验比较2组患者促性腺激素(Gn)用量、Gn使用时间、可移植胚胎数、药物费用等的差异,应用χ^2检验比较2组患者双原核卵裂率、优胚率、种植率、临床妊娠率、活产率、胚胎流失率、异位妊娠率、流产率的差异。结果PPOS方案组的Gn用量显著下降[(2204.6±1539.4)Uvs(2736.0±633.6)U,t=4.516,P<0.001],Gn使用时间缩短[(9.45±1.75)dvs(10.34±2.00)d,t=5.125,P<0.001],促排卵费用减少[(650.22±450.52)元vs(843.73±273.43)元,t=6.755,P<0.001];改良短方案组的获卵数[(4.88±2.21)个vs(4.01±2.39)个,t=4.507,P=0.001]、可移植胚胎数[(3.35±1.81)个vs(2.90±1.92)个,t=3.302,P=0.005]高于PPOS方案组;改良短方案种植率高于PPOS方案组[23.69%(95/401)vs14.01%(36/257)],差异具有统计学意义(χ^2=9.210,P=0.002),累积临床妊娠率[37.62%(79/210)vs27.62%(29/105),χ^2=3.107,P=0.078]、活产率[22.38%(47/210)vs17.14%(18/105),χ^2=1.173,P=0.279]较PPOS方案组有改善趋势,流产率[3.33%(7/210)vs1.90%(2/105),χ^2=0.475,P=0.723]、异位妊娠率[1.90%(4/210)vs0.95%(1/105),χ^2=0.443,P=0.668]比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论改良短方案与PPOS方案相比,可获得理想的获卵数、可移植胚胎数、胚胎种植率及临床妊娠率,因此,对于高龄且卵巢储备功能低下的患者,改良短方案不失为高龄患者新的选择。