温州医科大学法医专业开设司法鉴定必修课程的实践

司法鉴定形势发展和法医学专业人才培养,新开设司法鉴定必修课程,从制定教学大纲、选择教材、整合师资团队、引进PBL、CBL教学法、网络教学、实践训练、综合考核等方面实施教学,教学效果良好,并提出今后的教学改革方向。

温州地区人群21个STR基因座的突变情况分析

目的:观察和分析温州地区人群21个常染色体STR基因座的突变情况及其特征。方法:收集9418例支持亲权关系的亲权鉴定案件共21200个样本,采用AGCU EX22人类荧光标记STR复合扩增检测试剂进行扩增,比较各基因座的突变率和突变等位基因的亲代来源、片段大小、突变步数及重复单位的增减比例、方向的频次,分析突变各相关因素之间的相互关系。结果:9418例亲子鉴定中共发现314例突变,观察到319个突变事件;21个基因座中,观察到20个基因座发生突变,突变率为0.08‰~3.48‰,各基因座突变率间差异无统计学意义(χ^(2)=29.77,P>0.05);父源突变与母源突变的比例为4.78:1,父源等位基因发生突变的概率总体上大于母源等位基因发生突变的概率,差异有统计学意义(t=4.55,P<0.05);父源突变和母源突变出现重复单位增加、减少与不确定3种频次的差异无统计学意义(χ^(2)=0.28,P>0.05);一步突变与二步及以上突变中出现的重复单位增加、减少与不确定3种频次的差异具有统计学意义(χ^(2)=7.22,P<0.05);短、中、长片段等位基因突变出现的重复单位增加、减少与不确定3种频次的差异具有统计学意义(χ^(2)=26.81,P<0.05)。结论:常染色体STR基因座等位基因突变现象较为常见,在法医学亲权鉴定和DNA寻亲数据库建设中应引起注意。

温州汉族人群9个STR基因座的遗传多态性

目的:分析温州汉族人群9个STR基因座(D18S1364、D12S391、D13S325、D6S1043、D2S1172、D11S2368、D22-GATA198B05、D8S1132、D7S3048)的等位基因及基因型频率分布。方法:从无血缘关系的355例温州汉族个体的抗凝血中提取DNA,用STR_Typer_10_v1试剂盒对9个STR基因座进行复合PCR扩增,用AB公司310遗传分析仪和Gene Mapper ID 3.2v软件作STR分型,用Power State V12.xls分析软件进行等位基因频率和法医学常用参数统计分析。结果:该9个基因座检出15、12、9、17、15、13、11、10、12个等位基因,9个基因座基因型频率分布均符合Hardy-Weignberg平衡(P>0.05);观测杂合度大于0.7831,多态信息含量均大于0.7666,个体识别能力(Dp)均大于0.9266。结论:温州汉族人群的9个基因座均具有较高的遗传多态性,是较理想的遗传标记系统,本研究所得数据可为温州汉族人群法医个体识别、亲权鉴定及遗传学研究提供依据。

同胞关系法医学鉴定1例

1案例1.1简要案情因出国公证需要,古甲、古乙和古丙(均为化名)三姐妹要求对两两之间的同胞关系进行鉴定。1.2检验方法采集古甲、古乙和古丙3人的血样,用Chelex法提取检材DNA。采用AGCU Expressmarker 22荧光检测试剂盒、AGCU 21+1 STR荧光检测试剂盒和AGCU X19 STR荧光检测试剂盒(无锡中德美联生物技术有限公司)对检材DNA进行PCR复合扩增。

同母异父半同胞鉴定1例

1案例1.1简要案情刘大、刘二和刘三(均系化名)系兄弟,现仅刘三健在。刘长女和刘次女两人系刘大和王某之女。刘二去世后,刘三与刘次女围绕刘二的财产继承事宜产生纠纷。刘次女声称自己实际是刘二所生,而刘三对此持反对态度。

牙釉质基因Y片段缺失亲子鉴定1例

目的通过对亲权关系中牙釉质基因Y片段缺失的案例进行报道,分析其对亲子鉴定中结果的影响及解决方法。方法采用聚苯乙烯二乙烯基苯树脂(chelex)法提取被鉴定人样本的DNA,使用AGCU EX22与AGCU Database Y24人类荧光标记STR复合扩增检测试剂进行复合PCR扩增,使用ABI-3500遗传分析仪电泳检测,使用GeneMapper®ID-X 1.5软件分析结果。结果结果显示子的牙釉质基因扩增Y片段缺失,仅检测到Amel-X,系染色体片段Amel-Y缺失所致,本次检测的所有STR基因座均进行多次检验,并排除污染的可能性。结论在亲子鉴定中如遇到Amel-Y缺失时,应综合分析检验结果,并增加试剂盒检验,避免结果中对被鉴定人性别的误判,本案例报道为亲子鉴定领域中Amel-Y缺失的案件,提供了一定的参考思路及解决方法。

胫骨缺损后腓骨移植伤残等级鉴定1例

1案例 1.1简要案情 王某,男,27岁,于2008年4月29日因交通事故受伤。医院诊断为左侧胫腓骨开放性粉碎性骨折,左侧胫骨骨缺损。当日行清创左侧腓骨切复内固定术、左侧胫骨外固定支架固定术,1月余后行左侧胫骨缺损游离腓骨移植术,取右侧腓骨17 cm移植于左侧胫骨中段。1.2法医学检验神志清,扶拐入室,查体合作,问答切题。

IL-10、TGF-β1在小鼠深静脉血栓中的时序性变化

目的检测小鼠深静脉血栓发展过程中白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达变化,探讨其在血栓形成时间推断中的应用价值。方法对实验组小鼠建立下腔静脉结扎模型,分别于术后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d、21 d过量麻醉处死小鼠,在结扎点的下方提取形成血栓的下腔静脉段。对照组小鼠不进行结扎,提取与实验组相同部位的正常下腔静脉段作为对照样本。应用免疫组织化学染色、蛋白质印迹法和real-time qPCR检测IL-10和TGF-β1在血栓形成期间的表达变化。结果免疫组织化学染色结果显示,IL-10主要表达于血栓中的单核细胞,TGF-β1主要表达于血栓中的单核细胞和成纤维样细胞。蛋白质印迹法以及real-time qPCR检测结果显示,各实验组IL-10和TGF-β1的表达水平均高于对照组。IL-10的mRNA及蛋白水平分别于术后7 d和10 d达到峰值,术后7 d的mRNA表达量是对照组的(4.72±0.15)倍,术后10 d的蛋白表达量是对照组的(7.15±0.28)倍。TGF-β1的mRNA及蛋白水平分别于术后10 d和14 d达到峰值,术后10 d的mRNA表达量是对照组的(2.58±0.14)倍,术后14 d的蛋白表达量是对照组的(4.34±0.19)倍。结论深静脉血栓演变期间IL-10和TGF-β1呈现时序性表达变化,IL-10和TGF-β1的表达水平可以为血栓形成时间推断提供参考依据。

砷、汞经骨髓吸收致急性中毒死亡1例

1案例 1.1简要案情 汪某，男，61岁，有多年右侧股骨上端慢性骨髓炎病史。某年8月19日，请当地一土郎中上门医治，土郎中把白降丹粉末（购自当地某药店）塞进汪某右侧大腿根部的5个窦道内。汪某迅速出现腹痛、上吐下泻等症状，第2天送医院抢救无效死亡。

糖尿病损伤愈合期间中性粒细胞及肌成纤维细胞数量与损伤时间的关系

目的观察糖尿病损伤愈合期间中性粒细胞及肌成纤维细胞数量的时序性变化,初步探讨其对糖尿病损伤形成时间推断的应用价值。方法选取糖尿病组DB小鼠及其相同周龄的正常对照组小鼠,建立损伤愈合模型,提取伤后不同时间点的损伤样本,应用免疫组织化学染色技术观察创口愈合期间中性粒细胞及肌成纤维细胞的数量。结果对照组和糖尿病组创口浸润的中性粒细胞数量分别于伤后12 h和5 d达到峰值。与对照组相比,糖尿病组创口的中性粒细胞数量在伤后6 h～1 d显著减少,伤后5～14 d显著增多。伤后5～10 d,糖尿病组创口每个高倍视野的中性粒细胞平均数量大于30,而对照组创口的中性粒细胞平均数量小于20。肌成纤维细胞出现于伤后3～14 d的对照组创口及伤后5～14 d的糖尿病组创口。对照组和糖尿病组创口的肌成纤维细胞数量在伤后3～7 d差异有统计学意义(P<0.05)。结论与正常小鼠的损伤愈合相比,糖尿病小鼠的损伤愈合期间中性粒细胞及肌成纤维细胞数量呈现不同的时序性变化。本研究数据可为严重糖尿病患者的损伤形成时间推断提供参考。

隆胸手术引起脂肪栓塞综合征死亡1例

1案例1.1简要案情某年5月11日,陈某为虢某实施隆胸手术,用注射器从双侧大腿臀部皮下抽吸脂肪颗粒,注射到双侧乳房皮下,在注射脂肪颗粒到左侧乳房皮下的过程中虢某突发呼吸困难,急送上级医院抢救。上级医院化验凝血功能:凝血酶原时间为42.6 s(正常参考值16~18 s),活化部分凝血活酶时间大于150 s(正常参考值23~33 s),纤维蛋白原小于0.5 g/L(正常参考值2~4 g/L),D-二聚体(定量)大于20 μg/mL(正常参考值小于200 μg/L)。

UPLC-MS/MS同时检测胃内容物中4种巴比妥类药物

目的建立超高效液质联用仪(UPLC-MS/MS)法检测人胃内容物中巴比妥类药物。方法胃内容物中的巴比妥类药物用乙腈直接蛋白沉淀法处理,采用UP LC BEH C 18柱,柱温为30℃。流动相由乙腈和10 mmol·L^(-1)醋酸铵溶液组成,梯度洗脱流速为0.4 mL·min^(-1),洗脱时间为4 min,进样2μL。电喷雾离子源(ESI),负离子检测,采用多反应监测(multiple react ion monitoring,MRM)方式进行定量分析。结果在5~2000 ng·mL^(-1)浓度范围内,胃内容物中4种巴比妥类药物线性良好(r>0.995),最低检出限为2~5 ng·mL^(-1)。胃内容物中4种巴比妥类药物日内精密度RSD<13%,日间精密度RSD<12%,准确度范围在91.1%和107.1%之间,平均回收率高于67.8%,基质效应在85.2%和97.6%之间。结论该分析方法灵敏、快速、选择性好,并成功应用于法医毒物案例分析。

心脏性猝死临床相关因素与病理探析

目的:探讨分析心脏性猝死(SCD)的相关因素与病理基础,为SCD的防治提供线索与对策。方法:抽取广东省东莞市厚街医院经尸体解剖、生前无明确病史的SCD病例12例,对其临床及病理资料展开回顾性分析。结果:12例SCD病例中男性与女性的比例是3∶1;12例患者中存在明确诱因者7例,SCD的诱因以运动或劳累过度、情绪波动多见,两者所占比例最高(P<0.05);心脏标本病理检查镜下可发现不同程度的冠脉血管狭窄、心肌细胞变性或纤维化、心肌间质细胞浸润等现象。结论:SCD以冠心病为主,中老年男性多见,大部分病例有明确诱因。SCD病因复杂,对心脏标本进行病理检查对解释SCD原因起重要作用。积极开展冠心病的一、二级预防,祛除诱因是防治SCD的有效措施。

婴儿侧脑室脉络丛肿瘤术后并发症死亡1例

1案例1.1简要案情熊某,女,某年1月26日出生,7月14日出现恶心、呕吐症状,7月18日以“乳房发育1月,人软2d”住院。7月18日头部CT诊断意见:左侧侧脑室占位性病变,建议MRI检查;脑积水。7月20日头部MRI诊断意见:左侧侧脑室占位伴脑积水,建议MRI增强检查。7月24日行开颅探查肿瘤切除术,术中发现:肿瘤位于侧脑室后角,质软,边界尚清,血供丰富。7月26日头部CT诊断意见:左侧侧脑室占位术后;脑积水伴脑室积血,蛛网膜下腔出血。

虚拟解剖技术在医疗纠纷尸体检验中的应用

目的探讨CT扫描技术在医疗纠纷死亡原因鉴定中的应用价值。方法在2017年7月至2018年12月间,对12例医疗纠纷案例行全身CT检验,比较CT影像诊断与解剖所见及生前与死后CT诊断的差异性,分析尸体的CT常规检验在病变与损伤的诊断方面的优势与劣势。结果 CT影像诊断与解剖所见比较显示,在密度改变差异大的病变和损伤的诊断方面CT检验存在优势,如肺不张、肺炎、钙化、骨折、出血等;生前与死后CT诊断的比较显示医疗纠纷案件的尸体保存都较为良好,死后CT扫描检验对生前疾病诊断具有意义。结论虚拟解剖技术在医疗纠纷尸体检验中有较高的应用价值,可在尸体解剖前为鉴定人提供有效信息,也可在无法进行解剖的情况下为死亡原因分析提供参考依据。

AChE在小鼠皮肤切创愈合过程中的时序性表达及分布

目的检测乙酰胆碱酯酶(acetylcholinesterase,AChE)在小鼠皮肤切创愈合过程中的时序性表达及分布特征,探讨其在创口愈合中的作用及其作为创口形成时间推断参考指标的可行性。方法 45只C57BL/KsJ小鼠被随机分为1个对照组和8个切创组。切创组建立皮肤切创模型,分别于伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d提取皮肤创口样本;对照组提取未切创的皮肤组织。应用免疫组织化学染色、双重免疫荧光染色及Western印迹法检测皮肤样本中AChE的表达与分布。结果免疫组织化学染色结果显示,伤后6～12h,AChE主要表达于浸润的多形核白细胞;伤后1～3d,大量浸润的单个核细胞呈现AChE阳性染色;伤后5～14d,AChE阳性细胞以成纤维样细胞为主。AChE的阳性细胞率于伤后6h开始增多,伤后1d达到峰值。双重免疫荧光染色结果显示,AChE阳性的单个核细胞和成纤维样细胞主要为巨噬细胞和肌成纤维细胞。Western印迹法检测结果显示,各切创组AChE表达的相对表达水平均高于对照组,于伤后1d达到峰值,此后下降,于伤后7d达到第2个峰值。结论皮肤创口愈合期间AChE时序性表达于多形核白细胞、巨噬细胞和肌成纤维细胞,提示其可能参与创口愈合的炎症反应和纤维性修复的调节。联合使用多种方法检测AChE的表达,可以为创口形成时间的推断提供参考依据。

水中高腐尸体阴道拭子混合Y-STR分型侦破命案1例

1案例1.1简要案情某年冬季,在某市景区附近田间的水塘里发现一具女性高腐尸体,全身赤裸,双手腕及双小腿均被死结捆绑,躯干背部尼龙绳死结捆绑四块砖块,分析为强奸杀人案。经侦查,死者为杨某,23岁,与其男友李某一起租住在该市,二人关系和睦,李某无作案时间。据李某交代,在杨某失踪的两天前两人有过性生活。因案发在田间,案发处无监控视频,尸体高度腐败,DNA检验成了破案的主要突破口。

IL-33在小鼠皮肤创伤后损伤时间推断中的作用

目的通过观察白细胞介素-33(interleukin-33,IL-33)在皮肤创伤后的时序性变化规律,探讨IL-33在法医学实践中用于损伤时间推断的应用价值。方法利用直径为5mm的圆形锉刀在小鼠背部建造皮肤损伤模型,于伤后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d取损伤处组织,对照组在与创伤组小鼠相同部位取同等大小的皮肤样本。采用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色法观察皮肤创伤后愈合过程中的形态学变化,通过Western印迹法、免疫组织化学染色和双重免疫荧光染色法检测皮肤创伤样本IL-33的表达变化。结果Western印迹法结果显示,伤后3h,IL-33蛋白表达稍有下降,6h后IL-33蛋白表达逐渐增加,于伤后3d达峰值,随后逐渐减少。免疫组织化学染色结果显示,在对照组皮肤的表皮、毛囊、皮脂腺及真皮中固有细胞有少量IL-33阳性表达,伤后3h,IL-33阳性细胞率开始增加,伤后3d达到峰值,随后逐渐减少。双重免疫荧光染色结果显示,伤后1~3d,IL-33阳性表达细胞主要为巨噬细胞,伤后5~7d,IL-33阳性表达细胞主要为肌成纤维细胞。HE染色结果显示该皮肤损伤模型创口愈合过程符合炎症的病理学发展规律。结论IL-33有望成为法医学推断皮肤损伤时间的参考指标。

皮肤切创愈合过程中FoxO1表达与损伤时间关系

目的检测皮肤切创愈合过程中FoxO1的表达及其时间规律性变化。方法建立小鼠皮肤切创模型,应用免疫组织化学技术及Western印迹法检测切创后不同时间段皮肤中FoxO1的表达。结果 HE染色显示皮肤创口正常愈合。免疫组织化学结果显示,对照组FoxO1弱表达于表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮及真皮中少数的成纤维细胞;伤后6~12h创口周边区表皮及皮肤附件FoxO1表达增强,可见浸润的中性粒细胞和少量单核细胞表达FoxO1;伤后1~3d FoxO1以单核细胞阳性表达为主;伤后5~10d FoxO1以新生血管内皮及成纤维细胞表达为主;伤后14d仍有少量成纤维细胞表达FoxO1。Western印迹法检测显示,创伤各组创口皮肤的FoxO1表达量均高于对照组,其中伤后12h和伤后7d为FoxO1的两个表达峰值。结论 FoxO1在皮肤切创愈合过程中呈现一定的时序性变化,有望成为推断创口形成时间的生物学指标。

小鼠皮肤切创愈合过程中膜联蛋白A1的表达

目的通过检测皮肤切创愈合过程中膜联蛋白A1(annexin A1,ANXA1)的表达变化,探讨其在皮肤损伤修复过程中的表达变化规律及作用。方法制作小鼠皮肤损伤模型,分别取对照组和损伤后6h、12h、1d、3d、5d、7d、10d、14d的损伤处皮肤组织,应用苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察创口形态学变化,应用免疫组织化学技术及蛋白质印迹法检测ANXA1的表达。结果 HE染色显示皮肤创口正常愈合。免疫组织化学结果显示:对照组ANXA1表达于表皮、毛囊、皮脂腺、血管内皮;实验组伤后6～12h在创口周边区表皮及皮肤附件中ANXA1表达增强,在中性粒细胞和少量单核细胞中呈高表达;伤后1～3d ANXA1阳性表达以单核细胞为主;伤后5～10d,ANXA1阳性表达以新生血管内皮及成纤维细胞为主;伤后14d仍有少量成纤维细胞表达ANXA1。蛋白质印迹法检测结果显示,伤后6h与对照组相比,ANXA1表达明显升高,在1d时达到峰值,之后逐渐下降。结论 ANXA1可能参与了皮肤损伤修复的调控,在愈合过程中呈一定的时序性变化,有望成为推断创口形成时间的生物学指标。