京尼平苷对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖及血管生成的影响及机制研究

目的研究京尼平苷(Gen)对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞(hRVECs)增殖、迁移及血管形成能力的影响,并探讨其作用机制。方法采用不同浓度(0、1、5、10、20、40、80 mg·L^(-1))Gen干预hRVECs 24 h,CCK-8检测Gen对hRVECs细胞增殖活性的影响。将hRVECs分为对照组,高糖(25 mmol·L^(-1))组,Gen低、中、高浓度(5、10、20 mg·L^(-1))组,贝伐珠单抗(BEV,250μg·L^(-1))组和Gen高浓度+BEV(250μg·L^(-1))组。CCK-8检测细胞增殖活性;划痕实验检测细胞迁移能力;体外成管实验检测细胞成管能力;Western blot检测细胞中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)、可溶性VEGF受体-1(sFlt-1)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)等蛋白表达水平。结果与0 mg·L^(-1)Gen比较,1、5、10、20、40、80 mg·L^(-1)Gen对hRVECs增殖活性的影响差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与对照组比较,高糖组hRVECs增殖活性和迁移能力均显著增强(均为P<0.05),细胞环形管状结构增多,VEGF-A、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均升高(均为P<0.05),sFlt-1蛋白表达水平降低(P<0.05)。与高糖组比较,Gen各浓度组和BEV组细胞增殖活性和迁移能力均减弱(均为P<0.05),细胞环状结构减少,VEGF-A、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均为P<0.05),sFlt-1蛋白表达水平均升高(P<0.05)。与Gen高浓度组比较,Gen高浓度+BEV组细胞增殖活性显著减弱(P<0.05),细胞环状结构减少,VEGF-A、MMP-2和MMP-9蛋白表达水平均显著降低(均为P<0.05),sFlt-1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论Gen可抑制高糖诱导的hRVECs增殖、迁移与血管形成,其作用机制可能与调控VEGF/sFlt-1轴平衡有关。

京尼平苷对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜微血管生成的影响及其机制

目的探讨京尼平苷(Gen)对糖尿病视网膜病变(DR)大鼠视网膜微血管生成的影响及其机制。方法取6周龄SPF级雄性Wistar大鼠50只,将眼部正常的大鼠随机分为正常组、模型组、Gen低剂量组、Gen高剂量组和羟苯磺酸钙组,每组10只。除正常组外,其余组大鼠通过高糖高脂饲料饲养联合链脲佐菌素诱导DR大鼠模型。模型构建成功后立即进行药物干预。Gen低剂量组和Gen高剂量组大鼠分别以25 mg·kg^(-1)和100 mg·kg^(-1)Gen灌胃,羟苯磺酸钙组大鼠给予5.8 mg·kg^(-1)羟苯磺酸钙灌胃,而正常组和模型组大鼠灌胃等量溶剂,每天1次,连续4周。给药期间正常组大鼠继续喂养普通饲料,其余各组大鼠继续喂养高糖高脂饲料。ELISA检测大鼠血清中血管内皮生长因子(VEGF)和可溶性血管内皮生长因子受体1(sFlt-1)的含量;HE染色观察大鼠视网膜组织病理学变化;过碘酸雪夫染色观察大鼠视网膜微血管生成情况;Western blot检测大鼠视网膜组织中VEGF、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、sFlt-1等蛋白表达水平。结果药物干预结束(第4周),模型组大鼠血清中VEGF含量高于正常组,sFlt-1含量低于正常组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。Gen高剂量组和羟苯磺酸钙组大鼠血清中VEGF含量低于模型组,sFlt-1含量高于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.001);而Gen低剂量组大鼠以上指标与模型组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。药物干预结束(第4周),正常组大鼠视网膜组织形态正常,内核层与外核层细胞排列整齐。模型组和Gen低剂量组大鼠视网膜组织内核层与外核层细胞排列松散,神经节细胞减少,毛细血管充血。Gen高剂量组和羟苯磺酸钙组大鼠视网膜组织内核层与外核层细胞排列趋于正常,神经节细胞较模型组明显增多。药物干预结束(第4周),模型组大鼠视网膜组织血管管径不均,出现节段性膨大,视网膜组织微血管生成数高于正常组,差异有统计学意义(P<0.001)。Gen高剂量组和羟苯磺酸钙组大鼠视网膜微血管生成数低于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.001);而Gen低剂量组大鼠视网膜微血管生成数与模型组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。药物干预结束(第4周),模型组大鼠视网膜组织中VEGF、HIF-1α和ICAM-1蛋白相对表达量均高于正常组,sFlt-1蛋白相对表达量均低于正常组,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。Gen高剂量组和羟苯磺酸钙组大鼠视网膜组织中VEGF、HIF-1α和ICAM-1蛋白相对表达量均低于模型组,sFlt-1蛋白相对表达量均高于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.001);而Gen低剂量组大鼠以上指标与模型组相比,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论Gen通过抑制VEGF表达,促进sFlt-1表达,从而抑制DR大鼠视网膜微血管生成,达到治疗DR的作用。

GLP-1诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变的保护作用

目的 研究GLP-1通过调控mTOR信号通路诱导的自噬对糖尿病大鼠视网膜病变是否存在保护作用。方法 建立符合要求的糖尿病视网膜病变大鼠模型,分为模型组、胰岛素组和GLP-1组,每组6只,于造模后即刻、4周、8周、12周测定大鼠空腹血糖水平,12周后处死,取视网膜组织行HE染色,免疫组化法测LC3、P53的表达,超氧化物歧化酶法测定血清氧化应激产物ROS、MDA的含量,Western blotting法测定mTOR蛋白表达。结果 与模型组相比,胰岛素组和GLP-1组可以明显降低空腹血糖,差异有统计学意义,而两组内比较差异无统计学意义。HE染色显示模型组视网膜神经节细胞排列紊乱,细胞减少或缺失,而胰岛素组和GLP-1组视网膜神经节细胞排列较规整,数量无明显减少,接近正常。免疫组化显示GLP-1组LC3、P53蛋白表达较其他组升高分别为(2.34±0.13,0.46±0.03),与各组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。GLP-1组氧化应激产物ROS、MDA含量分别为(74.68±4.08,55.60±1.50),较其他组减少,各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting法测定GLP-1组mTOR蛋白含量下降(0.43±0.04),与各组间比较差异有统计学意义(F=105.447,P<0.05)。结论 GLP-1可能通过调控mTOR信号通路,激活自噬,减少视网膜氧化应激损伤,从而达到保护视网膜的作用。