产生志贺样毒素的噬菌体φ297整合酶基因(int)的克隆和序列分析

目的 :克隆并分析细菌性噬菌体 φ2 97的整合酶基因 (int)。方法 :采用加接头的基因DNA片断为模板进行步移PCR ,根据溶源性噬菌体 φ2 97的染色体DNA上类似于噬菌体 933W的整合酶基因的一个 40个核苷酸设计引物 ,进行扩增、克隆、亚克隆、测序和序列分析。结果 :得到了噬菌体 φ2 97编码的整合酶基因 (int)的完整序列 ,它的长度是 1 2 87bp ,编码了 42 8个氨基酸的Int蛋白质。将它们的序列与λ噬菌体的整合酶家族其它成员进行了比较 ,发现噬菌体 φ2 97的整合酶基因 (int)与噬菌体VT1 Sakai的整合酶基因有 79%的同源性 ,噬菌体 φ2 97的Int蛋白与噬菌体VT1 Sakai的Int蛋白在氨基酸序列上有 82 %的同源性。N 末端的氨基酸区域是完全保守的 ,而中心区和C 末端则显示出较大差异。结论 :噬菌体 φ2 97与λ噬菌体的int基因来源于同一基因库 ,噬菌体 φ2 97可能属于λ噬菌体家族。

产Shiga毒素噬菌体φ297在大肠杆菌K12染色体上整合位点的定位研究

鉴定大肠杆菌O15 7产生Shiga毒素 (Stx)的噬菌体 φ2 97在大肠杆菌K12染色体上的插入位点。采用加接头PCR方法从与噬菌体 933W的整合酶基因int同源的核苷酸开始向未知区域进行步移测序 ,寻找目的基因。将获得的DNA序列与核苷酸数据库进行比较 ,确定了细菌性噬菌体 φ2 97的attL、attR和中心序列位于大肠杆菌K12的yecE基因内。噬菌体 φ2 97在宿主细胞E .coliK12染色体上的整合位点是yecE基因。

噬菌体φ297切除酶(xis)基因的克隆和序列分析

目的:克隆噬菌体φ297 切除酶(xis)基因,并对其进行遗传与变异研究。方法:提取埃希氏大肠杆菌O157:H7 菌株EH297染色体DNA,采用步移PCR方法寻找目的基因,并通过克隆、亚克隆、DNA测序等分子生物学方法获得切除酶基因,通过序列分析软件对此基因进行分析。结果:克隆获得噬菌体φ297编码的切除酶基因(xis)的完整序列,它的长度是255 bp,编码了一个84个氨基酸组成的蛋白质(Xis),将它们的序列与λ噬菌体的切除酶家族的其它成员进行了比较。其结果是噬菌体φ297的切除酶基因(xis)与噬菌体VT1-Sakai的切除酶基因(xis)只有4个核苷酸的不同,而Xis蛋白与噬菌体VT1-Sakai的Xis蛋白是一样的,与噬菌体933W的Xis蛋白只有47.2%的相似性。结论:噬菌体φ297编码的切除酶基因(xis)与λ噬菌体的切除酶基因同源。