浅谈形态学实验室教学切片的管理与维护

教学切片是形态学实验教学的重要资源之一,管理和维护好实验教学切片,能提高学生实验课的效果和实验教学的质量。实验室技术人员通过不断探索实践,总结出适合本实验室发展的一套教学切片管理和维护措施,为学校教学资源的管理和优化提供了有力的支持。

浅谈形态学数码显微互动实验室的管理与维护

实验室是学生理论联系实践的重要场所,实验室的正常运行是教学顺利进行的有力保障,实验室管理人员应积极思考如何更好地优化实验室资源,发挥实验室作用,从而为广大师生提供良好的教学环境。

补阳还五汤对大鼠脊髓损伤后移植神经干细胞存活、增殖与迁移的影响

目的:探讨补阳还五汤(Buyang Huanwu Decoction,BYHWD)灌胃对脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后移植胚胎神经干细胞(neural stem cells,NSCs)存活、增殖与迁移的影响。方法:将SD大鼠随机分为SCI组、NSCs移植组、NSCs移植联合补阳还五汤灌胃组。制作大鼠脊髓横断损伤模型,将BrdU标记NSCs细胞按浓度1×106/ml分别移植入移植组和联合组的脊髓横断处,损伤组用等量DMEM/F12完全培养基代替。术后联合组每天用BYHWD予以灌胃治疗1次,损伤组和移植组用生理盐水代替。各组在7、14、28 d后分别取材,用免疫荧光组织化学法检测移植在SCI处的NSCs存活、增殖和迁移情况。结果:损伤组未见BrdU标记阳性细胞;联合组各时间点BrdU标记阳性细胞数量均多于移植组各时间点,并有显著性统计学意义(P<0.05);联合组28 d时BrdU标记阳性细胞数量最多,与联合组7 d和14 d相比有显著性统计学意义(P<0.05);在联合组各时间点,BrdU标记阳性细胞向SCI处头尾端组织迁移的距离明显长于移植组各时间点。结论:脊髓横断损伤后,移植胚胎NSCs能够存活并增殖和迁移。补阳还五汤能够促进大鼠脊髓全横断损伤处移植的NSCs存活、增殖和迁移。

人肝细胞癌中PCNA和RAB10水平上调miR-224表达下调

目的为了进一步揭示肝癌发生的分子机理,探讨肝癌中细胞增殖与miR-224、RAB10表达之间的关系。方法选取确诊的肝细胞癌患者8例,手术后分别获得其肝细胞癌和癌旁组织,免疫组织化学检测代表细胞增殖的PCNA和癌基因产物RAB10的表达,实时定量PCR检测miR-224的表达。结果在肝细胞癌中,细胞增殖水平非常显著地高于癌旁组织;miR-224表达显著地低于癌旁组织,但RAB10水平显著高于癌旁组织。结论肝细胞癌发生可能在于肝细胞中下调的miR-224对其靶基因rab10沉默作用降低,使其高水平表达RAB10;高水平RAB10作为细胞癌基因产物促进细胞的增殖、发生肝癌。

甲状腺激素对胸腺上皮细胞CK19蛋白表达的影响

目的探讨甲状腺激素对胸腺的发育的影响及可能的机制。方法将12只怀孕4d的大鼠随机分成A组和B组,A组正常饮水,B组孕鼠供以含有0.02%甲巯咪唑的饮水制备仔鼠甲状腺功能低下动物模型,将A组的仔鼠随机分成对照组和甲状腺素钠组,将B组的仔鼠随机分成甲低组和甲低+甲状腺素钠组。甲状腺素钠组和甲低+甲状腺素钠组于出生后15d给予腹腔注射甲状腺素钠(0.5mg/kg体重,1次/d),连续给药25 d。所有动物于出生后40d麻醉处死,测定仔鼠的胸腺重量及脏器指数;采用放射免疫技术测定仔鼠血清中三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、四碘甲状腺原氨酸(tetraiodothyronine,T4)、促甲状腺激素(thyroid-stimulatinghormone,TSH)水平,免疫组织化学技术检测胸腺上皮细胞细胞角蛋白19(cytokeratin19,CK19)蛋白的表达量。结果与对照组比较,甲状腺素钠组仔鼠血清中T3、T4显著升高,TSH减少,胸腺重量增大;甲低组仔鼠血清中T3、T4明显降低,TSH显著增高,胸腺重量降低,胸腺上皮细胞CK19蛋白表达减少。与甲低组比较,甲低+甲状腺素钠组仔鼠血清中T3、T4升高,TSH降低,胸腺指数增大,胸腺上皮细胞CK19蛋白的表达明显增多。结论甲状腺激素可以通过影响胸腺上皮细胞CK19的表达量,使胸腺发育或退化。

在体气管灌注固定法在肺组织切片制作中的应用

在组织学实验教学和肺形态学相关的科学研究中，按照常规方法制作的肺组织石蜡切片，常常存在切面有空洞或裂隙、切片不连续、组织破碎和肺泡塌陷等缺陷，极大地影响了对实验结果的观察。究其原因是因为肺为含气器官，固定液难以渗透，脱水浸蜡不够造成的[…。为此，笔者设计了在体气管灌注固定法，克服了以上缺点，获得了较为满意的效果，具有一定的推广和应用价值。

将心肌闰盘特染和H-E染色整合的心肌纤维块染改进法

在组织学实验教学中,心肌纤维是要求学生重点观察和必须掌握的实验内容之一.据笔者了解,对于心肌纤维的观察,大多数医学院校需要2种切片标本来完成：使用常规H-E染色切片标本观察心肌的一般光镜结构,同时再配备心肌特染切片标本来观察其特化结构——心肌闰盘.制作2种切片,既费时费力,又增加了耗材量;实验课上,2种染色方法显示结果的差异,一定程度上可能会干扰学生对心肌结构的观察和理解.为此,本实验应用薄层火棉胶包被技术将心肌纤维的2种染色方法进行改进整合,在1张切片上能够清晰完整地显示原来两种切片的内容,同时又增加了两者原来不具备的优点.笔者认为该改进整合后的方法是一种具有广泛推广价值的心组织学实验教学切片制作染色法.

原位分子杂交中脱片问题浅析

核酸分子杂交技术是当今分子生物学研究的重要手段.原位分子杂交技术是分子生物学和组织化学结合的成果,能准确定位组织细胞内的特定基因表达.但分子杂交实验操作步骤繁琐,实验周期长,条件要求高,涉及实验试剂多,常常因为很小的因素而导致实验失败.原位分子杂交实验中,所有的操作均是针对载玻片上的目的组织进行的,因此,实验中的脱片就是常常困扰实验者的一个问题[1～3].在此,笔者根据自己的实际操作经验和资料研究,对脱片问题进行简单分析,以求对实验有所帮助.

温度和时间对核仁组成区嗜银蛋白染色结果的影响

目的探讨温度和时间对核仁组成区嗜银蛋白染色结果的影响。方法胃癌标本12例做连续切片并分组,设定染色的温度和时间,观察染色结果并做统计学处理,行组间两样本均数比较的t检验,确定两组之间是否不同。结果温度37℃时间12分钟组,室温(16℃)时间12分钟组,温度37℃时间16分钟组,室温(16℃)时间50分钟组均与温度60℃时间12分钟组不同,P<0.01或P<0.05。结论较低温度下延长时间的染色未必能取得较高温度下的染色效果。

脱钙骨冷冻切片硫堇-苦味酸染色方法

传统制作骨切片的方法是采用骨组织经过脱钙后进行火棉胶包埋切片，硫堇一苦味酸染色。火棉胶切片存在程序繁琐、周期长、切片较厚等缺陷^[1]。笔者采用冷冻切片法对脱钙骨进行切片，然后硫堇一苦味酸染色。结果显示，冷冻骨切片制作染色方法操作程序简便，制作周期短，染色效果理想，适用于组织学实验教学中切片的大量制作。在与骨相关的科学研究领域也有一定的应用价值。

TRAIL及其受体在卵巢肿瘤中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在卵巢正常组织及卵巢肿瘤中的表达及意义。方法用免疫组织化学方法检测20例卵巢正常组织、22例卵巢良性肿瘤组织、26例卵巢恶性肿瘤组织中TRAIL及其受体的表达。结果正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤和恶性肿瘤中TRAIL表达阳性率分别为15.0%、30.4%、92.3%;TRAIL受体表达阳性率分别为10.0%、26.1%、76.9%。TRAIL及其受体在卵巢恶性肿瘤组织中的表达与正常卵巢组织、卵巢良性肿瘤中的表达比较有统计学意义(P<0.01)。结论 TRAIL及其受体的异常表达在卵巢恶性肿瘤的发生过程中起一定的作用。

肝细胞癌中API-5水平升高与细胞凋亡减少

目的为了为揭示肝癌发生的分子机制提供线索,了解肝细胞癌中API-5表达与细胞凋亡之间的关系。方法手术取得并确诊肝细胞癌和癌旁组织各16例,通过免疫组织化学二步法检测凋亡抑制因子-5(apoptosis inhibitor-5,API-5)的表达,利用TUNEL法检测其细胞凋亡,API-5表达水平和细胞凋亡水平用IPP v5.1图像分析软件进行检测分析。结果在肝细胞癌组肝细胞中,API-5蛋白水平明显高于癌旁组织组,而细胞凋亡水平则明显低于癌旁组织组。结论肝细胞中高水平的API-5作为细胞凋亡抑制蛋白,抑制了细胞的凋亡,打破了其细胞增殖和凋亡之间的平衡,导致肝细胞癌发生。

肝细胞生长因子联合D-二聚体及Wells评分在急性肺栓塞患者诊断中的应用价值

目的观察肝细胞生长因子(Hepatocyte growth factor,HGF)联合D-二聚体及Wells评分在急性肺栓塞(Acute pulmonary embolism,APE)患者诊断中的应用价值。方法选取我院2018年03月-2019年03月收治的疑似APE患者64例,入院后结合CT肺动脉造影(Computed tomograghic pulmonary Angiography,CTPA)筛选出APE组26例,非APE组38例,采用酶联免疫吸附法(ELISA)分别测定两组患者血清HGF水平,采用免疫比浊法分别测定两组患者血浆D-二聚体水平,应用Wells评分对所有患者进行评分,以三级评分法确定低度可能、中度可能、高度可能组患者。结果APE组患者血清HGF水平(772.75±257.27)pg/mL与血浆D-二聚体水平1.53(0.91,1.75)mg/L明显高于非APE组(480.47±152.51)pg/mL、0.67(0.47,0.84)mg/L,(t=﹣5.201,Z=﹣4.314,P<0.05),差异有统计学意义;通过Wells评分,高度可能组、中度可能组与低度可能组分别有14例、41例、9例,各组经CTPA诊断为APE患者分别为11例、14例、1例。ROC曲线分析示:以CTPA阳性诊断为金标准,HGF及Wells评分单独应用对诊断APE具有较高特异度,但灵敏度偏低;而D-二聚体对诊断APE灵敏度较高而特异度较低。当HGF与D-二聚体或Wells评分联合应用时,其对APE诊断的诊断效能、灵敏度与特异度均得到明显提升(P<0.05,差异有统计学意义)。结论HGF、D-二聚体、Wells评分均可作为临床上APE检测的特异性指标,当HGF与D-二聚体、Wells评分联合应用时,对APE的临床诊断具有较大的价值。

制作高质量冰冻切片的体会

目的探讨提高冰冻切片质量的方法和体会。方法细化冰冻切片的切前准备、取材以及切片全过程各个环节。结果节省切片时间,切片完整均匀,镜下细胞形态清晰,核浆染色对比分明。结论冰冻切片的每个环节都需要认真对待,精益求精,才能有效提高冰冻切片的质量。

肺组织切片的取材和固定新方法

应用在体气管灌注固定法固定肺组织,探索肺组织切片制作的新方法。在体气管灌注固定法操作简便实用,灌注量容易掌握,固定效果好,切片完整连续,组织结构无人为假象。

HE染色程序的使用和维护

探讨和总结苏木素-伊红染色(HE染色)程序各步骤的使用以及维护更新方法,使用该方法不但延长了程序的使用周期,节约大量的试剂,而且经过染色后的切片质量稳定,具有广泛的应用推广价值。