MARCH1在免疫及肿瘤等方面的研究进展

膜相关环状蛋白家族(membrane associated RING-CH,MARCH)是一类含有环指结构域的E3泛素化连接酶,MARCH1是其成员之一。早期研究认为MARCH1主要通过泛素化主要组织相容性复合体Ⅱ和CD86影响抗原提呈过程,新近研究发现除在免疫系统中的重要作用外,MARCH1在肿瘤的发生发展中也扮演重要角色。研究报道MARCH1在卵巢癌、肝癌中作为癌基因促进肿瘤的恶性生物学行为,但在膀胱癌中MARCH1作为miR-653的下游靶点发挥抑癌作用,可见在不同肿瘤中MARCH1的作用不尽相同。此外,MARCH1参与人类免疫缺陷病毒、多器官功能障碍综合征、糖尿病等疾病的进展也有少量报道。

山东某三甲医院临床抗菌药物使用情况分析

目的实地调研山东省某三甲医院临床抗菌药物使用现状,指导临床合理使用抗菌药物。方法采用实地回顾性调查的方法,随机抽取山东某三甲医院2018年上半年出院患者病历5 779份,随机抽取2018年任意1日的门诊处方200份,分析该院的抗菌药物使用强度及合理用药情况。结果该院某1工作日的抗菌药物处方占比为18.5%;门诊应用抗菌药物主要为口服用药;门诊无限制级抗菌药物使用;未发现联合应用抗菌药物的情况。该院2018年上半年的抗菌药物使用率为46.46%,使用频率略高。主要给药途径为静脉输液(72.66%),联合用药的比例较高。2018年上半年抗菌药物使用强度(AUD)前5类药物依次为氨基糖苷类、大环内酯类、硝基咪唑类、喹诺酮类和青霉素类。结论该院2018年上半年门诊抗菌药物处方的使用情况基本合理,但病房抗菌药物用药频率过高。

沙库巴曲缬沙坦致不良反应特点分析

目的分析沙库巴曲缬沙坦致不良反应(ADR)的临床表现和特点,为临床安全用药提供参考。方法汇总2018年1月-2021年9月山东省ADR监测中心自发呈报系统收集到的沙库巴曲缬沙坦致ADR报告的相关数据,对报告涉及的患者年龄、性别、ADR分类、用法用量、ADR发生时间、累及器官/系统及主要临床表现、转归情况等进行统计分析。结果共纳入沙库巴曲缬沙坦致ADR报告59份,涉及患者59例,女性(24例,40.68%)少于男性(35例,59.32%),平均年龄为(73.78±11.28)岁。涉及例数最多的剂量为50 mg bid,ADR主要发生在用药后的7 d内。主要累及的系统是心血管系统,表现为低血压、休克以及心动过缓;还可累及胃肠道,引起腹泻、腹痛等表现,具有导致药物性肠病的可能。该药单独使用或与阿托伐他汀联合使用均可能引起药物性肝损伤,同时两者联用时也应警惕横纹肌溶解症的发生。结论临床应用沙库巴曲缬沙坦需特别加强对用药后1 d内的用药监护,可先从较低剂量用起,再根据患者用药反应及时采取调整剂量或停药等处理措施,保证患者用药安全有效。

姜黄素通过PI3K/p53信号通路调控人胃癌细胞SGC-7901的增殖、凋亡和周期

目的探讨姜黄素(Cur)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡和周期的影响及其分子机制。方法采用不同浓度梯度Cur(0、10、20、40μmol/L)处理正常培养的SGC-7901细胞。3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测在不同时间点(24、48、72 h)细胞增殖能力变化;Hoechst 33258荧光染色观察细胞凋亡状况;流式细胞术检测细胞凋亡水平及周期变化;Western blot检测PI3K/p53信号通路相关蛋白表达变化。结果 MTT结果显示,与对照组比较,Cur呈浓度依赖性抑制SGC-7901细胞增殖;细胞荧光染色结果显示Cur处理组的细胞亮蓝色荧光强度减弱;流式细胞术结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur处理组细胞凋亡率增加(P<0.05,P<0.01),G0/G1期细胞出现阻滞(P<0.01);Western blot结果显示,与对照组比较,不同浓度Cur组细胞PI3K蛋白表达量、Akt磷酸化水平均降低(P<0.01),而p21和p53蛋白表达量升高(P<0.05,P<0.01)。结论 Cur能抑制SGC-7901细胞的增殖效应,通过诱导细胞发生G0/G1期阻滞进而促进其凋亡进程,这可能与其对PI3K/p53信号通路的调控密切相关。

雌激素对雌鼠抑郁样行为和海马BDNF表达的影响

目的检测雌鼠不同性周期时的抑郁样行为、海马脑源性神经营养因子(BDNF)的表达量及雌激素剥夺和补加对抑郁样行为和BDNF表达的影响,阐明雌激素对抑郁症发病和治疗的调控作用。方法雌性C57小鼠利用阴道涂片染色法区分为发情前期和发情间期组,采用强迫游泳行为评价两组雌鼠的抑郁样行为,并通过Real-time PCR和Western blot方法检测2组小鼠海马中总BDNF mRNA和蛋白表达水平。运用糖水偏好方法检测基础条件下和慢性不可预知应激(CUS)条件下卵巢摘除(OVX)后雌鼠的抑郁样行为。最后,在CUS条件下,利用糖水偏好、强迫游泳及Real-time PCR方法分别检测雌激素补加对雌激素剥夺所诱导的抑郁样行为和海马中总BDNF mRNA表达的影响。结果强迫游泳行为结果显示发情间期雌鼠不动时间高于发情前期(P<0.05)。实时荧光定量PCR和Western blot结果显示发情间期海马中总BDNF mRNA和蛋白的表达量比发情前期显著降低(P<0.05)。糖水偏好结果显示:基础条件下,与假手术组相比,卵巢摘除组糖水偏好值没有变化(P> 0.05),CUS条件下,糖水偏好值降低(P<0.05)。糖水偏好和强迫游泳结果显示外源性补加雌激素能翻转CUS条件下OVX所诱导的糖水偏好值的降低和不动时间的增加。实时荧光定量PCR结果显示:与假手术组相比,OVX后海马BDNF总mRNA水平降低(P<0.05),而外源性补加雌激素后海马BDNF总mRNA水平恢复(P<0.05)。结论雌鼠性周期能影响抑郁样行为和海马BDNF的表达,雌激素缺失能增加小鼠对CUS诱导的抑郁样行为的易感性;而外源性雌激素补加能翻转CUS条件下OVX所诱导的抑郁样行为和海马BDNF mRNA表达的降低。

中国南海海绵Aaptos suberitoides的化学成分

目的研究中国南海海绵Aaptos suberitoides中化学成分。方法运用薄层色谱、Sephadex LH-20凝胶色谱、硅胶色谱、半制备高效液相各种色谱手段对化合物进行分离纯化。利用核磁共振、质谱等波谱学手段,并结合其他理化性质及文献数据鉴定化合物的结构。结果从海绵Aaptos suberitoides的甲醇粗提取物中分离鉴定了7个单体化合物,分别为3-(methylamino)demethyl(oxy)aaptamnie、aaptamine、尿嘧啶、胸腺嘧啶、环(脯-丝)二肽cyclo(Pro-Ser)、环(脯-苏)二肽cyclo(Pro-Thr)、脱氧胸腺嘧啶核苷。结论化合物aaptamine、环(脯-丝)二肽cyclo(Pro-Ser)、环(脯-苏)二肽cyclo(Pro-Thr)为首次从本属海绵中分离得到。

细胞自噬调节上皮细胞间充质转化过程对特发性肺纤维化的作用机制

目的特发性肺纤维化(IPF)确切的发病机制尚不明确。探讨IPF中细胞自噬对上皮细胞间充质转化过程(EMT)的调控作用及机制。方法实验分为对照组、肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组。对照组细胞(A549)常规培养,肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组细胞(A549)均加入5 ng/mL的TGF-β1进行诱导,肺纤维化组不做进一步处理,自噬诱导组、自噬抑制组分别加入终浓度10μg/L Rapamycin、10 mmol/L 3-Methyladenine来诱导或抑制细胞自噬;12、24、48 h,检测各组羟脯氨酸含量,Real-time PCR方法及Western blot方法检测各组α-肌动蛋白(α-SMA),α-SMA、LC3-Ⅱ或LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、Beclin1、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Vimentin的mRNA转录及蛋白表达水平。结果与对照组比较,肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组12、24、48 h羟脯氨酸含量、α-SMA、Vimentin的mRNA转录水均升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录均降低(P<0.05)。与肺纤维化组比较,自噬诱导组在12、24、48 h羟脯氨酸含量、α-SMA、Vimentin的mRNA转录水平降低(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录水平升高(P<0.05);而自噬抑制组12、24、48 hα-SMA、Vimentin的mRNA转录水均升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ、E-cadherin的mRNA转录水均降低(P<0.05)。Western blot检测结果表明,与对照组24 hα-SMA(1.21±0.17)比较,肺纤维化组(2.57±0.34)、自噬诱导组(1.69±0.31)、自噬抑制组(3.41±0.52)表达水均明显升高(P<0.05);与对照组24 h Vimentin的蛋白表达水平(0.27±0.07)比较,肺纤维化组(1.74±0.31)、自噬诱导组(1.03±0.25)、自噬抑制组(2.43±0.61)表达水均明显升高(P<0.05)。对照组、肺纤维化组、自噬诱导组、自噬抑制组Beclin1的表达分别为2.31±0.31、0.54±0.29、0.91±0.23、0.28±0.07,E-cadherin的表达分别为3.07±0.41、0.74±0.35、1.21±0.51、0.35±0.07,LC3-Ⅱ的表达分别1.15±0.14、0.53±0.11、0.76±0.09和0.17±0.08,以上数据提示Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白水均较对照组降低(P<0.05);与肺纤维化组比较,自噬诱导组α-SMA、Vimentin的蛋白表达水均降低(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达水均升高(P<0.05);自噬抑制组α-SMA、Vimentin的蛋白表达升高(P<0.05),Beclin1、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、E-cadherin的蛋白表达降低(P<0.05)。结论细胞自噬和EMT过程在IPF中起重要作用,IPF中诱导或抑制细胞自噬,可以通过抑制或激活上皮细胞的EMT过程,来抑制或促进IPF的发病进程。

慢性不可预知应激所致抑郁小鼠中缝背核脑区BDNF表达的变化

目的检测脑源性神经营养因子(BDNF)mRNA和蛋白在慢性不可预知应激(CUS)小鼠中缝背核脑区的表达情况。方法将20只C57小鼠随机分为对照组(Control,n=10)和CUS组(n=10)两组,CUS组给予21 d应激,对照组每天抓取1次&分别采用糖水偏好实验(SPT)和强迫游泳实验(FST)对2组小鼠进行抑郁样行为检测;免疫荧光双标法检测小鼠中缝背核脑区5-和色胺(5-HT)神经元和BDNF蛋白的共定位;采用实时荧光定量PCR(Q-PCR)和Western blot方法检测小鼠中缝背核脑区组织中总BDNF mRNA'BD NF外显子(Exons)mRNA及蛋白表达水平,并进行CUS所致小鼠抑郁样行为与总BDNF mRNA之间的相关性分析.结果CUS能导致小鼠糖水偏好值明显降低(P<0.05),强迫游泳不动时间明显增加(P<0.05)&BDNF与中缝背核5-HT神经元存在共定位。CUS能导致小鼠中缝背核脑区总BDNF mRNA和蛋白表达量显著降低(P<0.05)&相关性分析结果显示CUS组小鼠糖水偏好值与总BDNF mRNA存在显著正相关性(P<0.05);CUS组小鼠FST不动时间与总BDNF mRNA存在显著负相关性(P<0.05)&BDNF Exons mRNA检测结果显示CUS能导致小鼠中缝背核脑区BDNF Exon IV(P<0.05)和VI(P<0.05)mRNA表达降低,而Exon I(P>0.05)和Exon II mRNA(P>0.05)表达则没有显著变化。结论CUS能诱导产生抑郁样行为,并能导致中缝背核脑区5-HT神经元中BDNF表达的降低.

MARCH1通过PI3K/AKT信号通路对人胃癌细胞迁移和侵袭的促进作用

目的:探讨膜相关环状蛋白1(MARCH1)对胃癌细胞迁移和侵袭的影响,并阐明其可能的分子机制。方法:收集胃癌手术切除的20例胃癌组织和癌旁组织,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和Western blotting法检测不同组织中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平。选择人胃黏膜正常上皮细胞GES-1和人胃癌细胞BGC-823、BGC-803、AGS及SGC-7901,RT-qPCR法检测不同细胞中MARCH1 mRNA表达水平。取对数生长期的SGC-7901细胞系分为siNC(转染siNC)、siMARCH1-1组(转染siMARCH1-1)和siMARCH1-2组(转染siMARCH1-2),RT-qPCR法和Western blotting法检测各组细胞中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法检测各组细胞增殖活性,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Transwell小室实验检测各组细胞侵袭能力,Western blotting法检测各组细胞中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)和蛋白激酶B(AKT)蛋白表达水平。结果:与癌旁组织比较,胃癌组织中MARCH1 mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05),与胃黏膜正常上皮细胞GES-1比较,人胃癌细胞BGC-823、BGC-803、AGS和SGC-7901中MARCH1 mRNA表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。与siNC比较,siMARCH1-1组和siMARCH1-2组细胞中MARCH1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.01);与siNC比较,siMARCH1-1组和siMARCH1-2组细胞增殖活性差异无统计学意义(P>0.05),细胞划痕愈合率和侵袭数均明显降低(P<0.01),细胞中p-PI3K和p-AKT蛋白表达水平明显降低(P<0.01),AKT蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MARCH1能够促进胃癌细胞的迁移和侵袭,其机制可能与调控PI3K/AKT信号通路有关。

去甲斑蝥素调控YAP增强A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨去甲斑蝥素联合顺铂调控A549细胞对顺铂敏感性和增殖能力的影响,以及YAP分子是否参与这一过程。方法以A549细胞为实验对象,通过RT-PCR、Western blot和免疫荧光实验检测活化的caspase-3、Annexin V、YAP及YAP靶基因CTGF和Cyr61的表达水平;CCK-8和MTT实验检测各药物对细胞的增殖抑制率;荧光素报告基因实验检测各药物对YAP转录活性的影响。结果原癌基因YAP在肺癌细胞中高表达且处于活化状态,高表达的YAP促进肺癌细胞增殖。高浓度的去甲斑蝥素和顺铂能明显降低A549细胞的增殖能力,然而低浓度的顺铂和去甲斑蝥素的联合用药可通过调控YAP,增加A549细胞对顺铂的敏感性,进而抑制细胞增殖。结论低浓度的去甲斑蝥素和顺铂的联合用药增加A549细胞对顺铂的敏感性,明显降低YAP的转录活性和YAP的蛋白水平,降低其靶基因CTGF和Cyr61的表达水平,从而抑制细胞增殖。

脂联素受体AdipoR1对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响

目的:观察过表达或敲低人脂联素受体1(AdipoR1)对肺癌细胞PC9增殖和迁移的影响,阐明AdipoR1对肺癌的调控作用。方法:逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测AdipoR1在PC9细胞及正常人支气管上皮细胞HBEC中的表达量;利用分子克隆的方法构建AdipoR1过表达和shRNA干扰载体,转染至PC9细胞中并采用RT-PCR和Western blot方法检测AdipoR1的表达情况。运用CCK8方法和划痕愈合实验检测AdipoR1激动剂AdipoRon、AdipoR1过表达及AdipoR1敲低对PC9细胞的增殖和迁移活性的影响。结果:RT-PCR结果显示AdipoR1在PC9细胞中的表达量明显降低(P <0.05)。RT-PCR和Western blot结果显示AdipoR1过表达的PC9细胞中AdipoR1 mRNA和蛋白的表达量明显高于空载体细胞(P均<0.05),AdipoR1干扰组AdipoR1表达量明显低于阴性对照细胞(P均<0.05)。CCK8和划痕愈合实验结果显示,在24 h和48 h时,与溶剂对照组相比,AdipoRon能显著降低PC9细胞的增殖和划痕愈合率,过表达AdipoR1的PC9细胞增殖和划痕愈合率明显低于空载体细胞,而AdipoR1敲低能明显促进PC9细胞的增殖和划痕愈合率(P均<0.05)。结论:AdipoR1激动剂AdipoRon或AdipoR1过表达能抑制肺癌细胞PC9的增殖和迁移活性,而AdipoR1敲低则能明显促进肺癌细胞PC9的增殖和迁移。

泛素偶联酶2C促进肺癌细胞增殖和迁移与抑制细胞衰老

泛素偶联酶2C与多种肿瘤细胞的增殖密切相关,但其与肺癌发生和发展的关系尚不明确。本研究以肺癌A549细胞为材料,通过RT-PCR、Western印迹、免疫荧光、SA-β-Gal细胞衰老染色、细胞划痕和Trans-well实验,阐明UBE2C与肺癌细胞的增殖、衰老和迁移能力的关系。结果显示,UBE2C在肺癌细胞中的表达明显高于正常细胞。利用基因修饰技术瞬时过表达或靶向沉默UBE2C后,在肺癌A549细胞中,UBE2C的mRNA和蛋白质水平显著增加3.5倍或减少0.5倍,显著促进或抑制细胞增殖,进而减少或增加细胞的凋亡率。过表达UBE2C后,显著抑制细胞衰老;但沉默UBE2C后,则增加细胞衰老。此外,过表达UBE2C后,下调转移相关基因E-钙黏着蛋白的mRNA和蛋白质表达水平,且上调波形蛋白基因的表达水平,进而促进肺癌细胞的迁移。但靶向敲除UBE2C后,上调E-钙黏着蛋白,同时下调波形蛋白表达水平,进而抑制肺癌细胞的迁移。本研究的开展将明确UBE2C在肺癌中的作用及其机制,为以UBE2C为靶点,提高病人生存期提供了理论基础。

山东省8566例新的药品不良反应报告分析

目的:了解山东省新的药品不良反应(ADR)发生的现状及特点,为保障患者用药安全提供参考。方法:调取2019年10月-2020年3月上报至山东省ADR监测中心自发呈报系统新的ADR报告的相关数据,对报告类型、上报机构、报告人职业和患者性别、年龄、药物类型、累及器官/系统、临床表现等情况进行统计分析。结果与结论:共筛选出新的ADR报告8566例,占有效ADR的10.81%;其中新的一般的ADR有7961例(占92.94%),新的严重的ADR有605例(占7.06%)。新的ADR中,上报机构以医疗机构(占98.42%)为主,报告人职业以医师(占78.44%)为主;女性(4860例)略多于男性(3698例),45岁及以上人群(占70.00%)居多;静脉滴注(占47.67%)为主要给药途径。新的ADR怀疑药品排名前5位的药品类别依次为中药制剂(34.50%)、抗微生物药物(13.75%)、循环系统用药(11.41%)、神经系统用药(6.39%)、血液系统药物(4.81%),分别涉及517、91、64、53、50个品种,其中左氧氟沙星注射液致新的严重的ADR数量最多(24例)。新的一般的ADR主要累及胃肠系统、皮肤及其附件,临床表现为恶心、呕吐、皮疹等;新的严重的ADR主要造成全身性损害,临床表现为过敏性休克、胸闷、寒战等。建议临床加强对中药制剂、抗微生物药物、循环系统用药等药物的ADR监测,保障患者临床用药安全。

aaptamine与顺铂联合用药对人肺腺癌顺铂耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用

目的:探讨aaptamine与顺铂(DDP)联合用药对肺癌DDP耐药A549/DDP细胞的协同抑制作用,并阐明其可能的分子机制。方法:取对数生长期A549/DDP细胞,加入不同浓度aaptamine和(或)DDP培养48 h,采用CCK-8法检测aaptamine和DDP的半数抑制浓度(IC50),利用Chou-Talalay中效分析法计算aaptamine和DDP的联合指数(CI),确定最佳联合用药浓度。将细胞分为对照组、aaptamine组(5 mg·L^-1)、DDP组(1 mg·L^-1)和联合用药组(5 mg·L^-1aaptamine+1 mg·L^-1DDP),采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,克隆形成实验检测各组细胞克隆数,划痕实验观察各组细胞迁移能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting法检测各组细胞中耐药和凋亡相关蛋白表达水平。结果:aaptamine和DDP对A549/DDP细胞的IC50分别为19.45和12.86 mg·L^-1。所选择的不同浓度aaptamine和DDP对A549/DDP细胞均有协同抑制作用。细胞增殖实验,与对照组、aaptamine组和DDP组比较,联合用药组细胞增殖活性明显降低(P<0.01)。克隆形成实验,与对照组、aaptamine组和DDP组比较,联合用药组克隆数明显减少(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组、aaptamine组和DDP组比较,联合用药组细胞迁移率明显降低(P<0.01)。流式细胞术检测,与对照组、aaptamine组和DDP组比较,联合用药组细胞凋亡率明显升高(P<0.05或P<0.01)。Western blotting法检测,与对照组、aaptamine组和DDP组比较,联合用药组细胞中三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2(ABCG2)蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),B细胞淋巴瘤2原癌基因(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)/Bcl-2比值明显升高(P<0.05或P<0.01);与对照组比较,联合用药组切除修复交叉互补基因1(ERCC1)蛋白表达水平降低(P<0.05)。结论:aaptamine和DDP联合用药对A549/DDP细胞具有协同抑制作用,其机制可能与抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡和下调耐药蛋白ABCG2和ERCC1表达水平有关。

755例质子泵抑制剂致新的和严重的药品不良反应报告分析

目的了解山东省质子泵抑制剂致新的和严重的药品不良反应(ADR)的发生情况及特点,为临床安全合理用药提供参考。方法对山东省ADR监测中心2018年1月—2020年9月收集到的质子泵抑制剂致ADR的病例报告进行回顾性分析。结果共收集到3925例质子泵抑制剂致ADR病例报告,新的和严重的ADR共755例(19.24%),包括严重的ADR 359例(9.15%),新的一般的ADR 396例(10.09%)。男性(50.06%)与女性(49.67%)发生率基本接近,65岁以上老年人(40.77%)为高发人群;消化系统疾病(58.01%)为主要原患疾病,用药原因主要为胃炎(22.65%);引发ADR数量最多的药物为奥美拉唑(47.15%),其次为泮托拉唑(31.52%);发生ADR的主要途径是静脉给药(73.38%),ADR多发生于用药后25 min内,主要累及全身损害、皮肤及其附件损害、胃肠损害,若用药疗程7 d以上发生肝胆、血液系统损害等罕见ADR的数量较多,同时也应警惕循环系统、呼吸系统损害等新的ADR的发生。结论临床应掌握质子泵抑制剂ADR发生特点,加强用药监护,减少ADR对患者造成的损害,保障临床用药安全。

下调ADAR1表达对人肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的:探讨下调作用于RNA的腺苷酸脱氢酶1(ADAR1)对肺癌H1299和H520细胞增殖、迁移和上皮间质转化(EMT)的影响,并阐明其作用机制。方法:H1299和H520细胞系分为对照组(转染negative shRNA)和shADAR1组(转染shADAR1)。实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组细胞中ADAR1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖活性和克隆形成数,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中E钙黏附蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,shADAR1组的H1299和H520细胞中ADAR1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,shADAR1组H1299和H520细胞增殖活性、克隆形成数量和细胞划痕愈合率均明显降低(P<0.05或P<0.01),H1299和H520细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。结论:下调ADAR1表达能够抑制肺癌细胞的增殖、迁移及EMT。

山东省EGFR-TKI致不良反应报告分析

目的:分析表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)致不良反应(ADR)的临床表现和特点,为临床安全用药提供参考。方法:汇总2018年1月-2020年12月山东省ADR监测中心自发呈报系统收集到的EGFR-TKI致ADR报告的相关数据,对报告涉及的患者年龄、性别、药物品种、ADR分类、用法用量、ADR发生时间、累及器官/系统及主要临床表现、转归情况等进行统计、分析。结果与结论:共纳入EGFR-TKI致ADR报告120份,涉及患者120例。120例患者中,女性(60.83%)多于男性(39.17%),年龄以50~79岁(79.16%)为主。共涉及吉非替尼、奥希替尼、阿法替尼、埃克替尼和厄洛替尼等5种药物,分别有72、11、15、6、16例使用上述药品的患者发生了ADR;ADR以一般的(70.83%)为主,其次为严重的(22.50%)、新的一般的(5.00%)和新的严重的(1.67%)。所有患者均为口服给药,有2例使用埃克替尼的患者存在超说明书用药情况,其余均符合药品说明书用药要求。有61例(50.83%)患者的ADR发生在用药后1个月内,34例(28.33%)发生在用药后1~3个月,25例(20.83%)发生在用药后4~12个月,用药12个月以后未有ADR发生。ADR累及器官/系统以皮肤及其附件损害、胃肠系统损害和肝胆系统损害为主,主要临床表现为皮疹、腹泻和肝功能异常;此外,有患者出现间质性肺炎、骨髓抑制、舌肿胀和脑梗死等严重的或新的严重的ADR。102例患者经停药或对症处理后痊愈或好转,12例转归情况不详,6例未好转。建议临床应加强对患者用药后1个月内的药学监护,警惕新的、严重的ADR的发生,保障患者临床用药安全。

人LncRNA MIR31HG基因稳定转染PC9细胞系的构建及其对细胞增殖和迁移的影响

目的:检测过表达人MIR31HG基因对PC9细胞增殖和迁移的影响,阐明促癌基因MIR31HG的作用机制。方法:通过RT-PCR法扩增长链非编码RNA(LncRNA)MIR31HG全长序列,分子克隆至 pcDNA3.1 (―)真核表达载体,将pcDNA3.1-MIR31HG过表达质粒和对照质粒pcDNA3.1分别转染人肺癌PC9细胞。采用酶切鉴定法检测MIR31HG过表达载体的构建情况。通过G418药物筛选建立稳定过表达MIR31HG的PC9细胞系(PC9-pcDNA3.1-MIR31HG,稳定转染组)和对照细胞系(PC9-pcDNA3.1,空载体组)。采用RT-PCR法检测稳定转染细胞系中MIR31HG基因表达水平,采用CCK-8法和划痕愈合实验检测PC9细胞增殖活性和迁移能力。结果:琼脂糖凝胶电泳,成功扩增得到了MIR31HG的特异基因片段;MIR31HG真核表达载体经双酶切后分别产生目的基因和载体2个片段。RT-PCR法检测,稳定转染组细胞中MIR31HG mRNA表达水平明显高于空载体组(P<0.05)。CCK-8检测,在培养24、36和48 h时,稳定转染组细胞增殖活性明显高于空载体组(P<0.01)。划痕愈合实验,在培养48 h时,稳定转染组细胞划痕愈合率明显高于空载体组(P<0.05)。结论:成功构建了人LncRNA MIR31HG基因的真核过表达载体和过表达MIR31HG的稳定转染PC9细胞系,且MIR31HG过表达能够促进肺癌PC9细胞增殖和迁移。

NCTD通过靶向Hedgehog/SOX2 axis抑制急性髓系白血病HL60细胞的增殖

目的:研究去甲斑蝥素(NCTD)通过抑制Hedgehog信号通路(SHH)关键调节因子及其下游转录因子SOX2对急性髓系白血病细胞增殖的影响。方法:HL60和NB4细胞系经NCTD、SMO和GLI1抑制剂培养24h后,用CCK8检测细胞数目;HL60细胞系经NCTD处理后,利用免疫印迹法检测GLI1、SMO、SOX2的表达情况;将表达GLI1或SOX2的pcDNA3.1质粒转染至HL60细胞,空载体pcDNA3.1和pcDNA 3.1-EGFP分别作为阴性、阳性对照;免疫印迹法检测外源性GLI1、SOX2的表达水平,CCK8检测HL60细胞生长曲线及数目的变化;基因修饰的HL60细胞系经不同浓度NCTD作用后检测HL60细胞增殖情况。结果:NCTD,SMO及GLI1抑制剂以剂量依赖的方式抑制NB4/HL60细胞的增殖。与二甲基亚砜溶剂处理的对照组相比,NCTD可以显著降低SMO、GLI1和SOX2的蛋白水平。与pcDNA3.1空载体转染组相比,GLI1和SOX2在HL60细胞中过表达。生长曲线证实,GLI1/SOX2具有显著增殖优势。CCK8检测表明GLI1/SOX2过表达的HL60细胞对NCTD更具耐药性。结论:NCTD可通过靶向Hedgehog/SOX2 aixs抑制HL60的增殖。

尿石素B对胶质母细胞瘤U251细胞生物学行为的影响

目的检测尿石素B(UB)对胶质母细胞瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡及细胞周期的影响和机制。方法用不同剂量的UB处理胶质母细胞瘤U251细胞,运用CCK-8方法、克隆形成、划痕愈合、Transwell侵袭实验检测UB对U251细胞增殖、迁移、侵袭的影响;用流式细胞术检测UB对细胞周期和凋亡的调控作用;运用Western blot方法检测UB对下游信号通路蛋白ERK、AKT、p38、JNK磷酸化水平的影响。结果与对照组相比,24 h和48 h时,UB可降低U251细胞的吸光度值(P<0.01),且呈浓度依赖性;UB可减低细胞克隆形成百分比(P<0.01);UB能降低划痕愈合百分比(P<0.05或P<0.01);UB能降低侵袭细胞数量百分比(P<0.01);UB能显著诱导细胞凋亡(P<0.01),并使细胞周期阻滞于G_(2)/M期(P<0.01);UB能显著提高ERK的磷酸化水平(P<0.05或P<0.01),并抑制AKT的磷酸化水平(P<0.05或P<0.01)。结论UB能抑制胶质瘤细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期,并调控ERK和AKT的磷酸化水平。