本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以本生烟草为材料,研究了不同激素组合对本生烟草愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明:当本生烟草叶片在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT培养基中培养时,其出愈率最高,愈伤组织生长状况最好;在MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽生长最快,但存在一定程度的玻璃化现象;MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽长势较慢,但玻璃化程度较轻;对于生根诱导,MS、1/2MS培养基都可诱导不定根的产生,但NAA对根的生长更有效。

耐盐溶磷菌PSB7的鉴定及其溶磷效果研究

通过形态特征、生理生化特征和16S r DNA序列分析对一株分离自黄河三角洲地区沾化冬枣根际土壤的菌株PSB7进行鉴定,并对其耐盐特性和溶磷效果进行测定,为其在提高盐碱化土壤磷素利用率方面的应用提供理论依据。结果表明,菌株PSB7为土壤杆菌（Agrobacterium sp.）,在5~35 g/L的Na Cl液体培养基中生长良好。PSB7具有较强的溶磷能力,在改良蒙金娜无机磷液体培养基中培养7 d后,有效磷含量达72.26 mg/L,是无菌株对照的14.54倍。在含盐量0.45%的盐碱化土壤中添加PSB7,培养40 d,土壤中的有效磷含量由68.75 mg/L增加至96.60 mg/L,比未接菌对照增加了40.5%。菌株PSB7兼具耐盐和溶磷特性,在改善盐碱化土壤肥力方面具有很好的应用前景。

大肠杆菌otsB基因的克隆与转化本生烟草的初步研究

海藻糖是一种非还原糖类,可作为渗透调节剂,提高生物在非生物胁迫条件下的抗逆能力。6-磷酸海藻糖磷酸化酶(TPP)是海藻糖生物合成中的重要酶类,在大肠杆菌中,ots B基因编码TPP。以大肠杆菌的基因组DNA为模板,通过菌落PCR技术克隆得到ots B基因。将目的基因和p2300-GFP相连,从而构建p2300-ots BGFP表达载体。利用根癌农杆菌介导的叶盘法转化本生烟草,将ots B导入到受体细胞中。通过组织培养和抗生素筛选,初步获得具有抗性的转基因本生烟草。

小麦愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以普通小麦的成熟胚为试验材料,研究不同激素组合对小麦愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明,小麦愈伤组织诱导效果最好的培养基为W5[MS+0.5 g/L水解络蛋白(CH)+2.0 mg/L 2,4-D+0.15 g/L天冬酰胺(Asn)],在此培养基中,成熟胚产生的愈伤组织质量最好,诱导率最高。对于不定芽诱导,最适培养基为WF8(MS+0.5 g/L CH+4.0 mg/L KT+0.3 mg/L NAA+1.0 mg/L 6-BA),在此培养基中,愈伤组织分化产生的不定芽数量最多,速度最快,分化率最高。比较适宜诱导生根的培养基为WR4(1/2MS+0.5 g/L CH+0.5 mg/L NAA),在此培养基中,不定芽生根速度最快,数量最多,并且较为粗壮。本试验旨在探索小麦组织培养的最适条件,为今后通过基因工程手段改良小麦的品质奠定基础。

黄河三角洲贝壳堤放线菌多样性及抑菌活性

研究旨在揭示黄河三角洲贝壳堤放线菌多样性,以便从中寻找新的具有生物防治功能的微生物资源。采用3种分离培养基,利用稀释平板涂布法对贝壳堤土壤样品进行分离;通过形态特征、生理生化实验及16S rDNA基因测序对放线菌进行了分类鉴定。结果表明分离到的174株放线菌分属于10个科,13个属,其中链霉菌属(42%)和拟诺卡氏菌(11%)为优势菌属。16S rDNA基因分析表明,61%的菌株与已知菌的相似性都在99%以下,其中菌株BK-17的16S rDNA序列与同源性最近的菌株相似率仅为95.2%。以2株细菌和5株植物病原真菌作为指示菌,进行了抑菌活性测定,有94株至少对1种指示菌有抑菌作用,有8株对7种指示菌都有很强的拮抗作用。以上研究结果表明黄河三角洲贝壳堤土壤中存在丰富的放线菌资源,存在很多潜在的新菌种和活性菌株,有进一步研究和开发的价值。

农杆菌介导rd29A启动子驱动otsB基因转化紫茉莉的研究

紫茉莉为紫茉莉科紫茉莉属多年生草本植物,具有较高观赏和药用价值,对重金属和石油污染有较强修复能力。然而目前为止,紫茉莉再生和遗传转化体系尚未建立。本研究以紫茉莉为材料,初步建立起较为稳定的再生体系。通过克隆拟南芥rd29A启动子和大肠杆菌ots B基因,构建了p2300-rd29A pro-ots B植物表达载体。利用根癌农杆菌介导法对紫茉莉进行遗传转化。结果表明,当农杆菌的OD600=0.5,侵染成熟胚或带芽茎段60 min,共培养2 d,紫茉莉的转化效率较高。通过对筛选出的转基因植株进行PCR检测,显示大肠杆菌ots B基因已成功整合到紫茉莉的基因组中,并可有效的进行转录。

大肠杆菌otsAB融合基因表达载体的构建和转化小麦的初步研究

在生物或非生物胁迫的条件下,小麦的产量和质量常会受到一定的影响。基因工程技术是小麦品质改良的有效手段,但目前小麦的转化效率还比较低。通过克隆大肠杆菌ots A和ots B基因,将目的基因和p2300-GFP相连,成功构建p2300-ots AB表达载体。以普通小麦品种为材料,在建立较完善再生体系的基础上,利用根癌农杆菌介导法进行转化,将ots AB导入到受体细胞,进而获得耐盐的转基因小麦新品种。遗传转化条件的优化结果表明,当农杆菌的OD600=0.5,侵染成熟胚或愈伤组织的时间为30 min,共培养时间为3 d,小麦的转化效率最高。结果可以为今后通过基因工程技术提高小麦的抗逆能力提供参考。

滨州市农产品质量安全现状及发展对策

山东省滨州市作为黄河三角洲高效生态经济区和山东半岛蓝色经济区两大国家战略的叠加带,农产品质量安全关系到区域高效生态经济的发展和社会稳定。本文分析了滨州市农产品质量安全现状和存在的问题,提出了提高农产品质量安全意识、加强农产品质量安全制度建设、健全农产品质量安全监管体系和推行农产品标准化生产等相关对策措施。

prd29A-otsAB表达载体的构建与转化本生烟草的研究

分别以拟南芥(Arabidopsis thaliana)和大肠杆菌(Escherichia coli)的基因组DNA为模板,通过PCR技术克隆得到rd29A启动子、ots A和ots B基因,将其依次插入到p2300-gfp质粒中,从而构建p2300-prd29A-ots AB融合基因表达载体。利用农杆菌介导法将prd29A-ots AB融合基因导入到本生烟草(Nicotiana benthamiana)中,通过对转基因烟草进行筛选,初步获得具有卡那霉素抗性的转基因植株,为今后进一步研究相关基因的功能以及通过基因工程技术提高植物的抗胁迫能力奠定基础。

紫茉莉不定芽诱导和植株再生

紫茉莉(Mirabilis jalapa)观赏价值较高,是一种重要的污染修复植物。组织培养技术为植物品种改良和选育的重要途径,但紫茉莉离体快繁方面的研究尚未见有相关报道。该研究以紫茉莉叶片和茎段为外植体,通过观察和统计外植体愈伤组织和不定芽的诱导情况,分析不同植物生长物质对紫茉莉植株再生的影响。结果表明:紫茉莉带芽茎段比较适合丛生芽的诱导,当带芽茎段在MS+1.0 mg·L^(-1)6-BA+1.5 mg·L^(-1)KT+1.0 mg·L^(-1)NAA+0.05 mg·L^(-1)TDZ培养基中培养时,不定芽的增殖系数较高。无论是MS或1/2MS培养基,都可诱导不定根的产生,其中生根效果较好的培养基为1/2 MS+0.5 mg·L^(-1)NAA。该研究结果探索了紫茉莉组织培养的最适条件,根据愈伤组织诱导率和不定芽的增殖系数筛选出了适宜不定芽诱导的培养基类型,根据不定芽生根情况确定了最佳的生根诱导培养基,为建立紫茉莉高效稳定的再生和遗传转化体系奠定了基础。

大棚设施栽培对管花肉苁蓉接种及生长的影响

探究大棚设施栽培对管花肉苁蓉接种及生长的影响,为人工设施栽培管花肉苁蓉提供理论依据。测定、比较、分析大棚设施栽培与大田栽培管花肉苁蓉的接种率、鲜重、干重、可溶性糖和可溶性固形物(SSC)含量,以及柽柳的单株接种肉苁蓉个数、分枝个数、分枝长度、鲜重、干重。大棚设施栽培能显著提高管花肉苁蓉接种率66.7%,单株柽柳接种管花肉苁蓉的个数提高116.7%;柽柳的分枝数、分枝总长度及分枝平均长度依次增加28.0%、71.3%、28.7%;柽柳根、茎、光合枝及管花肉苁蓉鲜重依次增加62.3%、121.5%、93.9%、131.1%;柽柳根、茎、光合枝及管花肉苁蓉干重依次增加23.8%、116.2%、35.2%、72.7%;大棚设施栽培管花肉苁蓉鲜干比为3.8,大田露地栽培管花肉苁蓉鲜干比为2.9,大棚设施栽培管花肉苁蓉可溶性糖含量降低了16.8%,SSC含量降低了13.7%;但两者的累积量均高于大田栽培,其中可溶性糖累积量增加92.4%,SSC累积量增加99.4%。大棚设施栽培能够促进柽柳和管花肉苁蓉的生长,较大田更适宜管花肉苁蓉的生产。

耐盐菌BF40产表面活性剂特性及其对石油污染盐渍化土壤的修复能力

为强化微生物修复石油污染盐渍化土壤并提供高效产表面活性剂菌种,研究了耐盐菌SerratiaBF40产生物表面活性剂的条件、动力学特征以及对石油污染盐渍化土壤的修复能力。结果表明:BF40产表面活性剂最适碳源为牛肉膏,最适氮源为氯化铵。在30～37℃,pH7.0～9.0范围内产表面活性剂的能力较强。BF40在对数生长期产生表面活性剂,产生方式与细胞生长相关联。在含2.0%NaCl的培养基中,BF40可将发酵液表面张力降低到32.0mN·m-1,EI24达到66.9%。在含盐量为0.22%和0.61%土壤中添加BF40,降解40d后,土壤总石油烃降解率达到50%以上,表明BF40在强化修复石油污染盐渍化土壤中具有很大的应用潜力。

大肠杆菌otsA基因的克隆和转化本生烟草

海藻糖是一类重要的渗透调节剂,可以提高植物抵抗多种非生物胁迫的能力。6-磷酸海藻糖合成酶(TPS)是海藻糖生物合成的关键酶,在大肠杆菌中,ots A基因编码TPS。本试验通过PCR技术克隆ots A基因,构建p2300-ots A-GFP表达载体,用农杆菌介导的方法将ots A基因导入到本生烟草中。对筛选获得的转基因植株进行检测表明,ots A基因已成功整合到本生烟草的基因组中,并能进行有效转录。而且研究发现,转基因幼苗在含有150mmol/L Na Cl的培养基中能够生长,具有一定的抗盐胁迫能力。

一株产生物表面活性剂耐盐碱菌株的分离及鉴定

从黄河三角洲石油污染盐渍土中分离获得产生物表面活性剂的耐盐碱菌株,用于治理该地区的土壤污染问题。采用富集培养方法,分离得到4株优势菌,其中菌株BG降表面张力的能力最强。经生理生化实验和16SrRNA序列分析,鉴定菌株BG属于芽孢杆菌属(Bacillus sp.)。对该菌株产生物表面活性剂的性能进行研究,结果表明:菌株BG在37℃、180r/min下振荡培养48h,可将发酵液的表面张力由初始的58.4mN/m降低至25.1mN/m;温度对菌株BG产生物表面活性剂的影响较大,最适温度是37℃,此温度下菌株BG有良好的耐盐碱特性,显著降低发酵液表面张力。采用酸沉法提取了菌株BG产生的生物表面活性剂,鉴定为一种脂蛋白类物质,其中脂类和蛋白质质量分数分别为64.7%、35.3%。

产生物表面活性剂耐盐菌的筛选鉴定及其对石油污染盐渍化土壤的修复作用

为得到高效产生物表面活性剂耐盐菌,从黄河三角洲石油污染盐渍化土壤中分离出41株细菌,经测定发酵液排油活性、表面张力和乳化值(EI24),得到1株高效产生物表面活性剂耐盐菌BF40.通过形态、生理生化特征和16S rDNA序列分析,确定该菌为沙雷氏菌(Serratia sp.).通过液体培养试验,研究了BF40的耐盐特性和降解原油能力,并通过室内土壤培养试验研究了BF40及其产生的生物表面活性剂对石油污染盐渍化土壤的修复作用.结果表明,在含5～70 g·L-1NaCl液体培养基中BF40生长良好,属中度耐盐菌.BF40能有效利用原油,在含10 g·L-1NaCl液体培养基中培养7d,原油降解率达到56.7%.添加BF40产生的生物表面活性剂或接入BF40能明显促进盐渍化土壤石油烃的降解,修复60 d,土壤石油去除率与对照相比分别提高了24.6%和13.4%.接种BF40能降低土壤溶液表面张力,明显提高土壤脱氢酶活性,更能有效促进沥青质降解.添加生物表面活性剂土壤脱氢酶活性与对照相比没有显著差异,但更能有效降低土壤溶液表面张力,促进饱和烃降解,表明接种BF40和添加生物表面活性剂可能对促进石油污染盐渍化土壤的生物修复存在不同作用机制.

一株耐盐解磷真菌的筛选、鉴定及其发酵优化

从黄河三角洲盐碱土壤中分离到一株真菌PSF2,该菌具有极强的溶磷能力,在改良孟金娜液体培养基中培养72 h,发酵液中的可溶性磷含量高达1042.0 mg L-1,且兼具耐盐特性,最高可以耐受12.5%的盐浓度。经形态观察及ITS序列分析,初步确定该菌株为草酸青霉(Penicillium oxalicum),Gen Bank登录号为KJ957935。在单因素试验基础上,采用正交试验设计对菌株PSF2的发酵条件进行了优化,结果表明菌株PSF2的最佳培养基组成是蔗糖15 g L-1、尿素0.14 g L-1、Na Cl 3.0%,p H 9.0。进一步研究表明,在含盐量0.45%的土壤中添加PSF2,培养20 d,土壤中有效磷含量可增加20.9%。

拟南芥AtTPS1基因的生物信息学分析与功能预测

目的:对At TPS1基因及其编码产物的结构、表达定位、分子进化、蛋白互作等进行预测和分析。方法:利用在线网络生物信息学相关数据库和分析软件对目的蛋白的同源性、保守结构域、疏水性、跨膜区进行分析;并对基因的表达情况、蛋白质的亚细胞定位、蛋白质间的相互作用进行预测。结果:At TPS1表现出较强的亲水性,在多肽链的内部可能存在跨膜结构和保守结构域。在拟南芥的不同组织和器官都可检测到At TPS1基因的表达,尤其在茎顶端分生组织、种子和花中表达强烈。At TPS1在叶绿体中分布最为广泛,其次是线粒体和细胞核。至少有四类蛋白与At TPS1之间存在较为强烈的相互作用。结论:生物信息学分析结果表明,At TPS1功能复杂,很可能在细胞分裂、胚胎和花发育、种子萌发、光合作用、物质代谢等过程中充当重要的角色。